一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法技术

本发明专利技术公开了一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，包括以下步骤：将CD70抗体加入完全培养基中制备抗体溶液，进行梯度稀释，得到8个浓度梯度的抗体溶液；处理raji细胞；将抗体溶液分别和细胞液混合共孵育；处理Jurkat

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法


[0001]本专利技术涉及生物活性测定
，具体涉及一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法。

技术介绍

[0002]CD70是一种属于肿瘤坏死因子家族的II型跨膜蛋白，主要表达于活化的T细胞、B细胞及成熟的树突状细胞。CD70受体为CD27，CD70与CD27的作用可以促进T细胞和B细胞的活化、增殖及分化，调节免疫应答。正常情况下CD70主要在活化的淋巴细胞表达，病理情况下CD70高表达于多种肿瘤组织，CD70可作为肿瘤治疗的潜在靶点。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0005]一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，包括以下步骤：
[0006](1)将CD70抗体加入完全培养基中制备抗体溶液，进行梯度稀释，得到8个浓度梯度的抗体溶液；
[0007](2)处理raji细胞：将raji细胞进行离心处理，弃上清液，用完全培养基重悬细胞，调节细胞浓度为3.3*10^6cells/ml；
[0008](3)将步骤(1)所得抗体溶液分别和步骤(2)所得细胞液混合共孵育；
[0009](4)处理Jurkat
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NFKB
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LUCI
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CD27：将Jurkat
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NFKB
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LUCI
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>CD27细胞悬液进行离心处理，弃上清液，用完全培养基重悬细胞，调节细胞浓度为3.3*10^6cells/ml，并将重悬后的细胞液加入步骤(3)所得混合液中，共孵育，然后加入荧光素酶底物，孵育，检测化学发光的表达。
[0010]本专利技术所述抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法利用CD27/CD70阻断检测系统，当抗CD70单克隆抗体与靶细胞表达的CD70结合，阻断了CD70与效应细胞上的CD27蛋白的结合，通过信号转导抑制了转录因子NFKB的活性，从而降低了荧光素酶的表达，其表达量与抗CD70单克隆抗体的生物活性呈负相关，加入荧光素酶底物后，测定其化学发光值并绘制量效曲线，以此测定抗CD70单克隆抗体生物学活性。
[0011]肿瘤细胞上表达CD70，通过与免疫细胞上的CD27结合，持续激活免疫细胞，而造成免疫细胞的无能耗竭状态，而抗CD70的抗体能通过封闭CD70与CD27的结合，而阻止免疫细胞的持续激活，从而避免免疫细胞的耗竭状态。
[0012]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(1)中，所述完全培养基为：RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物，制备所得抗体溶液的浓度为10ug/ml，所述梯度稀释为：采用RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物作为稀释液，3倍梯度稀释，得到8个浓度梯度的抗体溶液。
[0013]RPMI1640培养基，RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维
·
帕克纪念研究所。RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。
[0014]3倍梯度稀释为：将抗体溶液(10ug/ml)稀释3倍后得3.333333333ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得1.111111111ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得0.370370370ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得0.123456789ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得0.041152263ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得0.013717421ug/ml的抗体溶液，再稀释3倍得0.004572473ug/ml的抗体溶液；即得到8个浓度梯度的抗体溶液。
[0015]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(2)中，所述离心处理的速率为300r/min，离心时间为5min；所述完全培养基为：RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物。
[0016]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(3)中，抗体溶液和细胞液的体积比为1：1，所述孵育为在温度为37
°
的条件下，孵育30min。
[0017]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(4)中，所述离心处理的速率为300r/min，离心时间为5min；所述完全培养基为：RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物。
[0018]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(4)中，重悬后细胞液的添加量与步骤(3)所得混合液中抗体溶液的体积比为1：1；所述共孵育为在温度为37℃的条件下，共孵育5
‑
6h。
[0019]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(4)中，所述荧光素酶底物为steady
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glo(Promega,E2520)，所述荧光素酶底物的加入量与步骤(3)所得混合液中抗体溶液的体积比为5：3。
[0020]上述一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，作为一种优选的实施方案，步骤(4)中，所述孵育为在温度为20
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25℃的条件下，避光孵育15
‑
30min。
[0021]本专利技术的有益效果为：本专利技术所述抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法利用CD27/CD70阻断检测系统，当抗CD70单克隆抗体与靶细胞表达的CD70结合，阻断了CD70与效应细胞上的CD27蛋白的结合，通过信号转导抑制了转录因子NFKB的活性，从而降低了荧光素酶的表达，其表达量与抗CD70单克隆抗体的生物活性呈负相关，加入细胞裂解液和荧光素酶底物后，测定其化学光值并绘制量效曲线，以此测定抗CD70单克隆抗体生物学活性；操作简单，专属性强，耐用性高，对于抗CD70单克隆抗体的质量控制和临床应用具有重要意义。
[0022]本专利技术所述抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，实验灵敏度高，结果稳定可靠，简单易操作，能有效区分各候选抗体间的活性差别。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0024]本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供
熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将CD70抗体加入完全培养基中制备抗体溶液，进行梯度稀释，得到8个浓度梯度的抗体溶液；(2)处理raji细胞：将raji细胞进行离心处理，弃上清液，用完全培养基重悬细胞，调节细胞浓度为3.3*10^6cells/ml；(3)将步骤(1)所得抗体溶液分别和步骤(2)所得细胞液混合共孵育；(4)处理Jurkat
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CD27：将Jurkat
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CD27细胞悬液行离心处理，弃上清液，用完全培养基重悬细胞，调节细胞浓度为3.3*10^6cells/ml，并将重悬后的细胞液加入步骤(3)所得混合液中，共孵育，然后加入荧光素酶底物，孵育，检测化学发光的表达。2.根据权利要求1所述抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述完全培养基为：RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物，制备所得抗体溶液的浓度为10ug/ml，所述梯度稀释为：采用RPMI1640培养基和RPMI1640培养基体积10％的胎牛血清的混合物作为稀释液，3倍梯度稀释，得到8个浓度梯度的抗体溶液。3.根据权利要求1所述抗CD70单克隆抗体的生物活性测定方法，其特征在于，步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金瑜，王浩杰，王婷，卜婷婷，李苏楠，
申请(专利权)人：苏州逻晟生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：