【技术实现步骤摘要】
一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法
[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。
技术介绍
[0002]黑腹虎头蜂又名杀人蜂，腹黑，全身有绒毛，世界上最毒的毒蜂之一，具有超强攻击性，超强毒性，又因为是群居性生物，一个蜂巢中多达上千只，所以时常有蜇伤蛰死人的报道。
[0003]但是，目前为止我国尚无治疗黑腹虎头蜂蜇伤的专用药物，针对胡蜂蜇伤的患者，只能对症采取一般的措施，一般的措施对轻症有一定的效果，但是并未从根本上将体内的毒素消灭，体内的毒素则继续对身体造成破坏，最终造成严重后果。
[0004]抗毒血清是目前全世界治疗有毒动物咬伤或蜇伤的最有效的首选急救药物，如抗蛇毒血清等；患者如果可以在第一时间及时注射抗毒血清，其生存的可能性将大大增加，同时为后续抢救和治疗赢得了宝贵的时间。但是，目前我国尚无胡蜂毒素抗毒血清，有效的胡蜂毒素抗毒血清的制备研究也是空白的；并且，由于胡蜂种类的不同，其毒素组成也存在很大差异，实验室鉴定黑腹虎头蜂有较大价值，而且，制备胡蜂毒素抗毒血清，尤其是效价高、纯度好的抗毒血清具有很大难度和挑战。
技术实现思路
[0005]本专利技术为克服现有技术的不足，提供一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清不仅对黑腹虎头蜂蜂毒具有中和作用，而且对云南大理胡蜂、凹纹胡蜂、陕西安康胡蜂等多种胡蜂蜂毒具有有效的中和效果。
[0006]为实现上述目的，设计一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：（1）分子鉴
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：（1）鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；（2）将黑腹虎头蜂毒素进行甲醛灭活脱毒处理；（3）将甲醛灭活脱毒处理后的黑腹虎头蜂毒素进行动物免疫；（4）免疫后采血；（5）采完的血浆置2~8℃的冷库中保存，保存5年；（6）将血浆进行S/D病毒灭活处理；（7）将灭活处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；（8）将板框压滤后的血浆混合物中添加1.5~2倍的蒸馏水进行血浆稀释；（9）将稀释后的血浆混合物进行胃酶消化处理；（10）将胃酶消化处理后的血浆混合物进行第一次沉淀处理；（11）将第一次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；（12）将板框压滤处理后的血浆混合物进行第二次沉淀处理；（13）将第二次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并收集沉淀物，弃上清；（14）将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；（15）将明矾吸附处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；（16）将板框压滤处理后的血浆混合物加入3倍纯化水进行超滤；（17）将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理，纳米膜过滤，制得F（ab
’
）2免疫球蛋白抗体；（18）将F（ab
’
）2免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中，并调整PH值至6~7制得胡蜂毒素抗毒血清原液；（19）将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。2.根据权利要求1所述的一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：所述的步骤（1）中黑腹虎头蜂的鉴定方法如下：（1a）将0.2g未知胡蜂毒加2ml的DDH2O进行溶解，3000g离心5min，弃上清；（1b）加入200ul的LB2，充分混匀，悬浮沉淀；（1c）加入20ul的RNase A于步骤（1b）的样品中在室温孵育2min；（1d）加入20ul的PK，涡旋混匀，在室温中孵育2min；（1e）加入500ul的BB2，立即涡旋5s，再室温中孵育10min；（1f）将全部溶液加入离心柱中，12000rpm离心30s，弃去流出液；（1g）加入500ul的CB2，12000rpm离心30s，弃废液；（1h）重复步骤（1g）一次；（1i）加入500ul的WB2，使用前检查有无无水乙醇，12000rpm离心30s，弃废液；（1j）重复步骤（1i）一次；（1k）12000rpm离心2min，彻底去除残留的WB2；（1l）将离心柱置于干净的离心管中，在柱中央加入100ul预热的EB，或去离子水，室温静置1min，12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱的DNA于
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20℃保存；（1m）采用通用引物以及特异性引物从胡蜂DNA核酸序列上PCR扩增出COI序列的片段，再经过二代测序测出COI片段的序列，经NCBI网站比对出胡蜂物种。
3.根据权利要求2所述的一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：所述的DDH2O为去离子水；LB2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫，陈则，罗敏，李丹，蒋春英，范铁炯，
申请(专利权)人：上海赛伦生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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