扁桃体类器官的制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种扁桃体类器官的制备方法及其用途，提供了一种扁桃体类器官制备培养基，其为在扁桃体形成培养基(TFM)中进一步添加HGF(肝细胞生长因子)且去除4

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】扁桃体类器官的制备方法及其用途


[0001]本专利技术涉及扁桃体类器官的制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]扁桃体是位于消化道和呼吸道入口的一组粘膜相关淋巴组织，被称为瓦尔代尔(Waldeyer)扁桃体环，包括一个咽扁桃体、两个管扁桃体、两个腭扁桃体和舌扁桃体。每个扁桃体由覆盖在淋巴滤泡上的上皮细胞组成，是抵御摄入或吸入的病原体(如细菌或病毒)的第一道防线。扁桃体上皮的隐窝能识别通过口腔引入的病原体，并传递信号以刺激B细胞、T细胞、巨噬细胞和树突状细胞的免疫反应。扁桃体容易受到细菌和病毒的感染，感染后可导致扁桃体炎、扁桃体肿大和咽部癌症。
[0003]以往的研究表明，扁桃体的细菌和病毒感染是慢性扁桃体疾病的主要原因，药理学、营养学和多态性因素也被认为是慢性扁桃体疾病的重要原因。然而，其病理生理机制仍然不清楚，而且存在争议。因此，还没有适合复制人类扁桃体的体外模型用于该病理研究，而且，由于不能使用实验动物模型，所以扁桃体的病理生理机制很难研究。
[0004]基于这些问题，利用人体标本或上皮干细胞进行器官3D培养的最新进展，使得生成人体上皮器官成为可能。这种3D培养模型可以代表人体的生理机能，因为人类上皮器官包括由所有组织特异性上皮细胞类型和上皮干细胞分化和增殖的结构。到目前为止，该方法已被广泛用于上皮组织相关疾病模型的生成和上皮生物学的研究(参见韩国专利10
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18719490000)，但仍缺乏制备保持扁桃体上皮细胞基本功能(如细胞组成和微结构)的扁桃体类器官的方法。
专利
技术实现思路

[0005]本专利技术的一个方面提供了一种制备扁桃体类器官的培养基(Tonsil Expansion Medium，TEM)，其为在扁桃体形成培养基(Tonsil Formation Medium，TFM)中另外添加肝细胞生长因子(HGF)且去除4
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[4
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(4
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氟苯基)
‑5‑
(4
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吡啶基)
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1H
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咪唑
‑2‑
基]苯酚的培养基。
[0006]在另一个实施方式中，扁桃体形成培养基包括HGF、FGF10、FGF2、碱性FGF、PGE2、A83
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01、烟酰胺(Nicotinamide)、头蛋白(Noggin)、R
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脊椎蛋白1(R
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spondin1)、抗生素
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抗真菌剂、glutamax、B27、SB202190、青霉素、链霉素、EGF和HEPES。
[0007]在另一个实施方式中，HGF在总的扁桃体类器官制备培养基组成中的浓度为20至80纳克/毫升。
[0008]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官表达CD44、神经生长因子受体、细胞角蛋白5、细胞角蛋白13、整合素α6和上皮细胞黏附分子的基因。
[0009]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官表达Toll样受体(TLR)2、3、4和6。
[0010]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官可以进行
essential Medium)、BME(Basal Medium Eagle)、RPMI1640、F
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10、F
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12、α
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MEM(α
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Minimal essential Medium)、GMEM(Glasgow's Minimal essential Medium)、IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)等，但不限于此。此外，培养基可以含有抗生素，如青霉素、链霉素、庆大霉素，或其中两种或多种的混合物。
[0024]如本文所用，术语“TFM”是指扁桃体形成培养基(Tonsil Formation Medium)，是指从人结肠类器官培养基(HCM)或人前列腺类器官培养基(HPM)中除去表皮生长因子(EGF)的组合物。
[0025]在另一个实施方式中，扁桃体形成培养基包括HGF、FGF10、FGF2、碱性FGF、PGE2、A83
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01、烟酰胺(Nicotinamide)、Noggin、R
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脊椎蛋白1、抗生素
‑
抗真菌剂、glutamax、B27、SB202190、青霉素、链霉素、EGF和HEPES。
[0026]在另一个实施方式中，总的扁桃体类器官制备培养基组成中包含的HGF的浓度为20至80纳克/毫升。
[0027]在一个实施方式中，培养基组分中HGF的总浓度为10至100纳克/毫升，10至90纳克/毫升，10至80纳克/毫升，10至70纳克/毫升，10至60纳克/毫升，20至80纳克/毫升，20至70纳克/毫升，20至60纳克/毫升，30至80纳克/毫升，30至70纳克/毫升，30至60纳克/毫升，40至80纳克/毫升，40至70纳克/毫升，或40至50纳克/毫升。
[0028]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官表达CD44、神经生长因子受体、细胞角蛋白5、细胞角蛋白13、整合素α6或上皮细胞粘附分子的基因。
[0029]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官表达Toll样受体(TLR)2、3、4或6。
[0030]在另一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官可以进行两次以上的传代培养。
[0031]如本文所用，术语“传代培养(subculture)”是指更换培养容器或分割细胞群，并以培养连续几代的方法进行培养，以连续长期培养细胞，特别是健康状态的类器官。一次性更换培养容器或通过分割细胞群进行培养被称为第一代。在本专利技术中，代(passage)可与代(generation)互换使用。
[0032]在一个实施方式中，由扁桃体类器官制备培养基制备的扁桃体类器官表达与实际人类扁桃体类器官相同的标志物和TLR，经证实，从第1世代到第5世代，即从第1代到第5代，约50天内可以正常培养和分化。
[0033]在另一个实施方式中，本专利技术提供了一种制备扁桃体类器官的方法，包括在扁桃体形成培养基(TFM)中额外添加肝细胞生长因子(HGF)且去除4
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[4
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(4
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氟苯基)
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吡啶基)
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1H
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咪唑
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基]苯酚，以制备扁桃体类器官制备培养基，以及在该扁桃体类器官制备培养基中培养扁桃体类器官。
[0034]在一个实施方式中，扁桃体类器官的尺寸可以是100至300，150至300，200至300，100至250，100至200，或150至250微米。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种扁桃体类器官制备培养基，其中，其为在扁桃体形成培养基(TFM)中进一步添加HGF(肝细胞生长因子)且去除4
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[4
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(4
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氟苯基)
‑5‑
(4
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吡啶基)
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1H
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咪唑
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基]苯酚的培养基。2.根据权利要求1所述的扁桃体类器官制备培养基，其中，所述扁桃体形成培养基包括HGF、FGF10、FGF2、碱性FGF、PGE2、A83
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01、烟酰胺、头蛋白(Noggin)、R
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脊椎蛋白1(R
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spondin1)、抗生素
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抗真菌剂、glutamax、B27、SB202190、青霉素、链霉素、EGF和HEPES。3.根据权利要求2所述的扁桃体类器官制备培养基，其中，所述HGF在总的所述扁桃体类器官制备培养基组成中的浓度为20至80纳克/毫升。4.根据权利要求1所述的扁桃体类器官制备培养基，其中，在所述扁桃体类器官制备培养基中制备的扁桃体类器官表达CD44、神经生长因子受体、细胞角蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳钟万，林永畅，金韩敬，金慧湅，
申请(专利权)人：类器官科学有限公司，
类型：发明
国别省市：