【技术实现步骤摘要】
一种抗破伤风单克隆抗体组合物的制备方法及应用
[0001]本专利技术涉及生物免疫学
，具体地说是一种抗破伤风单克隆抗体组合物的制备方法及应用。
技术介绍
[0002]破伤风是由破伤风杆菌入侵创伤而引起的一种特异性感染，其主要致病原是破伤风杆菌产生的破伤风类毒素。破伤风类毒素是一个由1315个氨基酸组成的分子量约为150kDa蛋白。该多肽在破伤风杆菌的蛋白水解酶作用后，在456和467氨基酸残基之间裂解成为分量大约为50KD轻链(LC)和100KD重链(LN)，LC和LN通过一对二硫键S439
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S467连接。LC是锌依赖蛋白酶，在193
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197位有一个锌指结合蛋白的功能域HELIH，375位的酪氨酸是一个催化活性位点。在864和863之间有一个木瓜蛋白酶(papin)切位点可以将重链进一步降解为N端(HCN)和C端(HCC或TTC)。HCN负责突触囊泡通过细胞质进入细胞质的膜，而TTC负责毒素结合神经元细胞。当TTC结合神经元上神经节苷脂受体后，在HCN协助下，LC进入神经元后被运...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
CO2 细胞培养箱中孵育，培养24h后，更换含有HAT (25 X) 的常规RPM 1640培养液，在370C、5% CO2细胞培养箱中继续孵育，培养14d后，稀释倍数小于100倍且其OD450大于1者被用于进一步筛选；S10，经筛选，获得4株单克隆抗体，分别命名为S3A4、9
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7A4、9
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8C7和S1D2，它们的中和效价分别为52IU/ml、53IU/ml、58IU/ml和60IU/ml；S11，用ELISA叠加法确定4株单克隆抗体的协同性；S12，从4株单克隆抗体中提取总RNA，并获得4株单克隆抗体的可变区编码序列；S13，将4株单克隆抗体中随机抽取2株单克隆抗体，对其轻链核苷酸序列和重链核苷酸序列分别进行人源化操作，获得轻链V区蛋白序列和重链V区蛋白序列；S16，将鼠kappa链的前导肽序列氨基酸序列、人的kappa链恒定区和轻链V区蛋白序列串联、优化后，获得zumb轻链的核苷酸；S17，将鼠kappa链的前导肽序列氨基酸序列、人的IgG1恒定区蛋白序列和重链V区蛋白序列串联、优化后，获得zumb重链的核苷酸；S18，将步骤S16及S17获得的zumb轻链的核苷酸和zumb重链的核苷酸进行基因合成，同时亚克隆到载体pCDNA3.1（+）中，获得单克隆抗体组合物；S19，将单克隆抗体组合物进行蛋白表达稳定株建立；S20，将蛋白表达稳定株建立后的单克隆抗体组合物进行纯化处理，最终获得安全有效量的抗破伤风单克隆抗体组合物。7.根据权利要求6所述的一种抗破伤风单克隆抗体组合物的制备方法，其特征在于：所述的抗原为宁波荣升公司的破伤风类毒素，批号为501...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱崇日，吴琼，李鑫，勾英，李丹，邵佳慧，金侠，范铁炯，
申请(专利权)人：上海赛伦生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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