蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂王浆及其干粉中的羟甲基糠醛含量测定方法，用水和3％氨水溶解稀释样品，经乙酸乙酯提取羟甲基糠醛，运用高效液相色谱仪进行分析，用外标法定量。该方法检测限3

【技术实现步骤摘要】
蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法


[0001]本专利技术属于食品质量控制领域，涉及蜂王浆及其干粉中新鲜度指标
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羟甲基糠醛的检测方法。

技术介绍

[0002]蜂王浆(royal jelly)，是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工蜂咽头腺的分泌物，是供给将要变成蜂王的幼虫的食物，也是蜂王终生的食物。经国内外多年科研和医学临床实践证明，蜂王浆对人类医疗、保健等具有奇特的功效。
[0003]蜂王浆含有62
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67％的水分，14
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16％的蛋白质，10
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15％的糖类，2
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9％的脂类，矿物质0.6
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2％，还有微量的维生素。在生产实践中，蜂王浆如果贮存不当，会产生褐变、因蛋白质聚集凝固而变粘稠、受微生物污染而变酸、变臭和产生气泡，严重影响蜂王浆的品质。
[0004]2008年申请的专利公告号CN101363828B，提出了蜂王浆中5
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羟甲基
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糠醛的含量小于或等于90μg/kg时属于新鲜等级。该新鲜度指标的提出，一定程度上激发了企业生产高品质蜂王浆的积极性。但是我们按该专利方法进行了操作，因为样品进行了20倍的稀释，导致方法检测限降低，经过测定，该方法检测限为0.3mg/kg，不能满足蜂王浆新鲜度质量控制的要求。
[0005]羟甲基糠醛是美拉德反应的重要中间产物，在酸性条件下，己糖脱水，或是氨基酸与羰基化合物之间反应形成。期刊《光谱学与光谱分析,2009,29(12):3236
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3240》中指出蜂王浆中羟甲基糠醛含量在150μg/kg以下，可以认为蜂王浆是新鲜的。
[0006]现行文献检测方法中，蜂王浆中羟甲基糠醛的检测限为300μg/kg，定量限为1mg/kg，然而，在我们的研究中发现，2019年4℃下贮存至今的蜂王浆，其羟甲基糠醛含量仅为91μg/kg，所以有必要进一步研究蜂王浆中的羟甲基糠醛含量的测定方法。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法。该方法具有操作简单、快速、准确、灵敏的特点，仪器普通易得，便于方法的推广，方法检测限达到6μg/kg，定量限为20μg/kg，实用性强，为蜂王浆新鲜度指标的确定提供依据。
[0008]为实现专利技术目的，本专利技术采取如下的技术方案：
[0009]蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，采用高效液相色谱法，用外标法定量，包括如下步骤：
[0010]1)确定色谱条件：
[0011]色谱柱填充剂：十八烷基键合硅胶；
[0012]流动相：流动相A，甲醇
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0.4％磷酸溶液，体积比为0
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10:90～100；；流动相B，甲醇；检测波长：285nm；柱温：35℃；
[0013]2)供试品溶液的制备：
[0014]称取蜂王浆样品或蜂王浆干粉样品，溶于氨水溶液，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯层蒸发至干，加入甲醇溶液，过滤膜，得到每1ml含1.00g样品的供试品溶液；
[0015]3)空白样品标准溶液的制备：
[0016]称取空白样品5份，加入羟甲基糠醛标准工作溶液，得到空白样品标准溶液的浓度为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L；
[0017]4)测定：
[0018]分别精密吸取空白样品标准溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，以空白样品标准溶液浓度为横坐标，以羟甲基糠醛峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用外标法定量。
[0019]进一步地，所述流动相A，甲醇
‑
0.4％磷酸溶液，体积比为6:94。
[0020]进一步地，所述碱性溶液选自氨水，碳酸盐水溶液、氢氧化钠水溶液、氢氧化钙水溶液，使得样品溶液的pH＝7
‑
8。
[0021]进一步地，所述蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法的检测限为3
‑
6μg/kg，定量限为10
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20μg/kg。
[0022]具体地说，蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，采用高效液相色谱法，用外标法定量，包括如下步骤：
[0023]1)确定色谱条件：
[0024]色谱柱填充剂：十八烷基键合硅胶；
[0025]流动相：流动相A，甲醇
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0.4％磷酸溶液，体积比为6:94；流动相B，甲醇；检测波长：285nm；柱温：35℃；
[0026]2)供试品溶液的制备：
[0027]称取蜂王浆样品1.00g或蜂王浆干粉样品0.50g，精确至
±
0.001g，于15mL塑料离心管中，加入1.5mL水，蜂王浆样品中加入1.5mL体积浓度为3％氨水溶液，蜂王浆干粉样品中加入2.0mL体积浓度为3％氨水溶液，充分溶解至无肉眼可见蜂王浆颗粒，加入8mL乙酸乙酯，手动振荡提取1min，4500转/分的转速离心分离5min；吸取全部乙酸乙酯层于50mL鸡心瓶中，40℃水浴旋转蒸发至干，向鸡心瓶中加入1mL提浓度为6％甲醇溶液，超声溶解残渣，样液过0.22μm滤膜，得到每1ml含1.00g样品的供试品溶液；
[0028]3)空白样品标准溶液的制备：
[0029]称取5份空白样品各1.00g，精确至
±
0.001g，于15mL塑料离心管中，分别加入0.20mL，0.50mL的0.1mg/L羟甲基糠醛标准工作溶液，0.10mL，0.20mL，0.50mL的1mg/L羟甲基糠醛标准工作溶液，再分别加入1.5mL水，加入1.5mL体积浓度为3％氨水溶液，充分溶解至无肉眼可见蜂王浆颗粒，加入8mL乙酸乙酯，手动振荡提取1min，4500转/分的转速离心分离5min，吸取全部乙酸乙酯层于50mL鸡心瓶中，40℃水浴旋转蒸发至干，向鸡心瓶中加入1mL6％甲醇溶液，超声溶解残渣，样液过0.22μm滤膜，得到浓度为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的系列空白样品标准溶液；
[0030]4)测定：
[0031]分别精密吸取5份系列空白样品标准溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，以空白样品标准浓度为横坐标，以羟甲基糠醛峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用外标法进行定量。
[0032]为了验证测定羟甲基糠醛含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适用性，对方法进行了方法学验证试验。
[0033]一、蜂王浆中羟甲基糠醛的提取
[0034]现行羟甲基糠醛测定方法中，关于羟甲基糠醛的提取方法主要见表1.
[0035]表1.不同样品中羟甲基糠醛的提取方法
[0036][0037][0038]从上表1可知，对于蛋白质含量低、颜色浅、可溶解物含量小的样品，文献多采取直接过滤进样的方法，对于颜色深、可溶解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法，用外标法定量，包括如下步骤：1)确定色谱条件：色谱柱填充剂：十八烷基键合硅胶；流动相：流动相A，甲醇
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0.4％磷酸溶液，体积比为0～10:90～100；流动相B，甲醇；检测波长：285nm；柱温：35℃；2)供试品溶液的制备：称取蜂王浆样品或蜂王浆干粉样品，溶于碱性溶液，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯层蒸发至干，加入甲醇溶液，滤膜过滤，得到每1ml含1.00g样品的供试品溶液；3)空白样品标准溶液的制备：称取空白样品5份，加入羟甲基糠醛标准工作溶液，得到空白样品标准溶液的浓度为20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L；4)测定：分别精密吸取空白样品标准溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，以空白样品标准溶液浓度为横坐标，以羟甲基糠醛峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，外标法定量。2.根据权利要求1所述的蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，其特征在于所述流动相A，甲醇
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0.4％磷酸溶液，体积比为6:94。3.根据权利要求1所述的蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，其特征在于所述碱性溶液选自氨水、碳酸盐水溶液、氢氧化钠水溶液或氢氧化钙水溶液，使得样品溶液的pH＝7
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8。4.根据权利要求1所述的蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，其特征在于所述方法的检测限为3
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6μg/kg，定量限为10
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20μg/kg。5.蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法，用外标法定量，包括如下步骤：1)确定色谱条件：色谱柱填充剂：十八烷基键合硅胶；流动相：流动相A，甲醇

【专利技术属性】
技术研发人员：周萍，
申请(专利权)人：杭州碧于天保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：