一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体及其制备方法和应用。该噬菌体名称为沙门氏菌噬菌体(Salmonella phage)MDASK，保藏号为GDMCC NO：62376

【技术实现步骤摘要】
一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物
，特别涉及一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]沙门菌属于肠道致病菌，其感染人和动物后可引起伤寒、急性胃肠炎以及败血症等疾病，是全球范围内引起食物中毒的常见病原菌之一；也是导致人类死亡的第三大致病菌。近年来，肯塔基沙门菌(Salmonella Kentucky)已成为引起食源性疾病常见的沙门菌血清型之一。预防和治疗沙门菌感染的主要手段仍是抗生素，但由于抗生素长期和不合理的使用，使得沙门菌产生了广泛的耐药性。据报道，沙门菌属的多重耐药率已从20世纪90年代的20％增加到了本世纪初的70％，且耐药性可通过食物链或环境在人与食品、人与人或人畜之间传递。这对食品性动物生产和公共卫生安全造成极大的危害，同时，也对全球的食品安全和人类健康产生了巨大的威胁。
[0003]在导致沙门菌中毒的食品中，畜禽产品(如肉、蛋、奶)占90％。鸡肉是世界范围内主要的动物性食品之一，且肉鸡在养殖、屠宰，以及鸡肉贮藏、加工和销售过程中极易受到沙门菌的污染。有研究对鸡屠宰场主要加工环节中沙门菌的污染情况进行了监测，结果表明在屠宰的四个环节(浸烫、预冷、分割和运输)中，沙门菌的检出率呈现先下降后升高的趋势。
[0004]为了降低畜禽生产链中沙门菌的污染，人们常采取冲淋、伽马辐射、使用噬菌体制剂、控制啮齿动物和昆虫、控制人员和设备的移动和使用有机酸制剂、微生态制剂、专用消毒剂等一系列的措施。其中，噬菌体制剂是近些年人们较为关注的话题。噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的病毒，发现之初便用于治疗细菌感染。与传统抗生素相比，噬菌体具有分布广、易筛选、高度的宿主专一性、增殖能力强、安全性高、研发成本低等优势。随着多重耐药菌的广泛流行，噬菌体治疗细菌感染重新引起了人们的重视，且因其高效特异识别并裂解宿主菌的特性被认为是最具潜力的抗生素替代品之一。
[0005]Mahmoud等人(Mahmoud M,Askora A,Barakat AB,et al.Isolation and characterization of polyvalent bacteriophages infecting multi drug resistant Salmonella serovars isolated from broilers in Egypt[J].International Journal of Food Microbiology,2018,266:8
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13.)分离出了三株多价噬菌体，并命名为Salmacey1、Salmacey2和Salmacey3，它们都能裂解4种不同血清型的沙门菌，同时还能裂解柠檬酸杆菌。其中Salmacey1和Salmacey2属于长尾噬菌体科，潜伏期分别为35min和40min，爆发期分别为85min和100min，裂解量分别为80PFU/cell和90PFU/cell。而Salmacey3属于肌尾噬菌体科，潜伏期为60min，爆发期为80min，裂解量为110PFU/cell。还有一株肯塔基沙门噬菌体(未命名)属于长尾噬菌体科，潜伏期为10min，爆发期为15min，裂解量为100PFU/cell。这些肯塔基沙门噬菌体均存在潜伏期长、裂解量低且感染复数较大的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供一株用于制备所述噬菌体的多重耐药肯塔基沙门菌。
[0008]本专利技术的再一目的在于提供所述多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体的应用。
[0009]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0010]一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体，名称为沙门氏菌噬菌体(Salmonella phage)MDASK，保藏号为GDMCC NO：62376
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B1，该噬菌体于2022年4月12日保存于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。
[0011]一株用于制备所述噬菌体的多重耐药肯塔基沙门菌，名称为肯塔基沙门菌(Salmonella sp.Kentucky)10A20，保藏号为GDMCC NO：62376，该菌株于2022年4月12日保存于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。
[0012]一种制备所述多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体的方法，将所述多重耐药肯塔基沙门菌接种于液体培养基中，培养至对数生长期，然后接入多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体进行噬菌体培养。
[0013]所述的液体培养基优选为LB肉汤培养基。
[0014]所述的多重耐药肯塔基沙门菌的培养条件为：37℃，150～200rmp振荡培养4～6h。
[0015]所述的多重耐药肯塔基沙门菌与噬菌体按感染复数(MOI)为0.0001～1000配比计算；优选为按感染复数(MOI)为0.0001配比计算。
[0016]所述的噬菌体的培养温度为37～80℃；优选为37～50℃。
[0017]所述的噬菌体的培养pH范围为4～11。
[0018]所述的噬菌体的培养时间为1～4h；优选为3.5h。
[0019]所述的多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体在制备杀菌剂中的应用。
[0020]所述的多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体以及所述的多重耐药肯塔基沙门菌在制备杀菌剂中的应用。
[0021]所述的杀菌剂中的菌包括沙门菌；优选为肯塔基沙门菌，包括畜禽生产链中肯塔基沙门菌；优选为肯塔基沙门菌(Salmonella sp.Kentucky)10A20。
[0022]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0023](1)本专利技术以一株多重耐药肯塔基沙门菌为宿主菌分离得到了一株噬菌体，该噬菌体对多株多重耐药的肯塔基沙门菌具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体以降低畜禽生产链中沙门菌污染提供了噬菌体来源。
[0024](2)本专利技术提供的沙门菌噬菌体，当沙门氏菌培养物中加入噬菌体后，1小时内有明显的裂解效果，具有较强的裂解活性，表现出良好的应用前景。
[0025](3)本专利技术提供的沙门菌噬菌体，在70℃的条件下作用30min，效价维持在103PFU/mL，依然具有生物活性；在pH＝11时，效价可达到108PFU/mL，在pH＝2时，仍有噬菌体存活；表现出了较高的温度耐受性和较宽的酸碱耐受范围，效价较高，安全有效。
[0026](4)本专利技术提供的噬菌体最佳MOI较小，潜伏期较短且裂解量较高，可为降低畜禽生产链中肯塔基沙门菌污染的噬菌体制剂奠定基础。
附图说明
[0027]图1是本专利技术中的多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定结果图；其中，A为噬菌体形成的噬菌斑；B为噬菌体(MDASK)的形态。
[0028]图2是本专利技术中的噬菌体的最佳感染复本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体，其特征在于：名称为沙门氏菌噬菌体(Salmonella phage)MDASK，保藏号为GDMCC NO：62376
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B1，该噬菌体于2022年4月12日保存于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。2.一株用于制备权利要求1所述噬菌体的多重耐药肯塔基沙门菌，其特征在于：名称为肯塔基沙门菌(Salmonella sp.Kentucky)10A20，保藏号为GDMCC NO：62376，该菌株于2022年4月12日保存于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。3.一种制备权利要求1所述多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体的方法，其特征在于：将权利要求2所述的多重耐药肯塔基沙门菌接种于液体培养基中，培养至对数生长期，然后接入多重耐药肯塔基沙门菌烈性噬菌体进行噬菌体...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋红霞，蔡萍，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：