经修饰的AAV衣壳及其用途制造技术

本文所述的方法提供一种能够在肌肉组织内优先靶向感兴趣基因(GOI)的经修饰的VP1衣壳以及具有以该经修饰的VP1衣壳封装的GOI的重组腺相关病毒(rAAV)及其用途。重组腺相关病毒(rAAV)及其用途。

Modified AAV capsid and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的AAV衣壳及其用途
[0001]相关申请的引用
[0002]本申请主张2019年10月10日提交的美国临时专利申请62/913,223和2020年5月8日提交的美国临时专利申请63/021,712的申请日权益，该临时专利申请各自的整体内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]重组腺相关病毒(rAAV)载体有望成为用于体内基因递送的主要平台。多种rAAV载体使得递送至包括肌肉系统在内的多种组织成为可能，用于治疗多种遗传疾病和其他复杂疾病。一些天然血清型以及经工程改造的rAAV衣壳表现出增强的肌肉广泛生物分布，这可以减少所需的总剂量。
[0004]以前，肌肉的基因递送是通过将rAAV载体直接注射到肌肉中进行的。最近，rAAV静脉(IV)给药越来越常地用来促进其分布到多种类型的肌肉，现在是一些临床试验的首选给药途径。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个方面提供一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12组成的组的多肽，其中，该多肽插入在野生型AAV9 VP1衣壳的残基588与589之间，或非AAV9野生型Clad F(例如，AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV1)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳的两个对应残基之间。也就是说，除了插入在野生型AAV9 VP1衣壳的残基588与589之间或非AAV9野生型Clad F(例如，AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV6)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳的两个对应残基之间的SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12中的任一者的多肽之外，在野生型Clad F(例如，AAV9或AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV6)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳中不存在其他序列变化。
[0006]换言之，本专利技术提供一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含插入在野生型AAV9 VP1衣壳的残基588与589之间或非AAV9野生型Clad F(例如，AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV6)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳的两个对应残基之间的多肽，其中所述插入在野生型AAV9 VP1衣壳的残基588与589之间或非AAV9野生型Clad F(例如，AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV6)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳的两个对应残基之间的多肽包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12中的任一者的氨基酸序列，或基本上由其组成或由其组成。
[0007]在某些实施方案中，mAAV衣壳多肽包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的多肽。
[0008]也就是说，本专利技术的一个具体方面提供一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:1的多肽、基本上由其组成或由其组成。
[0009]在一个相关具体方面，本专利技术提供一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其
包含SEQ ID NO:11的多肽、基本上由其组成或由其组成。
[0010]在有一个相关具体方面，本专利技术提供一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:12的多肽、基本上由其组成或由其组成。
[0011]本专利技术的另一方面提供一种重组腺相关病毒(rAAV，诸如重组AAV6、AAV8、AAVrh.74或AAV9)，其包含本文所述的受试mAAV衣壳多肽中的任一者。
[0012]在某些方面，rAAV的VP1衣壳由本专利技术的任一种mAAV衣壳多肽组成或基本上由其组成。
[0013]在某些实施方案中，rAAV包含侧翼具有一对AAV ITR序列的感兴趣基因(GOI)。
[0014]在某些实施方案中，该一对AAV ITR序列是AAV2、AAV6、AAV8、AAVrh.74或AAV9 ITR序列。
[0015]在一些实施方案中，感兴趣基因(GOI)包括：负责或有缺陷于LGMD2E(肢带型肌营养不良症2E型)、LGMD2D(肢带型肌营养不良症2D型)、LGMD2C肢带型肌营养不良症2C型)、LGMD2B(肢带型肌营养不良症2B型)、LGMD2L(肢带型肌营养不良症2L型)、LGMD2I(肢带型肌营养不良症2I型)的基因；或关于NAGLU(α
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N
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乙酰葡糖胺糖苷酶，对于Sanfilippo综合征或黏多糖病IIIB型(MPS IIIB))、磺酰胺酶SGSH(对于黏多糖病IIIA型或MPS IIIA)、因子IX、因子VIII、肌微管素1(MTM1)、运动神经元存活(SMN，对于脊髓性肌肉萎缩症或SMA)、GalNAc转移酶GALGT2、钙蛋白酶
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3(CAPN
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3)、酸性α
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葡萄糖苷酶(GAA，对于庞贝氏症)、α
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半乳糖苷酶A或GLA(对于Fabry病)、葡糖脑苷脂酶、抗肌萎缩蛋白(dystrophin)或微小抗肌萎缩蛋白(microdystrophin)的基因或编码序列。
[0016]在某些实施方案中，GOI编码微小抗肌萎缩蛋白。
[0017]在某些实施方案中，微小抗肌萎缩蛋白是US7,906,111、US7,001,761、US7,510,867、US6,869,777、US8,501,920、US7,892,824、PCT/US2016/013733或US10,166,272中描述的微小抗肌萎缩蛋白。
[0018]在某些实施方案中，微小抗肌萎缩蛋白包含全长抗肌萎缩蛋白的R16和R17血影蛋白样重复序列的编码序列(诸如US7,892,824中描述的编码序列)。
[0019]在某些实施方案中，微小抗肌萎缩蛋白包含全长抗肌萎缩蛋白的R1、R16、R17、R23和R24血影蛋白样重复序列的编码序列，或者PCT/US2016/013733或US10,479,821中描述的微小抗肌萎缩蛋白。
[0020]在某些实施方案中，GOI可操作地链接至转录调节匣，诸如肌肉特异性启动子(例如CK8启动子或心肌肌钙蛋白T(cTnT)启动子)。
[0021]在某些实施方案中，GOI是编码一种蛋白质的微小抗肌萎缩蛋白基因，该蛋白质从N端到C端包含：氨基端肌动蛋白结合(AB1)结构域、β
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营养不良聚糖结合结构域、铰链1结构域(H1)、包括血影蛋白样重复序列1(SR1)、血影蛋白样重复序列16(SR16)、血影蛋白样重复序列17(SR17)、血影蛋白样重复序列23(SR23)和血影蛋白样重复序列24(SR24)的五个血影蛋白样重复序列组成的血影蛋白样重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12组成的组的多肽，其中，所述多肽插入在野生型AAV9 VP1衣壳的残基588与589之间，或者非AAV9野生型Clad F(例如，AAVhu.32)、野生型Clad A(例如，AAV6)或野生型Clad E(例如，AAV8、AAVrh.10或AAVrh.74)VP1衣壳的两个对应残基之间。2.根据权利要求1所述的mAAV衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的多肽。3.一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:1的多肽、基本上由其组成，或由其组成。4.一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:11的多肽、基本上由其组成，或由其组成。5.一种经修饰的腺相关病毒(mAAV)衣壳多肽，其包含SEQ ID NO:12的多肽、基本上由其组成，或由其组成。6.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的mAAV衣壳多肽。7.根据权利要求6所述的rAAV，其中，所述rAAV的所述VP1衣壳由或基本上由根据权利要求1至5中任一项所述的mAAV衣壳多肽组成。8.根据权利要求6或7所述的rAAV，其中，所述rAAV包含侧翼具有一对AAV ITR序列的感兴趣基因(GOI)。9.根据权利要求8所述的rAAV，其中，所述一对AAV ITR序列是AAV2或AAV9 ITR序列。10.根据权利要求8或9所述的rAAV，其中，所述感兴趣基因(GOI)包括：负责或有缺陷于LGMD2E(肢带型肌营养不良症2E型)、LGMD2D(肢带型肌营养不良症2D型)、LGMD2C(肢带型肌营养不良症2C型)、LGMD2B(肢带型肌营养不良症2B型)、LGMD2L(肢带型肌营养不良症2L型)、LGMD2I(肢带型肌营养不良症2I型)的基因；或关于NAGLU(α
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N
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乙酰葡糖胺糖苷酶，对于Sanfilippo综合征或黏多糖病IIIB型(MPS IIIB))、磺酰胺酶SGSH(对于黏多糖病IIIA型或MPS IIIA)、因子IX、因子VIII、肌微管素1(MTM1)、运动神经元存活(SMN，对于脊髓性肌肉萎缩症或SMA)、GalNAc转移酶GALGT2、钙蛋白酶
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3(CAPN
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3)、酸性α
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葡萄糖苷酶(GAA，对于庞贝氏症)、α
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半乳糖苷酶A或GLA(对于Fabry病)、葡糖脑苷脂酶、抗肌萎缩蛋白或微小抗肌萎缩蛋白的基因或编码序列。11.根据权利要求8或9所述的rAAV，其中，所述GOI编码微小抗肌萎缩蛋白。12.根据权利要求11所述的rAAV，其中，所述微小抗肌萎缩蛋白是US7,906,111、US7,001,761、US7,510,867、US6,869,777、US8,501,920、US7,892,824、PCT/US2016/013733或US10,166,272中描述的微小抗肌萎缩蛋白。13.根据权利要求12所述的rAAV，其中，所述微小抗肌萎缩蛋白包含全长抗肌萎缩蛋白的R16和R17血影蛋白样重复序列的编码序列(诸如US7,892,824中描述的编码序列)。14.根据权利要求13所述的rAAV，其中，所述微小抗肌萎缩蛋白包含全长抗肌萎缩蛋白的R1、R16、R17、R23和R24血影蛋白样重复序列的编码序列，或者PCT/US2016/013733或US10,479,821中描述的微小抗肌萎缩蛋白。15.根据权利要求8至14中任一项所述的rAAV，其中，所述GOI可操作地链接至转录调节匣，诸如肌肉特异性启动子(例如，CK8启动子或心肌肌钙蛋白T(cTnT)启动子)。
16.根据权利要求8至15中任一项所述的rAAV，其中，所述GOI是编码一种蛋白质的微小抗肌萎缩蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：坚固生物科技公司，
类型：发明
国别省市：