牛磺胆酸及其水溶性盐对新冠病毒的核糖核酸内切酶活性抑制作用的应用制造技术

本发明专利技术公开了牛磺胆酸及其水溶性盐对新冠病毒的核糖核酸内切酶活性抑制作用的应用，经过实验分析，发现牛磺胆酸能够对新冠病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
牛磺胆酸及其水溶性盐对新冠病毒的核糖核酸内切酶活性抑制作用的应用


[0001]本专利技术属于病毒免疫治疗
，特别是牛磺胆酸及其水溶性盐对新冠病毒的核糖核酸内切酶活性抑制作用的应用。

技术介绍

[0002][0003]据《2019新型冠状病毒的研究进展》(谢茜等，病毒学报，2020.05，2020(36)3,493
‑
500) 介绍，新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2基因组约为29.8kb，含有14个开放阅读框(ORF)，共编码27～28个蛋白质。位于基因组5
′
端的ORF1ab和ORF1a基因分别编码复制酶多聚蛋白pp1ab和pp1a，由蛋白酶剪切为15或16个非结构蛋白(Non
‑
structure protein，Nsp)，包括Nsp1～Nsp10和Nsp12～Nsp16。基因组的3
′
端编码4种在冠状病毒中相对保守的结构蛋白，分别为表面刺突糖蛋白(Spike，S)、小包膜蛋白(Envelope，E)、外膜蛋白 (Membrane，M)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)。
[0004]新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的尿苷酸特异性核糖核酸内切酶(以下简称“Nsp15”) 是新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2(以下简称“新冠病毒”)中的非结构蛋白，其酶学特征为特异性切割尿苷酸位点的核糖核酸内切酶，在新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的复制过程中发挥重要的作用。探索新冠病毒NSP15的活性抑制方法和因素，能够针对新冠病毒复制过程开发病毒抑制剂，进而为感染新冠病毒的患者治疗提供更多的治疗方案。

技术实现思路

[0005]针对以上现有技术的不足，申请人使用大肠杆菌表达系统体外表达新冠病毒Nsp15蛋白，并对其进行活性抑制物体外筛选时发现，来源于肠道中的某种成分对Nsp15的活性具有明显的抑制效果。通过进一步分析，确认发挥抑制作用的肠道来源物质成分为牛磺胆酸。本专利技术提供了利用牛磺胆酸对新冠病毒Nsp15的活性的抑制效果，将牛磺胆酸应用在新型冠状病毒治疗中的思路和方法，具体通过以下技术实现。
[0006]牛磺胆酸及其水溶性盐对新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的核糖核酸内切酶Nsp15活性抑制作用的应用。
[0007]牛磺胆酸(Taurocholic acid)作为一种初级胆汁酸，是肠道中常见的物质。肠道中可能存在的物质还有次级胆汁酸，例如牛磺脱氧胆酸(Taurodeoxycholic acid)；碳水化合物，例如果糖(Fructose)、纤维二糖(Cellobiose)、麦芽糖(Maltose)，以及氨基酸，例如天冬酰胺(Asparagine)等。
[0008]牛磺胆酸水溶性不高，目前一般使用其水溶性盐为原料进行相关实验，最常用的是牛磺胆酸钠盐。申请人通过利用牛磺胆酸钠盐、牛磺脱氧胆酸钠盐、苯紫红素4B (Benzopurpurine 4B，阳性对照，1mM)、果糖、纤维二糖、麦芽糖、天冬酰胺(Asparagine) 分别进行新冠病毒的Nsp15的活性抑制实验，设置牛磺胆酸钠盐、牛磺脱氧胆酸钠盐的浓度梯
度为10nM、100nM、1000nM(1μM)，果糖的浓度(w/v)梯度分别为0.005％、0.05％、 0.5％，纤维二糖的浓度(w/v)梯度分别为0.001％、0.01％、0.1％，麦芽糖的浓度(w/v) 梯度分别为0.002％、0.02％、0.2％，天冬酰胺的浓度梯度为4μM、40μM、400μM，设置超纯水作为空白对照。最终发现采用上述三个浓度的牛磺胆酸钠盐，均对Nsp15的活性具有明显的抑制作用，而牛磺脱氧胆酸钠盐、果糖、纤维二糖、麦芽糖无论采用哪个浓度，都对新冠病毒的Nsp15不具有明显的抑制效果。
[0009]因此，采用牛磺胆酸及其水溶性盐能够明显地抑制新冠病毒的Nsp15的活性，抑制活性的机制还有待深入研究。利用这种新发现的牛磺胆酸的功能，可将牛磺胆酸及其水溶性盐作为试剂或原料，应用于生产制备治疗新冠病毒的药物中。目前国内外其他研究机构未报道牛磺胆酸及其水溶性盐对新冠病毒的Nsp15的活性的这种抑制作用，是申请人新发现的牛磺胆酸的全新功能。
[0010]优选地，所述牛磺胆酸及其水溶性盐用于制备因新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染造成的人体疾病的治疗药物。
[0011]优选地，所述人体疾病为呼吸系统炎症。新冠病毒感染造成的人体疾病除了呼吸系统疾病以外，还会引起发热(发烧)、全身乏力、干咳、多种组织器官炎症、肺组织纤维化等病症。
[0012]更优选地，所述呼吸系统炎症为肺炎、呼吸道炎症。
[0013]更优选地，所述治疗药物为含有牛磺胆酸或其水溶性盐的口服剂、外用剂或注射剂。
[0014]进一步优选地，所述口服剂为含有牛磺胆酸或其水溶性盐的粉剂、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂。
[0015]进一步优选地，所述外用剂为含有牛磺胆酸或其水溶性盐的雾化剂、液态凝胶制剂。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益之处在于：本专利技术利用牛磺胆酸及其水溶性盐在新冠病毒Nsp15的特异性抑制作用，提供了牛磺胆酸及其水溶性盐在治疗因新冠病毒引起的人体疾病的应用方法，属于牛磺胆酸及其水溶性盐的全新功能和全新应用，对新冠病毒的防治具有非常重要的意义。
附图说明
[0017]图1为不同浓度的牛磺胆酸钠盐、苯紫红素4B阳性对照，与阴性对照ddH2O相比，对Nsp15活性抑制程度示意图；
[0018]图2为不同浓度的牛磺脱氧胆酸钠盐、苯紫红素4B阳性对照，与阴性对照ddH2O相比，对Nsp15活性抑制程度示意图；
[0019]图3为不同浓度的果糖、纤维二糖、麦芽糖、苯紫红素4B阳性对照，与阴性对照ddH2O 相比，对Nsp15活性抑制程度示意图；
[0020]图4为不同浓度的天冬酰胺、苯紫红素4B阳性对照，与阴性对照ddH2O相比，对Nsp15 活性抑制程度示意图。
SARS病毒核糖核酸内切酶及核糖核酸酶RNase A酶活性具有抑制作用的物质(Ortiz
‑
Alcantara J,Bhardwaj K,Palaninathan S,Frieman M,Baric R,Kao C.Small moleculeinhibitors of the SARS
‑
CoV Nsp15 endoribonuclease.Virus Adaptation and Treatment. 2010；2:125
‑
133)。
[0038]3、牛磺胆酸钠盐对新冠病毒核糖核酸内切酶Nsp15活性抑制效果的测定
[0039]本实施例采用牛磺胆酸钠盐、牛磺脱氧胆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛磺胆酸及其水溶性盐对新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的核糖核酸内切酶Nsp15活性抑制作用的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述牛磺胆酸及其水溶性盐用于制备因新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染造成的人体疾病的治疗药物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述人体疾病为呼吸系统...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘智，马遥，罗美，陈国忠，秦子鑫，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：