生物活性剂及其相关方法技术

本发明专利技术涉及检测、鉴定和使用在一个或多个细胞存在下从胞外基质获得的一种或多种生物活性剂的方法，例如一种或多种细胞信号转导多肽，以及所述生物活性剂。还提供了利用此类生物活性剂的研究、诊断和治疗方法。诊断和治疗方法。诊断和治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生物活性剂及其相关方法


[0001]本专利技术涉及生物活性剂，包括治疗剂，以及在所选生物样品中鉴定它们的方法。更具体地说，该方法涉及细胞与胞外基质(例如无细胞(acellular)胞外基质或脱细胞(decellularized)胞外基质)在体外相互作用的用途，由此该相互作用释放一种或多种感兴趣的生物活性剂，包括一种或多种具有潜在治疗功效的生物活性剂。在另一方面，本专利技术涉及一种此类生物活性剂，即具有干细胞募集活性的胞外基质蛋白核心蛋白聚糖(decorin)的多肽片段的鉴定、表征和用途。
[0002]专利技术背景
[0003]以下包括可能有助于理解本专利技术的信息。不认为此处提供的任何信息是现有技术，或与当前描述或要求保护的专利技术相关，或明确或隐含引用的任何出版物或文件是现有技术。本说明书中对现有技术的任何讨论都不应该视为承认这种现有技术已广为人知或构成本领域公知常识的一部分。
[0004]应当理解的是，对于一系列研究和治疗用途，持续需要生物活性剂，包括具有治疗活性的生物活性剂。虽然广泛的研究和开发工作集中在合成试剂上，但从生物系统中提取的生物活性剂具有重要的意义。
[0005]通常，已通过意外发现或靶向方法从完整组织中鉴定了来源于组织的生物活性剂，包括例如胞外基质(ECM)。然而，对于来自ECM的生物活性剂，这些方法面临许多挑战。例如，组织是复杂且高度异质的物质，不仅包括各种细胞类型，还包括ECM本身。因此，从作为正常组织的复杂混合物中鉴定物质需要各种级分、分离和分析技术，这些技术可能会遗漏可能有用的生物活性剂，包括治疗剂。此外，据信ECM及其组分的生物学特性取决于许多因素，包括组织的年龄、组织位置和任何疾病状态。此外，ECM和相互关联的细胞群通过各种生物活性剂介导，参与多种信号转导过程。这些信号转导事件可能是连续的或瞬时的，并且取决于所涉及的ECM组分和细胞。这使得重要的生物活性剂在组织中可能只是瞬时的或寿命短暂，使其鉴定具有挑战性。因此，现有方法受到组织ECM的复杂性、ECM中潜在治疗剂的相对丰度、组织ECM中发生的复杂相互作用以及分离和鉴定生物活性剂的实践挑战的限制。
[0006]因此，需要从ECM(包括无细胞胞外基质(aECM)或脱细胞胞外基质(dECM)材料)中鉴定潜在治疗性生物分子的新方法，以克服这些限制。
[0007]然而，目前还没有有效且方便的方法适用于鉴定来源于细胞与ECM相互作用的生物活性剂，尤其是那些适用于鉴定来源于一个或多个细胞群与ECM(包括aECM和dECM)相互作用的生物活性剂的方法。
[0008]因此，存在开发新的改进方法来鉴定这类物质的需求，以及对这类物质本身的相关需求。
[0009]因此，本专利技术的目的是提供一种或多种生物活性剂，例如生物活性多肽，和/或一种或多种检测/或鉴定此类物质的方法，或至少提供现有方法的有用替代方法，或至少向公众提供有用的选择。
[0010]专利技术概述
[0011]在第一方面中，本专利技术涉及选自下组的分离、纯化、重组或合成多肽：
[0012]a)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188的氨基酸序列组成；
[0013]b)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188的氨基酸序列组成；
[0014]c)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0015]d)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0016]e)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至177的氨基酸序列组成；
[0017]f)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至177的氨基酸序列组成；
[0018]g)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至177内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0019]h)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至177内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0020]i)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至170的氨基酸序列组成；
[0021]j)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至170的氨基酸序列组成；
[0022]k)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至170内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0023]l)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至170内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0024]m)多肽，其包含、基本上由或由SEQ ID NO:1
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4中任一所述的氨基酸序列组成；
[0025]n)多肽，其包含、基本上由或由上述a)到m)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成；
[0026]o)多肽，其包含或由上述a)到n)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成，其中所述多肽包含能够相互作用于或招募一个或多个细胞(包括一个或多个干细胞)的基序或区域；
[0027]p)多肽，其包含或由上述a)到o)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成，其中所述多肽包含能够相互作用于或招募一个或多个间充质干细胞的基序或区域；
[0028]q)上述a)至p)中任一的功能片段、功能变体、肽类似物或模拟肽(peptidomimetic)或衍生物；和
[0029]r)与上述a)至q)中任一具有至少约70％氨基酸相同性的多肽。
[0030]本文所描述的任何实施方式可涉及本文所呈现的任何方面。
[0031]本专利技术的另一方面涉及组合物，包括药物组合物，其包含选自下组的一种或多种多肽：
[0032]a)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188的氨基酸序列组成；
[0033]b)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188的氨基酸序列组成；
[0034]c)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
[0035]d)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种选自下组的分离、纯化、重组或合成多肽：a)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188的氨基酸序列组成；b)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188的氨基酸序列组成；c)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；d)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至188内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；e)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至177的氨基酸序列组成；f)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至177的氨基酸序列组成；g)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至177内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；h)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至177内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；i)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至170的氨基酸序列组成；j)多肽，其包含、基本上包含或由对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至170的氨基酸序列组成；k)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基1至170内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；l)哺乳动物核心蛋白聚糖的N
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端片段，其包含、基本上由或由至少10个对应于哺乳动物核心蛋白聚糖残基31至170内的任何氨基酸序列的连续氨基酸组成；m)多肽，其包含、基本上由或由SEQ ID NO:1
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4中任一所述的氨基酸序列组成；n)多肽，其包含、基本上由或由上述a)到m)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成；o)多肽，其包含或由上述a)到n)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成，其中所述多肽包含能够相互作用于或招募一个或多个细胞(包括一个或多个干细胞)的基序或区域；和p)多肽，其包含由或上述由a)到o)中任一所述的至少约10个连续氨基酸组成，其中所述多肽包含能够相互作用于或招募一个或多个间充质干细胞的基序或区域；q)上述a)至p)中任一的功能片段、功能变体、肽类似物或模拟肽或衍生物；和r)与上述a)至q)中任一具有至少约70％氨基酸相同性的多肽。2.一种组合物，包括药物组合物，其包含如权利要求1所述的一种或多种多肽。3.一种包含编码权利要求1所述的多肽的核酸的表达构建体，一种包含表达构建体的载体，所示表达构建体包含编码权利要求1所述的多肽的核酸，或包含如上所定义的表达构建体或载体的宿主细胞。4.一种提供一种或多种生物活性剂的方法，所述方法包括以下步骤：
i.提供胞外基质；ii.使一个或多个细胞与胞外基质体外接触；iii.任选地，至少部分纯化一种或多种生物活性剂；和iv.回收所述一种或多种生物活性剂。5.一种检测和/或鉴定一种或多种生物活性剂的方法，所述方法包括以下步骤：i.提供胞外基质；ii.使一个或多个细胞与胞外基质体外接触足以释放一种或多种生物活性剂的时间；iii.任选地，至少部分纯化一种或多种生物活性剂；和iv.检测和/或鉴定所述一种或多种生物活性剂。6.如权利要求4或5所述的方法，其中所述胞外基质是无细胞ECM、脱细胞ECM或基本不含细胞的胞外基质。7.如权利要求6所述的方法，其中所述无细胞ECM是天然存在的无细胞ECM。8.如权利要求4
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7中任一项所述的方法，其中所述ECM由来自任何动物物种，包括哺乳动物、爬行动物、鸟类和昆虫的真皮、心包、胃、小肠、膀胱、胎盘、肾小囊或体腔衬膜制备。9.如权利要求4
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8中任一项所述的方法，其中所述ECM是绵羊前胃基质(OFM)。10.如权利要求4至9中任一项所述的方法，其中所述接触时间足以从所述ECM释放一种或多种生物活性剂。11.如权利要求4
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10中任一项所述的方法，其中所述接触时间为至少约6小时、至少约12小时、至少约18小时或至少约24小时。12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个细胞包含同质细胞群。13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞是巨噬细胞，例如活化的巨噬细胞。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ECM和一个或多个细胞各自来自一种组织或各自属于在体内彼此不接触的类型。15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物活性剂是通过蛋白水解切割、通过细胞加工(例如通过胞内溶酶体内吞和消化蛋白质)、通过氧化迸发或通过构象改变而释放的多肽或肽。...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：阿罗阿生物外科有限公司，
类型：发明
国别省市：