一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法，涉及免疫检测技术领域。本发明专利技术提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3，并基于该杂交瘤细胞株1D3产生的单克隆抗体构建了O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体竞争性ELISA检测试剂盒和检测方法，只能检测出O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗免疫血清抗体，用于区分O型口蹄疫野毒、全病毒灭活疫苗和类病毒颗粒疫苗免疫血清，准确性高。准确性高。准确性高。

【技术实现步骤摘要】
一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法


[0001]本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法。

技术介绍

[0002]口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染的动物疫病。该病感染对象是猪、牛、羊及其他家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。该病具有感染动物种类多、传播速度快、传染性极强、引起的经济损失巨大等特点，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病。
[0003]口蹄疫病毒存在多种血清型，如O型、亚洲I型、A型、A型变异毒株以及C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型等，O型呈地方性流行，亚洲I型持续多年无疫，A型零星散发，因此控制口蹄疫传入，控制和消灭口蹄疫的工作仍将面临不少困难和挑战，任重道远；目前已有多种可检测不同血清型口蹄疫的试剂盒和方法，尤其是对于O型口蹄疫的鉴定种类较多，但是还只能简单区分野毒和灭活疫苗血清抗体。还未有将口蹄疫类病毒颗粒与野毒或灭活疫苗血清抗体加以区分的方法。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法，可对O型口蹄疫野毒、全病毒灭活疫苗和类病毒颗粒疫苗免疫血清进行区分，灵敏度高。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3，所述杂交瘤细胞株1D3的保藏编号为CCTCC NO：C2022156。
[0007]本专利技术还提供了上述杂交瘤细胞株1D3在制备检测O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体试剂中的应用。
[0008]优选的，所述试剂包括竞争性ELISA检测试剂。
[0009]本专利技术还提供了一种O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体竞争性ELISA检测试剂盒，包括上述杂交瘤细胞株1D3产生的单克隆抗体。
[0010]优选的，所述竞争性ELISA检测试剂盒中还包括洗涤液、封闭液、稀释液、底物液和终止液。
[0011]优选的，所述洗涤液为含Tween
‑
20的0.01mol/L PBST缓冲液，pH值为7.4；所述PBST缓冲液中Tween
‑
20的质量分数为0.05％；
[0012]所述封闭液为含BSA和Tween
‑
20的PBS缓冲液，pH值为7.4；所述PBS缓冲液中BSA的质量分数为3％，Tween
‑
20的质量分数为0.05％；
[0013]所述稀释液为含马血清和Tween
‑
20的PBS缓冲液，pH值为7.4；所述PBS缓冲液中马
血清的质量分数为5％，Tween
‑
20的质量分数为0.05％；
[0014]所述底物液为可溶性TMB；
[0015]所述终止液为1mol/L H2SO4溶液。
[0016]本专利技术还提供了一种O型口蹄疫类病毒颗粒血清抗体的检测方法，包括以下步骤：利用上述竞争性ELISA检测试剂盒进行竞争性ELISA检测后，分别检测阳性对照、阴性对照和样本的OD
450
，并计算阻断率；
[0017]所述阳性对照为利用O型口蹄疫类病毒颗粒免疫动物后的血清，进行竞争性ELISA检测后的阻断率＞50％；
[0018]所述阴性对照为利用O型口蹄疫灭活病毒疫苗或O型口蹄疫野毒免疫动物后的血清，进行竞争性ELISA检测后的OD
450
≥0.5；
[0019]当被检样本的阻断率≥40％，证明有O型口蹄疫类病毒颗粒抗体存在。
[0020]优选的，当被检样本的阻断率≤32％，证明没有O型口蹄疫类病毒颗粒抗体存在；当被检样本的阻断率在(32％，40％)区间内，需重新检测。
[0021]优选的，以N为阴性对照OD
450
的平均值，P为阳性对照OD
450
的平均值，S为被检样本OD
450
的平均值；
[0022]以B为阻断率，阳性对照的阻断率
[0023]被检样本的阻断率
[0024]优选的，利用所述竞争性ELISA检测试剂盒进行竞争性ELISA检测前，还包括对杂交瘤细胞株1D3产生的单克隆抗体进行酶标记，得到酶结合物；所述酶标记包括辣根过氧化物酶标记。
[0025]有益效果：本专利技术提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3，并基于该杂交瘤细胞株1D3产生的单克隆抗体构建了O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体竞争性ELISA检测试剂盒和检测方法，只能检测出O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗免疫血清抗体，用于区分O型口蹄疫野毒、全病毒灭活疫苗和类病毒颗粒疫苗免疫血清。在本专利技术实施例中，分别利用现有的经商品化O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒和本专利技术所述试剂盒，对已知背景样品进行检测，商品化O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测全为阳性；利用本专利技术提供的试剂盒进行检测，检测结果与背景资料相符，准确性高。
[0026]生物保藏信息
[0027]杂交瘤细胞株1D3，已于2022年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，具体地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2022156。
附图说明
[0028]图1为1D3四参数拟合曲线，y＝(A
‑
D)/[1+(x/C)
B
]+D，其中A＝2.22406，B＝7.56580，C＝9.73977，D＝0.05189，r2＝0.99926；
[0029]图2为3B8四参数拟合曲线，y＝(A
‑
D)/[1+(x/C)
B
]+D，其中A＝2.65852，B＝26.86142，C＝12.27902，D＝0.87078，r2＝0.93687；
[0030]图3为6G3四参数拟合曲线，y＝(A
‑
D)/[1+(x/C)
B
]+D，其中A＝3.68741，B＝
6.47626，C＝7.05766，D＝0.07416，r2＝0.99898。
具体实施方式
[0031]本专利技术提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3，所述杂交瘤细胞株1D3的保藏编号为CCTCC NO：C2022156。
[0032]本专利技术所述杂交瘤细胞株1D3的筛选方法，包括将O型口蹄疫类病毒颗粒对动物进行免疫、细胞融合、抗体检测和筛选，而后筛选只结合O型口蹄疫类病毒颗粒的单克隆抗体，并结合四参数拟合曲线筛选得到最终的杂交瘤细胞株1D3。本专利技术所述杂交瘤细胞株1D3的四参数拟合曲线，以单抗梯度稀释的对数值为横坐标，OD值为纵座标，随样品稀释度的增大，OD值呈减小趋势，且整体呈现S形，有明显的平台期。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3，其特征在于，所述杂交瘤细胞株1D3的保藏编号为CCTCC NO：C2022156。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株1D3在制备检测O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体试剂中的应用。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述试剂包括竞争性ELISA检测试剂。4.一种O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗血清抗体竞争性ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述杂交瘤细胞株1D3产生的单克隆抗体。5.根据权利要求4所述竞争性ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述竞争性ELISA检测试剂盒中还包括洗涤液、封闭液、稀释液、底物液和终止液。6.根据权利要求5所述竞争性ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含Tween
‑
20的0.01mol/L PBST缓冲液，pH值为7.4；所述PBST缓冲液中Tween
‑
20的质量分数为0.05％；所述封闭液为含BSA和Tween
‑
20的PBS缓冲液，pH值为7.4；所述PBS缓冲液中BSA的质量分数为3％，Tween
‑
20的质量分数为0.05％；所述稀释液为含马血清和Tween
‑
20的PBS缓冲液，pH值为7.4；所述PBS缓冲液中马血清的质量分数为5％，Tween
‑
20的质量分数为0.05％；所述底物液为可...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪峰，康斌，董鹏，赵炳武，武玉梅，张金龙，张满新，王家福，
申请(专利权)人：杭州佑本动物疫苗有限公司，
类型：发明
国别省市：