一种马的细管冻精制作方法技术

本发明专利技术涉及冻精制作技术领域，具体涉及一种马的细管冻精制作方法；包括以下步骤：S1、配制稀释液和冷冻液，S2、采精人员从公马上采集采精，S3、对采集的精液检查与处理，S4、将精液离心、再稀释、灌装和平衡，S5、将S4中的冻精细管冷冻；本发明专利技术通过配制稀释液和冷冻液、对采集的精液检查与处理、将精液离心、再稀释、灌装和平衡以及将冻精细管冷冻，能够有效的提高解冻后的存活率，进而确保了后继配种流程的配怀率和产仔率能有相应的提高，也有效提高精液的利用率，同时，能够有效的降低畸形率。能够有效的降低畸形率。能够有效的降低畸形率。

【技术实现步骤摘要】
份、一水柠檬酸钾1
‑
3份、羟乙基哌嗪乙硫磺酸8
‑
10份、无菌蒸馏水100
‑
200份、脱脂奶100
‑
200份、甘油1
‑
3份、卵黄1
‑
3份；
[0015]所述冷冻液的配置方法为：称取2
‑
吗啉乙磺酸、无水葡萄糖、一水乳糖、五水棉籽糖、五水柠檬酸钠、一水柠檬酸钾和羟乙基哌嗪乙硫磺，并使用无菌蒸馏水配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在配制好的溶液中加入2％卵黄和2.5％甘油，即可制得冷冻液。
[0016]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S2中，采精人员从公马上采集采精的方法为：
[0017]在公马充分勃起并爬跨假台马后，采精员站立于公马左侧，左手持假阴道，右手握成半月状揽住公马阴茎的中后部，将阴茎顺势引导入假阴道；阴茎在假阴道内来回抽动数次完成射精；采精人员将假阴道及时竖起并跟随公马后退，待龟头、阴茎从假阴道内出来之后，移开假阴道，完成公马采精。
[0018]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S3中，对采集的精液检查与处理，包括以下步骤：
[0019]S301、准备：将室温维持在26
‑
28℃；接触精液的物品提前4h放在37℃恒温箱中；稀释液提前1h放在37℃恒温水浴锅中备用；离心液和冷冻液置于37℃水浴中半小时后取出、擦干并置于室温备用；
[0020]S302、预处理：采集的原精传递入精液处理室后，把集精瓶放入37℃的恒温水浴锅中，精液用四层消毒纱布过滤，然后用肉眼观察原精液的颜色，记录原精液量；
[0021]S303、精液检查、精液量及密度测定：根据气味和色泽，确认精液是否正常；从37℃无菌恒温干燥箱中取出纱布、刻度瓶，将精液迅速用灭菌纱布过滤至刻度瓶中，除去精液内的胶状物后再读取精液量；采用精子密度测定仪准确测定精子密度；
[0022]S304、精子活率检测：用干净的玻璃棒蘸取一滴稀释后的精液滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片，其间充满精液，不存留气泡；在200
‑
400倍显微镜下观察精子活率。根据前进运动精子数的多少评定精子活率，计算公式为：
[0023]S305、精液稀释：采用稀释液对采集的精液进行稀释。
[0024]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S305中，采用稀释液对采集的精液进行稀释，包括以下步骤：
[0025]S3050、将稀释精液所用的器具置于37℃恒温环境中，用等温稀释液冲洗2
‑
3次；
[0026]S3051、将新采集的精液及时稀释，并置于35℃恒温水浴锅中；
[0027]S3052、将稀释液沿杯壁缓缓加入精液中，然后轻轻转动精液瓶或用灭菌玻璃棒搅动，混合均匀。
[0028]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S4中，将精液离心、再稀释、灌装和平衡，包括以下步骤：
[0029]S401、离心：将稀释后精液分装至50ml离心管中，在每只离心管底部加入离心液，然后将离心管轻轻放于离心机中进行离心，离心机参数设定为：25℃，1000
‑
1800g，离心10
‑
20min；
[0030]S402、离心结束后，打开离心机，取出离心管至蠕动泵安放处，用蠕动泵依次将离
心管上层上清液及下层离心液吸除，留下精子粥，向精子粥中加入适量冷冻稀释液，上下颠倒混匀后，用全精子分析仪检测离心后精液质量，记录其密度、活率、前向运动率、畸形率等精液信息，确定加入的冷冻稀释液的量，保证其终密度为1
×
108个/ml；
[0031]S403、平衡：根据离心后精液质量检测报告中所得数据，对离心后所得的精液进行进一步稀释，将稀释好的精液放置在0
‑
4℃平衡柜中水浴平衡或直接平衡120min；
[0032]S404、打印冻精细管：采用细管打印机打印冻精细管；
[0033]S405、灌装细管：使用精液灌装机，将冷却至0
‑
4℃的精液灌装至打印好的细管中。
[0034]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S404中，采用细管打印机打印冻精细管，包括以下步骤：
[0035]S4040、根据离心后精液质量检测报告中所得数据，得出本次制作的冻精细管数，使用细管打印机打印精液分装细管，所印信息包括公马代号、品种代号、冻精生产日期、生产单位代号；
[0036]S4041、打开细管打印机，输入需要打印的内容，选择打印管数，进行细管打印；
[0037]S4042、将打印好的细管按照正确的顺序码放在细管托架上并置于0
‑
4℃的平衡柜中降温至0
‑
4℃，以备灌装使用。
[0038]本专利技术进一步设置为：在所述步骤S5中，将S4中的冻精细管冷冻，包括以下步骤：
[0039]S501、上架：将平衡、封装后的冻精细管码放在冷冻托架上；
[0040]S502、冷冻：将全自动精液冷冻仪预降温至0
‑
4℃，将灌装有精液的细管放入全自动精液冷冻仪中冷冻，冷冻结束后，取出细管装入拇指管，并放入液氮罐中保存。
[0041]有益效果
[0042]采用本专利技术提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：
[0043]本专利技术通过配制稀释液和冷冻液、对采集的精液检查与处理、将精液离心、再稀释、灌装和平衡以及将冻精细管冷冻，能够有效的提高解冻后的存活率，进而确保了后继配种流程的配怀率和产仔率能有相应的提高，也有效提高精液的利用率，同时，能够有效的降低畸形率，具有更广阔的市场前景，更适宜推广。
附图说明
[0044]图1为一种马的细管冻精制作方法的流程图。
具体实施方式
[0045]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0046]下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。
[0047]实施例1
[0048]一种马的细管冻精制作方法，包括以下步骤：
[0049]步骤一、配制稀释液和冷冻液。
[0050]稀释液的配置方法为：称取2
‑
吗啉乙磺酸7.8g、无水葡萄糖50g、一水乳糖3g、五水
棉籽糖3g、五水柠檬酸钠0.6g、一水柠檬酸钾0.82和羟乙基哌嗪乙硫磺9.52，并使用无菌蒸馏水1000ml配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶1000ml，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、配制稀释液和冷冻液；S2、采精人员从公马上采集采精；S3、对采集的精液检查与处理；S4、将精液离心、再稀释、灌装和平衡；S5、将S4中的冻精细管冷冻。2.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述稀释液包括如下重量份的原料：2
‑
吗啉乙磺酸6
‑
8份、无水葡萄糖40
‑
60份、一水乳糖2
‑
4份、五水棉籽糖2
‑
4份、五水柠檬酸钠1
‑
3份、一水柠檬酸钾1
‑
3份、羟乙基哌嗪乙硫磺酸8
‑
10份、无菌蒸馏水100
‑
200份、脱脂奶100
‑
200份、卵黄1
‑
3份；所述稀释液的配置方法为：称取2
‑
吗啉乙磺酸、无水葡萄糖、一水乳糖、五水棉籽糖、五水柠檬酸钠、一水柠檬酸钾和羟乙基哌嗪乙硫磺，并使用无菌蒸馏水配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在配制好的溶液中加入5％卵黄，即可制得稀释液。3.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述冷冻液包括如下重量份的原料：2
‑
吗啉乙磺酸6
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8份、无水葡萄糖40
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60份、一水乳糖2
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4份、五水棉籽糖2
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4份、五水柠檬酸钠1
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3份、一水柠檬酸钾1
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3份、羟乙基哌嗪乙硫磺酸8
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10份、无菌蒸馏水100
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200份、脱脂奶100
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200份、甘油1
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3份、卵黄1
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3份；所述冷冻液的配置方法为：称取2
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吗啉乙磺酸、无水葡萄糖、一水乳糖、五水棉籽糖、五水柠檬酸钠、一水柠檬酸钾和羟乙基哌嗪乙硫磺，并使用无菌蒸馏水配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在配制好的溶液中加入2％卵黄和2.5％甘油，即可制得冷冻液。4.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S2中，采精人员从公马上采集采精的方法为：在公马充分勃起并爬跨假台马后，采精员站立于公马左侧，左手持假阴道，右手握成半月状揽住公马阴茎的中后部，将阴茎顺势引导入假阴道；阴茎在假阴道内来回抽动数次完成射精；采精人员将假阴道及时竖起并跟随公马后退，待龟头、阴茎从假阴道内出来之后，移开假阴道，完成公马采精。5.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S3中，对采集的精液检查与处理，包括以下步骤：S301、准备：将室温维持在26
‑
28℃；接触精液的物品提前4h放在37℃恒温箱中；稀释液提前1h放在37℃恒温水浴锅中备用；离心液和冷冻液置于37℃水浴中半小时后取出、擦干并置于室温备用；S...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹敬清，邹志钢，张凤，张建军，盛俊，王展展，周群，郭海鹏，荆海涛，
申请(专利权)人：伊犁德瑞骏发生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：