一种多肽在制备马卵巢发育保护剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种多肽在制备马卵巢发育保护剂中的应用，属于动物繁殖技术领域。该多肽为来源于枣树果实的Snakin

【技术实现步骤摘要】
一种多肽在制备马卵巢发育保护剂中的应用
[0001]本案为分案申请，原申请的专利技术名称为：一种马属动物繁殖促进剂，原申请的申请日为：2020
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11，原申请的申请号为：CN202011459061.6。


[0002]本专利技术属于动物繁殖
，尤其涉及一种多肽在制备马卵巢发育保护剂中的应用。

技术介绍

[0003]卵巢是一种动态变化的实质性器官，在哺乳动物的发情周期中，卵巢中的卵泡需要经历募集，选择，优势化等生理过程。卵泡的发育是涉及多种细胞，多个阶段的复杂过程。其中，颗粒细胞和卵母细胞是构成卵泡的重要细胞，卵泡的形成需要颗粒细胞与卵母细胞之间密切的相互作用。颗粒细胞能够有效的支持卵母细胞的发育。因此，有效的促进颗粒细胞的增殖，减少颗粒细胞的凋亡，可以有效的促进哺乳动物的繁殖能力。
[0004]Snakin
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Z是来源于枣树果实的一种多肽。其包括31个氨基酸，具体的氨基酸序列为CARLNCVPKGTSGNTETCPCYASLHSCRKYG，分子质量为3318.82Da。目前，Snakin
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Z的已知功能为抑制细菌和真菌，并能够抑制乙酰胆碱酯酶，而关于Snakin
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Z在马属动物繁殖中的应用尚未可知。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种马属动物繁殖促进剂。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了Snakin
‑r/>Z多肽在马属动物繁殖中的应用。
[0007]其次，本专利技术提供了Snakin
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Z多肽在制备马属动物繁殖促进剂中的应用。
[0008]其次，本专利技术提供了Snakin
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Z多肽在制备促进马属动物卵泡发育促进剂中的应用。
[0009]其次，本专利技术提供了Snakin
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Z多肽在制备促进马属动物卵巢颗粒细胞增殖促进剂中的应用。
[0010]其次，本专利技术提供了Snakin
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Z多肽在制备抑制马属动物卵巢颗粒细胞凋亡抑制剂中的应用。
[0011]其次，本专利技术提供了一种马属动物繁殖促进剂，所述促进剂包括有效剂量的Snakin
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Z多肽。
[0012]其次，本专利技术提供了一种马属动物卵泡发育促进剂，所述促进剂包括有效剂量的Snakin
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Z多肽。
[0013]其次，本专利技术提供了一种马属动物卵巢颗粒细胞增殖促进剂，所述促进剂包括有效剂量的Snakin
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Z多肽。
[0014]其次，本专利技术提供了一种马属动物卵巢颗粒细胞凋亡抑制剂，所述抑制剂包括有
效剂量的Snakin
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Z多肽。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术发现Snakin
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Z多肽能够有效的促进马卵巢颗粒细胞的增殖，并有效的降低马卵巢颗粒细胞的凋亡，从而可以用于制备马属动物卵巢颗粒细胞促进剂，卵巢颗粒细胞凋亡抑制剂，并进而用于马属动物卵泡发育促进剂和马属动物繁殖促进剂。
附图说明
[0016]图1 EDU染色结果图。
[0017]图2 EDU染色结果定量结果图。
[0018]图3 Caspase
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3酶活力检测结果图。
[0019]图4 Western blot检测结果图。
具体实施方式
[0020]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0021]实施例1马卵巢颗粒细胞的分离培养（1）本试验所使用的马卵巢来源于本公司，将取出的马卵巢使用含有双抗的PBS溶液进行多次漂洗后，小心的去除卵巢周围的脂肪组织和被膜；（2）将卵巢置于含有双抗的DMEM
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F12培养液中，在显微镜下使用无菌注射器刺破卵泡，引导卵巢颗粒细胞流出；（3）收集含有马卵巢颗粒细胞的培养液，使用200目的细胞筛将细胞收集至15ml的离心管中；（4）在4℃，1000rpm/min条件下，离心5min，去除上清，收集马卵巢颗粒细胞；（5）使用含有双抗的PBS洗涤细胞，再次进行离心，离心后去除上清，使用含5%胎牛血清和双抗的DMEM
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F12培养基进行重悬；（6）调整细胞密度为1
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106/m L后，将细胞接种于细胞培养板中，24h后更换培养液，待细胞生长至90%左右时进行传代。
[0022]实施例2EDU染色实验（1）将马卵巢颗粒细胞接种于96孔板中，使用0mg/ml的Snakin
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Z多肽和0.5 mg/ml的Snakin
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Z多肽进行处理；（2）处理24h之后，去除培养基，加入100ul EDU进行孵育；（3）弃去EDU，使用PBS清洗细胞2次，加入4%的多聚甲醛室温条件下固定30min；（4）弃去4%多聚甲醛，加入100ul的甘氨酸孵育5min；（5）弃去甘氨酸，使用PBS清洗细胞2次，加入100ul 0.5% Triton
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100处理10min；（6）弃去Triton
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100，使用PBS清洗细胞2次，加入100ul Apollo处理10min；（7）弃去Apollo，加入100ul 0.5% Triton
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100处理2次，每次10min；（8）加入100ul的甲醇清洗2次，每次5min，加入DAPI染色10min，PBS清洗3次，显微镜下观察拍照，选取随机3个视野EDU染色细胞数。
[0023]实验结果如图1和图2所示，从图中可知，0.5mg/ml Snakin
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Z多肽组的EDU染色数量显著多于0mg/ml Snakin
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Z多肽组，说明Snakin
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Z多肽能够促进马卵巢卵母细胞的增殖。
[0024]实施例3Caspase3酶活性检测（1）将马卵巢颗粒细胞接种于细胞培养板中，对照组添加0mg/ml的Snakin
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Z多肽，实验组1添加150umol H2O2和0mg/ml的Snakin
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Z多肽，实验组2添加150umol H2O2和0.5mg/ml的Snakin
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Z多肽处理6h；（2）按照碧云天Caspase3活性检测试剂盒说明书（C1115）测定pNA标准曲线；（3）吸取细胞培养液，备用，使用胰酶将马卵巢颗粒细胞消化，收集至备用的细胞培养液中；（4）600g 4℃离心5min收集细胞，小心吸除上清，使用PBS洗涤一次；（5）按照每200万细胞加入100ul裂解液的比例加入细胞裂解液，重悬沉淀，冰浴裂解15min；（6）4℃ 16000g离心15min，将上清转移至冰浴预冷的离心管中，按照说明书测定Caspase3酶活性。
[0025]从图3可以看出，Snakin
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Z多肽能够有效的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Snakin
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Z多肽在制备马卵巢颗粒细胞氧化损伤保护剂中的应用，其特征在于，所述Snakin
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Z多肽的氨基酸序列为CARLNCVPKGTSGNTETCPCYASLHSCRKYG。2.Sna...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹敬清，邹志钢，张凤，张建军，周群，郭海鹏，
申请(专利权)人：伊犁德瑞骏发生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：