快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法技术

本发明专利技术涉及快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法，包括如下步骤：(1)检测物前处理；(2)配制221种对照品单标储备溶液，按照浓度梯度配制混合标准工作溶液和多份标准系列溶液；(4)建立色谱分离条件和质谱条件；建立一级谱库；建立二级高分辨质谱数据库。本发明专利技术的有益效果是：运用超高效液相色谱

Methods for rapid detection of 221 illegally added ingredients in health food

【技术实现步骤摘要】
快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法


[0001]本专利技术属于保健品非法添加检测
，对食品中非法添加化学成分的检测方法的开发。

技术介绍

[0002]保健食品是由天然营养成分和特殊活性物质所构成的，它区别于药品的最大一个特点是：它不含有任何药物成分,不具备治疗的功用,不能对人体造成任何伤害和副作用。我国GB16740
‑
2014《食品安全国家标准保健食品》中第2.1条将保健食品定义为:声称并具有特定保健功能或者以补充维生素、矿物质为目的的食品。由于保健食品属性的特殊性,某些商家受利益驱使,选择在保健食品中添加违禁药物来达到提高其产品功能性的目的。随着我国人民生活水平的提高，保健意识愈发强烈，保健品成为当今社会流行的保持身体健康的产品,得到大众的喜爱。
[0003]国家食品药品监督管理局在2009年颁布了药品补充检验标准,规定了非法添加的11种补肾壮阳类化学药检测方法。2018年颁布了《食品中那非类物质的测定》(BJS 201805)包含了90种那非类非法添加物质。出口保健食品检验标准、国家批准的文件及国家补充检验标准采用的检测方法主要为高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法，这些方法通常适合在有对照品或标准物质的情况下，对已知目标物的检测，分析成本高、研究扩展性不强。保健食品种类繁多，而且还处于增长的态势，标准中涉及到的非法添加物质的主要包括：减肥类、降糖类、降血压类、降血脂类、安神类以及壮阳类。但高通量识别和非目标成份激素类的检测鉴定方法尚没有建立。因此迫切需要建立非法添加化学物质多剂型、多指标的定量检测方法。而且前处理的方法不同对检测结果影响也比较大。

技术实现思路

[0004]为了能够快速检测多种保健食品中的非法添加物，本专利技术提供了快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法，本专利技术更加细化了前处理的方法，前处理分类更细、色谱、质谱等条件，完成方法学验证，并建立相应非法添加化学物质的高分辨质谱数据库。对比高分辨质谱数据库中相应的特征碎片离子，能够对保健食品监督抽检和风险监测221种非法添加化学物质进行定性和定量风险筛查和测定。这221种非法添加物均是实际检测工作中被检测或剖析出来的成分，如西布曲明和西地那非的被检出频率最高；氟米松等激素类检测方法尚无标准。保健食品中最常见的添加物，其中包括降血糖类27种、降血脂类6种、降血压类 12种，安神类22种，减肥类30种，激素类40种，壮阳类84种。不同功能种类的221种非法添加物质能一种方法一次检测,既方便又利于操作。
[0005]本专利技术的具体技术方案是：快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法，包括如下步骤：
[0006](1)待测物前处理：
[0007]a待测样为片剂、颗粒剂、胶囊内容物，取样品研细后准确称取混合均匀的试样1g，
精确至0.01g，于50mL棕色容量瓶中，加入20mL甲醇水溶液(50:50)，超声10min，冷却至室温，甲醇水溶液体积比50:50定容至刻度，过0.22μm 有机系滤膜供仪器测定；
[0008]b待测样为液体，准确称取一次口服剂量样品于50mL棕色容量瓶中，加入 20mL甲醇水溶液体积比50:50，超声10min，冷却至室温，甲醇水溶液体积比 50:50定容至刻度，过0.22μm有机系滤膜供仪器测定；
[0009]c待测样为胶囊，如需测量胶囊壳非法添加物的含量，将样品胶囊壳混合研细，加三氯甲烷20ml，超声处理10min，过滤后取滤渣，挥干三氯甲烷，用5ml 甲醇水溶液体积比50:50复溶，过0.22μm有机系滤膜供仪器测定；
[0010]本研究所涉及的221种禁用物质包含多种不同性质的化合物，化学性质差异较大，需要对221种禁用物质提取溶剂进行选择和优化。
[0011]因此实验考察了纯乙腈、纯甲醇和甲醇水溶液(50:50、20:80、80:20V：V) 提取溶剂对待测组分221种禁用物质提取回收率的影响(见表)221中禁用物质。
[0012]221中禁用物质提取回收率统计表
[0013][0014]从上表可以看出甲醇水溶液V:V(50:50)效果最好，通过对碰撞能量、流动相、色谱柱等一系列质谱参数进行优化将以下24组同分异构体区分，确定最佳的质谱条件，最终使保留时间相近的上述各化合物均能达到完全分离,各通道之间无明显干扰,使从复杂保健
品成分中检测221种禁用物质的方法成为可能。(2)标物配置分别称取221种对照品10.0mg，用甲醇定容至10mL，配制成单标贮备液；以甲醇为溶剂，将221种单标贮备液稀释为100倍，即得10μg/mL的混合标准工作溶液；
[0015](3)建立色谱分离条件、质谱条件:仪器名称：Agilent1290InfinityIILC
‑
6545Q
‑
TOF/MS液相色谱
‑
质谱联用仪，配有双喷射电喷雾电离源；色谱分离条件:流动相A相为体积分数0.1％甲酸水溶液+2mmol/L乙酸铵，流动相B相为甲醇；色谱柱:ZorbaxEclipsePlusRRHDC
18
(3.0x150mm1.8μm)；色谱柱温40℃；进样体积2μL；流速0.4mL/min；色谱梯度洗脱条件，B相初始浓度为10％；0
‑
5min，10％至50％；5
‑
10min，50％至60％；10
‑
25min，60％至98％；25
‑
28min，保持98％；28
‑
28.1min，98％至10％；28.1
‑
31min保持10％，进样体积1μL；
[0016]质谱条件：
[0017][0018]流动相选择了更加合理的配比，检测更加准确，速度更快。
[0019]本专利技术采用ZorbaxEclipsePlusRRHDC
18
(3.0x150mm1.8μm)柱，兼顾不同极性化合物性质，比较理想的实现了色谱保留和分离。221种化合物的理化性质差别大，在色谱柱上保留特征也不同，为得到理想的色谱峰及合适的分离度，对比选择了性质不同的色谱柱，考察其保留行为及分离情况。下表为不同色谱柱检测结果：
[0020][0021][0022]结果表明:二甲双胍、阿卡波糖、伏格列波糖、烟酸等极性较强的化合物保留性极小，容易受色谱前期极性共流出物干扰；另有氯地那非部分化合物由于结构原因，有峰形拖尾严重等情况。伪伐地那非与那莫西地那非互为同分异构体，经优化后为17.66min,18.65min，可实现色谱基线分离。这样他们用一般的色谱柱会出现检测不准确的问题。
[0023]本专利技术采用Zorbax Eclipse Plus RRHD C
18
(3.0x 150mm 1.8μm)柱时兼顾不同极性化合物性质，适合检测221种物质。
[0024]本专利技术分别考察了不同流动相(0.1％甲酸水溶液－乙腈、0.1％甲酸水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.快速检测保健食品中221种非法添加成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)待测物前处理：a待测样为片剂、颗粒剂、胶囊内容物，取样品研细后准确称取混合均匀的试样1g，精确至0.01g，于50mL棕色容量瓶中，加入20mL甲醇水溶液50:50，超声10min，冷却至室温，甲醇水溶液体积比50:50定容至刻度，过0.22μm有机系滤膜供仪器测定；b待测样为液体，准确称取一次口服剂量样品于50mL棕色容量瓶中，加入20mL甲醇水溶液体积比50:50，超声10min，冷却至室温，甲醇水溶液体积比50:50定容至刻度，过0.22μm有机系滤膜供仪器测定；c待测样为胶囊，如需测量胶囊壳非法添加物的含量，将样品胶囊壳混合研细，加三氯甲烷20ml，超声处理10min，过滤后取滤渣，挥干三氯甲烷，用5ml甲醇水溶液体积比50:50复溶，过0.22μm有机系滤膜供仪器测定；(2)标物配置分别称取221种对照品10.0mg，用甲醇定容至10mL，配制成单标贮备液；以甲醇为溶剂，将221种单标贮备液稀释为100倍，即得10μg/mL的混合标准工作溶液；(3)建立色谱分离条件、质谱条件:仪器名称：Agilent 1290Infinity IILC
‑
6545Q
‑
TOF/MS液相色谱
‑
质谱联用仪，配有双喷射电喷雾电离源；(4)确认了221种非法添加化合物的一级质谱、一级精确质荷比、同位素丰度比、保留时间和质量数误差；(5)建立高分辨质谱数据库；在UHPLC
‑
QTOF/MS系统一级采集模式下对221种非法添加化合物的保留时间、离子化方式及精确分子质量进行确认,大部分化合物分子含有较强的电负性元素，如氧原子、氮原子等，在ESI+模式下可以形成[M+H]+加合离子，由于流动相中含有铵盐，个别化合物可以在离子化过程中形成[M+NH4]+加合...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莹，李伟，柳溪，杨栩，刘莹，翟雨佳，
申请(专利权)人：天津市食品安全检测技术研究院，
类型：发明
国别省市：