本发明专利技术涉及一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法，本发明专利技术通过超高效液相色谱法同时把5种主要成分一次测定出来，该方法能同时测定白头翁口服液中秦皮中的秦皮甲素和秦皮乙素，黄连和黄柏中的盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱，共5种成分的含量，该方法快速、灵敏、准确、专属性强，通过一次样品处理，即可同时测定5种成分的含量，不仅节省了试剂、时间，还提高了工作效率。还提高了工作效率。
A method for simultaneous determination of five active components in Pulsatilla oral liquid
【技术实现步骤摘要】
一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法
[0001]本专利技术涉及一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法，属于兽药中有效成分检测领域。
技术介绍
[0002]白头翁口服液为中兽药成方制剂，以白头翁主药，主要成分：白头翁、黄连、秦皮、黄柏。性状：为棕红色的液体；味苦。取其清热燥湿、凉血止痢的功效，治湿热或热毒积于大肠引起的肠黄作泻、幼畜热痢胃肠湿热壅滞所致之肠黄作泻，黄连苦寒清湿热、厚肠胃，黄柏泻下焦湿热，两药共为清热凉血为臣秦皮涩肠止泻、化湿止痢之功，与上药相配，清热解毒、凉血止痢之效具备，以使热清毒解，痢止而后重自除。是家畜治疗湿热泄泻，下痢脓血常用之药。用法与用量：马、牛150
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250mL；羊、猪30
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45mL；兔、禽2
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3mL。规格：每1mL相当于原生药1g。广泛应用于集约化畜禽养殖企业。
[0003]原《中华人民共和国兽药典》2020年版(二部)中药卷只对白头翁口服液中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱进行了含量测定，采用流动相：乙腈
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0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100mL中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH为4.0)，检测波长：347nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL。标准中的检测方法中含盐流动相，容易堵塞色谱柱和管路和单向阀等，对仪器损伤较大，并且测定的有效成分比较少。
技术实现思路
[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法。
[0005]该方法能同时测定白头翁口服液中秦皮中的秦皮甲素和秦皮乙素，黄连和黄柏中的盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱，共5种成分的含量，该方法快速、灵敏、准确、专属性强，通过一次样品处理，即可同时测定5种成分的含量，不仅节省了试剂、时间，还提高了工作效率。
[0006]为实现以上目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0007]一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法，用于同时测定白头翁口服液中秦皮甲素，秦皮乙素，盐酸小檗碱，盐酸巴马汀，盐酸药根碱5种有效成分的含量，采用UPLC
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PDA方法进行测定，以ACE Excel 3C18 AR为色谱柱，乙腈
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0.4％磷酸水溶液进行梯度洗脱，同时利用优化检测波长347nm进行检测，具体洗脱程序见表1：
[0008]表1
[0009][0010]具体测定步骤如下：
[0011]a、制备对照储备液和混合对照储备溶液
[0012]取秦皮甲素，秦皮乙素，盐酸小檗碱，盐酸巴马汀，盐酸药根碱标准品，用乙醇溶液溶解并定容，分别配制成对照储备液；将各对照储备液混合，得到混合对照储备溶液；
[0013]b、制备待测样品溶液：取供试品，置于容量瓶中，用甲醇
‑
盐酸溶液或乙醇溶液溶解，超声提取、离心、过滤，得待测样品溶液；
[0014]c、将混合对照储备溶液注入UPLC
‑
PDA色谱仪，在色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据进样量所测峰面积的大小与其进样量的对应关系绘制标准曲线；
[0015]d、结果分析：取步骤b待测样品溶液注入UPLC
‑
PDA色谱仪中，在步骤c的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据步骤d中制作的标准曲线定量，计算出供试品中有效成分的含量。
[0016]根据本专利技术优选的，步骤a中，秦皮甲素对照储备液的浓度为830
‑
850μg/mL，秦皮乙素对照储备液的浓度为205
‑
225μg/mL，盐酸小檗碱对照储备液的浓度为190
‑
200μg/mL，盐酸巴马汀对照储备液的浓度为190
‑
210μg/mL，盐酸药根碱对照储备液的浓度为170
‑
190μg/mL。
[0017]根据本专利技术优选的，步骤a中，混合对照储备溶液中秦皮甲素的浓度为45
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70μg/mL，秦皮乙素的浓度为4
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10μg/mL，盐酸小檗碱的浓度为30
‑
55μg/mL，盐酸巴马汀的浓度为10
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30μg/mL，盐酸药根碱的浓度为4
‑
20μg/mL。
[0018]根据本专利技术优选的，步骤a中，乙醇的质量浓度为100％。
[0019]根据本专利技术优选的，步骤b中，乙醇的质量浓度为100％。
[0020]根据本专利技术优选的，步骤b中，甲醇
‑
盐酸溶液为甲醇与盐酸按体积比100：1的比例混合的溶液。
[0021]根据本专利技术优选的，步骤b中，供试品与乙醇的质量体积比：(1
‑
2)：(50
‑
200)，单位，g/mL；
[0022]进一步优选的，步骤b中，供试品与乙醇的质量体积比：1：(50
‑
100)，单位，g/mL。
[0023]进一步优选的，步骤b中，供试品与乙醇的质量体积比：1：100，单位，g/mL。
[0024]根据本专利技术优选的，步骤b中，超声提取时的超声功率为35
‑
50KHz，超声提取时间为20
‑
40min。
[0025]根据本专利技术优选的，步骤b中，离心转速为8000
‑
15000rpm/min，离心时间为8
‑
12min。
[0026]根据本专利技术优选的，步骤c中，所述色谱柱规格为长100mm
×
内径4.6mm，填料颗粒粒径3μm，柱温为30
‑
40℃，选择347nm作为种有效成分的检测波长，流动相A为乙腈，流动相B为0.4％磷酸水溶液，A、B两项梯度洗脱作为洗脱液。
[0027]以ACE Excel 3C18 AR为色谱柱将C18、苯基(Ph)两种键合相的特性融入单一键合相中，撷取两种键合相的优势，形成独特的选择性。
[0028]根据本专利技术优选的，步骤d中，所述标准曲线系数不小于0.999。
[0029]结果判定：根据色谱图，供试品色谱中，在与5种标准品色谱相应的位置上，出现相同的色谱峰，表明可检出秦皮、黄柏、黄连。
[0030]3D全波长扫描190
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400nm，2D多通道筛选，经过228nm、240nm、254nm、265nm、347nm、335nm进行比较，通过梯度洗脱程序不断调整，使分离度和响应值最优化；经过本专利技术无限次失败的经验得到，5种化合物在347nm处，响应均较好，基质背景干扰最小，见图2
‑
19；线性关系良好，分离度良好。
[0031]本专利技术与现有技术相比具有以下技术特点和优点：
[0032]1、本专利技术中通过超高效液相色谱法同时把5种主要成分一次测定出来，方法本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种白头翁口服液中5种有效成分同时测定方法，用于同时测定白头翁口服液中秦皮甲素，秦皮乙素，盐酸小檗碱，盐酸巴马汀，盐酸药根碱5种有效成分的含量，采用UPLC
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PDA方法进行测定，以ACE Excel 3 C18 AR为色谱柱，乙腈
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0.4％磷酸水溶液进行梯度洗脱，同时利用优化检测波长347nm进行检测，具体洗脱程序为：具体测定步骤如下：a、制备对照储备液和混合对照储备溶液取秦皮甲素，秦皮乙素，盐酸小檗碱，盐酸巴马汀，盐酸药根碱标准品，用乙醇溶液溶解并定容，分别配制成对照储备液；将各对照储备液混合，得到混合对照储备溶液；b、制备待测样品溶液：取供试品，置于容量瓶中，用甲醇
‑
盐酸溶液或乙醇溶液溶解，超声提取、离心、过滤，得待测样品溶液；c、将混合对照储备溶液注入UPLC
‑
PDA色谱仪，在色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据进样量所测峰面积的大小与其进样量的对应关系绘制标准曲线；d、结果分析：取步骤b待测样品溶液注入UPLC
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PDA色谱仪中，在步骤c的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据步骤d中制作的标准曲线定量，计算出供试品中有效成分的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，秦皮甲素对照储备液的浓度为830
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850μg/mL，秦皮乙素对照储备液的浓度为205
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225μg/mL，盐酸小檗碱对照储备液的浓度为190
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200μg/mL，盐酸巴马汀对照储备液的浓度为190
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210μg/mL，盐酸药根碱对照储备
液的浓度为170
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190μg/mL。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，混合对照储备溶液中秦皮甲素的浓度...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏秀丽，崔进，孙圣福，王海挺，徐恩民，刘霄飞，李晴，邹明，
申请(专利权)人：山东省饲料兽药质量检验中心，
类型：发明
国别省市：
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