一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值的方法技术

本发明专利技术提出一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值的方法，属于稳定同位素分析技术领域。所述方法包括：1)对燕窝制品进行匀浆处理，得匀浆样品；2)向匀浆样品中加水、活性干酵母，发酵，得去糖发酵液；3)向上述去糖发酵液中添加硫酸，使发酵液酸度为pH＝1，60℃～80℃水浴加热，冷却至室温，离心，收集水解后的上清液，加入氢氧化钠溶液调至pH呈中性；4)将上述游离态唾液酸，浓缩，加入有机试剂，离心；5)重复步骤4)，至液面不再产生白色沉淀为止，得去蛋白上清液；6)对步骤5)所得去蛋白上清液浓缩干燥后，复溶，使用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值的方法


[0001]本专利技术属于稳定同位素分析
，具体涉及测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值(记作δ
13
C)的方法。

技术介绍

[0002]燕窝是传统的高档滋补品，是由金丝雀靠喉部的腺体用唾液或唾液与其绒羽混合凝结而成的巢穴，主产于马来西亚、泰国、印度尼西亚、缅甸等东南亚国家及我国的福建、广东沿海地带，具有较高的食用和药用价值，具养阴润燥、补中益气、入胃补脾、止咳化痰等功能。相关研究表明，燕窝的主要营养成分包括蛋白质、碳水化合物、对人体起作用的必需氨基酸以及微量元素，其中唾液酸为燕窝中主要的生物活性成分。
[0003]唾液酸(sialic acid)是含有9个碳原子并具有吡喃糖结构的酸性氨基糖，是 C
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乙酰神经氨酸的俗称，又称燕窝酸，系统命名为5
‑
氨基
‑
3,5
‑
二脱氧
‑
D
‑
甘油
‑
D
‑ꢀ
半乳壬酮糖，主要的天然来源是奶制品、蛋类、肉类食品，但含量较低，自然界中唾液酸含量最高的物质是燕窝(含量为5～12％)，故唾液酸又称燕窝酸。
[0004]在燕窝及燕窝制品的标准中，唾液酸是燕窝分级中唯一明示的营养成分，也是燕窝分级标准的主要指标。由于燕窝制品是以燕窝为原料，添加或不添加其他辅料加工而成的产品，难免会存在添加市售唾液酸冒充天然唾液酸的情况存在，继而出现行业内“劣币驱逐良币”的问题。
[0005]稳定同位素技术在食品掺假检测领域具有重要应用，如蜂蜜、果汁中掺糖检测，葡萄酒中掺水、掺酒精检测等，根据唾液酸的稳定碳同位素特征可辨别当前市售唾液酸与天然唾液酸，进而可鉴别燕窝制品的真伪。但目前尚未有唾液酸稳定碳同位素比值分析的自动快速测定方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术建立了一种稳定可靠、自动化程度高的分析测试方法，为唾液酸δ
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C 的分析及其在燕窝制品掺假检测领域的应用奠定了基础。
[0007]本专利技术提出一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值(δ
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C)的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0008]1)对燕窝制品进行匀浆处理，得匀浆样品；
[0009]2)向匀浆样品中加水、活性干酵母，发酵，得去糖发酵液；
[0010]3)向上述去糖发酵液中添加硫酸，使发酵液酸度为pH＝1，60℃～80℃水浴加热，冷却至室温，离心，收集水解后的上清液，加入氢氧化钠溶液调至pH为中性；
[0011]4)将步骤3)所得中性上清液浓缩，加入有机试剂，离心；
[0012]5)重复步骤4)，至液面不再产生白色沉淀为止，得去蛋白上清液；
[0013]6)对上述去蛋白上清液浓缩干燥后，复溶，使用液相色谱
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稳定同位素比值质谱测定唾液酸的稳定碳同位素比值(δ
13
C)。
[0014]本专利技术基于燕窝制品具有极高糖分含量的成分特征和液相色谱仪
‑
稳定同位素比值质谱仪的先进性、选择性，根据唾液酸稳定碳同位素比值的分析要求，建立了测定燕窝制品中唾液酸δ
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C值的方法，为产品中唾液酸的来源分析提供技术支持。
[0015]本专利技术一实施例中，步骤1)中，所述燕窝制品为含有天然唾液酸的产品。所述含有天然唾液酸的产品包括干燕窝、燕角或以燕窝为原料制得的燕窝产品。例如，所述含有天然唾液酸的产品包括冰糖燕窝、鲜炖燕窝等。
[0016]本专利技术一实施例中，步骤2)中，水、匀浆样品的比例为90～100mL：30g，活性干酵母占体系总质量的0.5％。
[0017]本专利技术一实施例中，步骤2)中，所述活性干酵母包括酿酒酵母等。
[0018]本专利技术一实施例中，步骤3)中，使结合态唾液酸水解成游离态唾液酸，得到游离态唾液酸后加入氢氧化钠至上清液呈中性。
[0019]本专利技术一实施例中，步骤3)中，水浴加热的时间为40min。
[0020]本专利技术一实施例中，步骤4)中，所述有机试剂为Sevage试剂。加入Sevage 试剂可有效除去蛋白质类化合物，得含唾液酸的混合物。所述Sevage试剂由三氯甲烷和正丁醇按照体积比4:1配制而成。
[0021]本专利技术一实施例中，步骤4)中，将步骤3)所得中性上清液浓缩至原体积的四分之一，向浓缩液中加入有机试剂，浓缩液与有机试剂体积比为5:1。
[0022]本专利技术一实施例中，步骤6)中，干燥为冷冻干燥或烘干。优选的，干燥为烘干，烘干的温度为105℃。
[0023]本专利技术一实施例中，步骤6)中，复溶采用的溶剂为水。
[0024]本专利技术一实施例中，使用液相色谱
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稳定同位素比值质谱，可自动分离唾液酸与其他含碳化合物，并测定唾液酸的稳定碳同位素比值(δ
13
C)。
[0025]本专利技术一实施例中，确认液相色谱
‑
稳定同位素比值质谱仪的工作环境、气密性、离子室的真空度均符合要求，然后检验仪器测定CO2中δ
13
C的精密度和稳定性，必要时调整离子源参数值。
[0026]本专利技术具有以下优势：
[0027]本专利技术采用样品前处理，基于燕窝制品的产品成分特征和唾液酸稳定碳同位素准确分析的要求，通过除去燕窝制品中大部分糖类化合物、水解结合态唾液酸、除去蛋白质等操作得到含唾液酸的上清液，在线通过液相色谱
‑
稳定同位素比值质谱分离纯化唾液酸并转化测定δ
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C值。基于色谱柱的自动、准确分离效果实现了液相色谱
‑
稳定同位素比值质谱仪对燕窝制品中唾液酸δ
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C的分析测试，为燕窝制品的掺假检测研究提供了一种新方法。
附图说明
[0028]构成本专利技术的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0029]图1为本专利技术实施例LC
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IRMS测定燕窝制品样品中唾液酸与糖类化合物的δ
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C离子流图；
[0030]图2为本专利技术实施例燕窝制品中掺入市售唾液酸试验测试结果图。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0032]实施例1一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值(δ
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C)的方法
[0033]1.1仪器
[0034]液相色谱
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稳定同位素比值质谱仪(LC
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IRMS，配备氧化接口Isolink)、高速分散机、分析本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定燕窝制品中唾液酸稳定碳同位素比值的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)对燕窝制品进行匀浆处理，得匀浆样品；2)向匀浆样品中加水、活性干酵母，发酵，得去糖发酵液；3)向上述去糖发酵液中添加硫酸，使发酵液酸度为pH＝1，60℃～80℃水浴加热，冷却至室温，离心，收集水解后的上清液，加入氢氧化钠溶液调至pH呈中性；4)将上述游离态唾液酸，浓缩，加入有机试剂，离心；5)重复步骤4)，至液面不再产生白色沉淀为止，得去蛋白上清液；6)对步骤5)所得去蛋白上清液浓缩干燥后，复溶，使用液相色谱
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稳定同位素比值质谱测定唾液酸的稳定碳同位素比值。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述燕窝制品为含有天然唾液...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟其顶，王道兵，王东亮，冯迪，林小仙，张洛琪，苗树，李国辉，武竹英，
申请(专利权)人：北京小仙炖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：