【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于评价抗癌药物疗效或筛选抗癌药物的方法，包括用抗癌药物或候选抗癌药物处理癌症类器官和免疫细胞的混合物的步骤。此外，本专利技术还涉及包含癌症类器官和免疫细胞的抗癌药物疗效评价系统或抗癌药物筛选系统。
技术介绍
1、类器官是通过对来源于组织或器官的细胞通过三维培养制备而成的器官类似物。它具有长期培养、低温保存(cryopreservation)、易于操作和观察等优点。同时，它被用作一种实验模型，可以通过再现体内可观察到的细胞的分级和组织学结构，以及在不永生的情况下保持细胞的原始特征，在比细胞更高的水平上研究生理现象。基于这些特性，与固有特性发生变化的永生细胞系和与人体结构不同的动物模型相比，类器官可以高精度地评价药物。特别是，由于使用的是源自患者的组织，因此在有可能对人体进行临床试验之前，检查药物的疗效和安全性。然而，以前开发的作为药物评价模型的癌症类器官存在不能反映肿瘤微环境的局限性，因此有必要开发具有各种肿瘤微环境的类器官，并将其用作药物评价模型。
2、肿瘤微环境是癌细胞被血管、免疫细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、信号分子和细胞外基质(ecm)包围的细胞环境。在肿瘤微环境中，癌细胞通过诱导胞外信号释放、促进癌细胞新生血管形成、外周耐受等方式影响微环境。因此，癌细胞改变了微环境，或者微环境影响了癌细胞的生长或转移。尤其是与淋巴细胞相关的肿瘤微环境，不仅与癌症的发生和转移高度相关，还与癌症的免疫系统逃避密切相关，影响抗癌药物的治疗反应，是抗癌免疫疗法的主要靶点。
3、例如，已知存在于肿瘤微环境
4、技术问题
5、本专利技术人开发了具有肿瘤微环境的癌症类器官，并进行了各种研究以将其用作药物评价平台。结果，在肿瘤微环境的各种细胞中，建立了一个以特定比例共同培养癌症类器官和免疫细胞的系统。此外，本专利技术已经通过实验证明，当癌症类器官在系统中适当生长时，可以准确地确认药物的疗效。
技术实现思路
1、本专利技术中公开的每个描述和实施例也可适用于其他描述和实施例。也就是说，本专利技术所公开的各种要素的所有组合都属于本专利技术的范围。此外，不能认为本专利技术的范围受到下文所述的具体描述的限制。
2、此外，应当理解的是，本说明书中未具体定义的术语具有本专利技术相关
中常用的含义。另外，除非上下文另有定义，否则单数包括复数，复数包括单数。
3、本专利技术的一个方面提供了一种评价抗癌候选药物疗效的方法，包括以下步骤：
4、(a)以1：0.5～5的比例混合癌症类器官和免疫细胞，并对混合物进行共培养；
5、(b)用候选抗癌药物处理步骤(a)的混合物；以及
6、(c)与阳性对照组或未用抗癌候选药物处理的组相比，当用步骤(b)中用抗癌候选药物处理的组中癌症类器官的生长抑制或死亡增加时，确定抗癌候选药物的疗效是优异的。
7、抗癌药物，尤其是免疫抗癌药物，是利用患者的免疫细胞来杀死肿瘤的，因此评价其疗效的评价平台应模拟患者体内的免疫环境。在本专利技术中，为了模拟体外免疫环境，构建了能够共培养癌症类器官和各种免疫细胞的评价平台。为了完全模拟患者的免疫环境，所有类型的免疫细胞都应共同培养，但每个患者的免疫细胞比例不同，这导致体外模拟的局限性。特别是，如果药物评价平台中包含的免疫细胞比例发生变化，药物的疗效也会随之改变，这就很难预测疗效。因此，每个平台都是根据免疫细胞的类型构建的，目的是准确评价药物的疗效。此外，该平台是使用各种免疫细胞构建的，以便根据药物靶向的免疫细胞选择合适的药效评价平台。
8、具体来说，步骤(a)是将癌症类器官和免疫细胞混合，并对混合物进行共培养，从而在体外再现体内肿瘤微环境。
9、在本专利技术中，免疫细胞可以是选自细胞毒性t细胞、m1巨噬细胞、m2巨噬细胞、tils、调节性t细胞和树突状细胞组成的组中的至少一种。
10、本文所用术语“类器官”是指具有三维结构的细胞团，并且它是指通过3d培养从器官或组织中分离出来的细胞而制备的器官类似物。类器官可以再现人体组织或器官的特定功能和形状，因为它由构成组织或器官的特定细胞群组成，其结构组织形式与人体实际组织或器官相似。
11、如本文所用，术语“癌症类器官”是指来源于从肿瘤中分离出来的细胞的类器官。
12、如本文所用，术语“细胞毒性t细胞(cd8+t细胞)”是指执行抗原特异性适应性免疫或获得性免疫的淋巴细胞。细胞毒性t细胞杀死感染细菌、病毒和癌症细胞等病原体的细胞，并产生tnf-α和ifn-γ等细胞因子。根据本专利技术，细胞毒性t细胞可以是渗入肿瘤组织或从肿瘤组织中分离出来的细胞毒性t细胞。在本说明书中，细胞毒性t细胞也可与“分化的t细胞”、“分化后t细胞”、“活化的t细胞”和“cd8+t细胞”互换使用。
13、如本文所用，术语“m1巨噬细胞(经典活化巨噬细胞，m1)”是肿瘤相关巨噬细胞(tam)的一种类型，指的是被细胞因子如lps、ifn-γ、il-1β、tnf-α、tlr参与等激活的巨噬细胞。m1分泌促炎细胞因子或趋化因子，如il-6、il-12或tnf-α，并通过作为抗原呈递细胞(apc)的功能激活t细胞或激活肿瘤浸润淋巴细胞(til)或nk细胞，或通过吞噬作用直接杀死肿瘤细胞，从而诱导病原体死亡或癌细胞死亡。在本说明书中，m1巨噬细胞也可与“m1”互换使用。
14、如本文所用，术语“m2巨噬细胞(或称活化巨噬细胞，m2)”是一种肿瘤相关巨噬细胞(tam)，是指由il-4、il-13、il-10等细胞因子激活的巨噬细胞。m2分泌mmp或cox-2等酶，或il-10或tgf-β等抗炎细胞因子，并相应地执行与炎症减轻、伤口愈合或组织修复有关的免疫反应。然而，m2分泌的酶可能会通过破坏肿瘤周围的组织来促进肿瘤细胞的增殖和转移，或参与血管生成的启动和维持以诱导肿瘤生长。在本说明书中，m2巨噬细胞也可与“m2”互换使用。
15、如本文所用，术语“til”是指存在于肿瘤组织附近或浸润肿瘤组织的淋巴细胞，也称为“肿瘤浸润性淋巴细胞”。此外，til可以是由各种类型的免疫细胞组成的淋巴细胞群。根据本专利技术，til可以是在细胞表面表达cd8蛋白的细胞，优选是cd8+t细胞，但并不限于此。
16、如本文所用，术语“调节性t细胞(treg)”是指通过抑制免疫反应在维持体内平衡和免疫耐受方面发挥重要作用，并通过抑制t细胞增殖和细胞因子产生防止自身免疫的淋巴细胞。根据本专利技术，调节性t细胞可以是渗入肿瘤组织或从肿瘤组织中分离出来的细胞。在本说明书中，调节性t细胞也可以与“treg细胞”或本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于评价抗癌候选药物疗效的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞选自细胞毒性T细胞、M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、TILs、调节性T细胞和树突状细胞组成的组中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是细胞毒性T细胞和M1巨噬细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述细胞毒性T细胞和所述M1巨噬细胞以1：0.5：0.5～3的细胞数量比混合进行的。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是M1巨噬细胞和M2巨噬细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述M1巨噬细胞和所述M2巨噬细胞以1：1～3：0.5～5的细胞数量比混合进行的。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是TILs，步骤(a)的共培养是通过将所述癌症类器官和TILs以1：1～2的细胞数量比混合进行的。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是细胞毒性T细胞和调节性T细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述细胞毒性T细胞和所述调节性T
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是细胞毒性T细胞和树突状细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述细胞毒性T细胞和所述树突状细胞以1：3：0.5～5的细胞数量比混合进行的。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗癌候选药物是选自由化合物、肽、肽模拟物、融合蛋白、抗体、适体、抗体-药物共轭物(ADC)、反义核酸、siRNA、shRNA、miRNA和以互补方式与DNA或mRNA结合的核酶所组成的组中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述癌症是选自由胆道癌、胃癌、肺癌、肝癌、结肠直肠癌、结肠癌、小肠癌、胰腺癌、脑癌、骨肉瘤、黑色素瘤、乳腺癌、硬化性腺病、子宫癌、宫颈癌、头颈部恶性肿瘤、食道癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾癌、肉瘤、前列腺癌、尿道癌、膀胱癌、血液系统恶性肿瘤、淋巴瘤和纤维腺瘤所组成的组中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述癌症类器官的生长抑制或死亡通过所示癌症类器官面积的增加或减少来确认。
11.一种使用权利要求1所述的方法评价抗癌药物功效的系统，所述系统包括癌症类器官和免疫细胞。
12.一种使用权利要求1所述的方法筛选抗癌药物的系统，所述系统包括癌症类器官和免疫细胞。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于评价抗癌候选药物疗效的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞选自细胞毒性t细胞、m1巨噬细胞、m2巨噬细胞、tils、调节性t细胞和树突状细胞组成的组中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是细胞毒性t细胞和m1巨噬细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述细胞毒性t细胞和所述m1巨噬细胞以1：0.5：0.5～3的细胞数量比混合进行的。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是m1巨噬细胞和m2巨噬细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述m1巨噬细胞和所述m2巨噬细胞以1：1～3：0.5～5的细胞数量比混合进行的。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是tils，步骤(a)的共培养是通过将所述癌症类器官和tils以1：1～2的细胞数量比混合进行的。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫细胞是细胞毒性t细胞和调节性t细胞，步骤(a)中的所述共培养是通过将所述癌症类器官、所述细胞毒性t细胞和所述调节性t细胞以1：3：0.5～3的细胞数量比混合进行的。
7.根据权利要求1所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：李宝 ，S·金，Y·申，金恩贞，李熙罗，金东炫，金志晓，
申请(专利权)人：类器官科学有限公司，
类型：发明
国别省市：
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