一种血清外泌体miR10作为急性白血病的生物标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种血清外泌体miR10作为急性白血病的生物标志物的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术以外泌体miRNA作为急性白血病的诊断标志物，提出其调控的通路机理，并指出AML患者血浆中存在细胞释放的外泌体，及其表面携带AML相关的特异性表面标志，为急性白血病的诊断和治疗提供了新思路。病的诊断和治疗提供了新思路。病的诊断和治疗提供了新思路。

【技术实现步骤摘要】
一种血清外泌体miR10作为急性白血病的生物标志物的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种血清外泌体miR10作为急性白血病的生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]急性白血病(AML)是一种克隆性浆细胞异常增殖的恶性疾病，并伴有单克隆免疫球蛋白增多现象，是血液系统第二大常见恶性肿瘤。其临床表现为血钙增高(calCIum elevation)、肾功能损伤(renal insuffiCIency)、贫血(anemia)、溶骨性损伤(bone disease)等，即CRAB症状。主要通过细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学的方法进行诊断和分型，但目前AML的诊断、监测尚缺乏有效可靠的特异性分子标志物。
[0003]外泌体(Exosome)是直径为50
‑
150nm膜性囊泡，广泛分布在尿液、血液、脑脊液和其他体液中。几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体。外泌体内含有蛋白质、脂类、miRNA等各种生物活性物质，可以被相邻或远处细胞摄取，并调节受体细胞的功能。因此外泌体可以作为不同细胞之间生物通信的桥梁。外泌体中的miRNA不易受到RNA降解酶的影响，浓度比较稳定。研究发现外泌体miRNA可以作为很多疾病的诊断标志物，同时参与了很多疾病的发生发展。
[0004]多数AML患者治疗后仍会复发并最终导致死亡。大量研究发现细胞外miRNA富集在外泌体中，且受其表面膜的保护而具有很好的稳定性，是一种理想的分子标志物，目前多种实体肿瘤均已检测到肿瘤特异性血清外泌体miRNA。因此，在血液肿瘤患者血清外泌体miRNA中筛选特异性肿瘤标志物具有较大的研究潜力和应用价值，进一步寻找新的AML特异性miRNA及其下游基因，对于阐明血液病的发生机制，对发现新型血液病检测及预后生物标志物，开发有效治疗新靶点均具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述技术问题，提供了一种血清外泌体miR10作为急性白血病的生物标志物的应用。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案得以实现的。
[0007]一种血清外泌体miR10检测试剂在制备诊断急性白血病产品中的应用。
[0008]一种血清外泌体miR10检测试剂在制备诊断急性白血病生存率产品中的应用。
[0009]进一步的，所述miR10的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述miR10位于17号染色体。
[0010]本专利技术miR10过表达序列：UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGUG(SEQ ID NO.1)。
[0011]进一步的，所述检测试剂包括miR10上、下游检测引物；所述miR10上游检测引物如SEQ ID NO.2所示，miR10下游检测引物如SEQ ID NO.3所示。
[0012]miR10引物序列：
[0013]miR
‑
10Forward Primer 5
’
AGCTGGCTTTCTCAATACC 3
’
(SEQ ID NO.2)；
[0014]Reverse Primer 5
’
TACATACTCCCCTAGATACGAA3
’
(SEQ ID NO.3)。
[0015]进一步的，所述检测试剂还包括STAT3上、下游检测引物；所述STAT3上游检测引物如SEQ ID NO.5所示，STAT3下游检测引物如SEQ ID NO.6所示。
[0016]STAT3引物序列：
[0017]Forward Primer 5
’
CAGCAGCTTGACACACGGTA 3
’
(SEQ ID NO.5)；
[0018]Reverse Primer 5
’
AAACACCAAAGTGGCATGTGA 3
’
(SEQ ID NO.6)。
[0019]一种降低miR10表达水平的试剂在制备治疗急性白血病药物中的应用。
[0020]一种降低miR10表达水平的试剂在制备提高急性白血病患者生存周期药物中的应用。
[0021]进一步的，所述降低miR10表达水平的试剂包括miR10干扰序列，如SEQ ID NO.4所示。
[0022]miR10干扰序列：5
′‑
UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGUGUG
‑3′
(SEQ ID NO.4)。
[0023]本申请具有以下有益效果。
[0024]本专利技术以外泌体miRNA作为急性白血病的诊断标志物，提出其调控的通路机理，并指出AML患者血浆中存在细胞释放的外泌体及其表面携带AML相关的特异性表面标志，检测结果稳定可靠，为急性白血病的诊断和治疗提供了新思路。
附图说明
[0025]图1是本专利技术健康人和AML病人miR10表达情况结果图；
[0026]图2是本专利技术低表达miR10人群和高表达miR10人群生存率验证结果图；
[0027]图3是本专利技术miR10在健康人和AML病人外泌体中的表达情况结果图；
[0028]图4是本专利技术miR10调控的下游基因表达情况结果图；
[0029]图5是本专利技术miR10主要调控的下游基因STAT3表达情况结果图。
具体实施方式
[0030]1.实验材料和步骤
[0031]1.1样本来源和处理
[0032]本申请通过收集AML患者初诊血浆，提取其中的外泌体，对其进行高通量测序分析，寻找其正常人群及AML患者基因表达的差异性，从而为疾病的诊断及预后提供新的标志基因。提取1ml血浆进行外泌体提取，外泌体提取采用exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50)Qiagen#77044试剂盒进行提取纯化。
[0033]1.2RNA测序
[0034]采用exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50)Qiagen#77044试剂盒进行样本的RNA抽提，抽提时严格遵循试剂盒生产厂商提供的标准操作流程手册进行，抽提得到的为样本的总RNA，测序过程由上海鲸舟基因科技有限公司完成。
[0035]抽提的总RNA采用Agilent Bioanalyzer 2100(Agilent technologies,Santa Clara,CA,US)进行质量检验，并使用3.0 Fluorometer和NanoDrop One分光光度计来对总RNA进行定量。
[0036]miR10引物序列：
[0037]miR
‑
10Forward Primer：5
’
AGCTGGCTTTCTCAATACC 3
’
；
[0038]Reverse Primer：5
’
TACATACTCCCCTAGATACGAA3
’
。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清外泌体miR10检测试剂在制备诊断急性白血病产品中的应用。2.一种血清外泌体miR10检测试剂在制备诊断急性白血病生存率产品中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述miR10的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述检测试剂包括miR10上、下游检测引物；所述miR10上游检测引物如SEQ ID NO.2所示，miR10下游检测引物如SEQ ID NO.3所示。5.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱国庆，黄伦辉，程辉，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院中国医学科学院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：