一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法，属于生物工程技术领域。该多肽杂化物的制备方法包括：将多肽加入到NH2‑

【技术实现步骤摘要】
一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法。

技术介绍

[0002]免疫检查点抑制剂(ICI)，如抗PD1、抗CTLA4，在癌症临床治疗中得到了广泛的应用。由于癌症患者对ICI的免疫反应，正成为免疫治疗的主要障碍，这使得只有少数患者可以从免疫检查点阻断(ICB)治疗中受益。相关机制研究表明，这种低敏感性与免疫抑制肿瘤微环境密切相关，它会减弱T细胞(Teff)的浸润能力和活性以及治疗性树突状细胞(DCs)的聚集，从而导致免疫逃避。因此，迫切需要开发一种可以增强肿瘤对ICI敏感的药物。
[0003]现有研究表明，Wnt/β
‑
catenin蛋白通路的激活与癌症中出现的免疫逃避呈正相关。例如，在CRC的免疫组织化学分析中，β
‑
catenin在癌症中的过表达会显著降低CD8+T细胞(抗肿瘤免疫中的关键效应免疫细胞)对肿瘤浸润。此外，TCGA分析研究表明，β
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catenin在非T细胞炎症肿瘤中高表达。在转移性黑色素瘤模型中，肿瘤内异常激活的β
‑
catenin可以引起T细胞排斥和抵抗ICI治疗。这些发现为开发靶向β
‑
catenin途径的生物活性抑制剂联合免疫检查点阻断剂提供了强有力的理论基础，以克服耐ICI药性并增强免疫治疗。
[0004]β
‑
catenin抑制剂难以直接结合β
‑
catenin干预癌症治疗，其上游通路的相关靶点抑制剂会导致正常细胞的发育障碍，并引起大量副作用。据报道，bcl9(B
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cell/Lymphoma
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9)是细胞核β
‑
catenin在下游通路中的共激活剂，可将β
‑
catenin转运至TCF并促进Wnt相关转录基因的表达，其中许多与肿瘤发生和恶性进展密切相关。此外，Bcl9在癌症细胞中也过表达，它的缺失可以有效抑制β
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catenin依赖性癌症模型中的肿瘤发生和侵袭。bcl9仅采用α
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螺旋的方式与β
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catenin的第一个Arm结合，对其他蛋白与β
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catenin的相互作用几乎没有影响。
[0005]基于上述机制，目前已开发出大量可用于癌症治疗中阻断β
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catenin/Bcl9相互作用的生物活性肽，例如hsBCL9CT
‑
2424、磺基
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γ
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AA25、ECRV26。但由于细胞膜通透性差，易被蛋白酶降解，导致该类药物难以用于临床。纳米医学为开发一个安全有效的平台从而将多肽递送至胞内相关靶点提供了一些有力工具。尽管已经在几种纳米制剂中取得了一些成功，但由于合成过程复杂、构建单元多样且成本高，在临床转化应用方面仍不容乐观。因此，开发出一种简便、易于规模化且与药物相容的纳米制剂，能为免疫治疗中的联合用药提供一种新参考。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于解决由于多肽的细胞膜通透性差，易被蛋白酶降解，导致癌症治疗中阻断β
‑
catenin/Bcl9相互作用的生物活性肽实际应用效果不佳的问题。
[0007]基于上述目的，本专利技术提供了一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法来解决本领域内的这种需要。
[0008]一方面，本专利技术涉及一种包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，包括：
将多肽加入到NH2‑
PEG
‑
SH的乙醇溶液中，待所述多肽完全溶解后加入HEPES和HAuCl4加热搅拌制得多肽
‑
金聚合物纳米壳；将HEPES、GdOF和HAuCl4混合搅拌，与所述多肽
‑
金聚合物纳米壳加热搅拌形成制得所述包含GdOF的多肽杂化物。
[0009]进一步地，本专利技术提供的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法中，所述多肽包括Bcl9肽；具体地，每0.1～4mg所述Bcl9肽配合0.45～2.25mg所述GdOF制得所述包含GdOF的多肽杂化物。
[0010]进一步地，本专利技术提供的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法中，所述加热搅拌制得多肽
‑
金聚合物纳米壳为30～80℃，200～800rpm下混合5～30min；所述加热搅拌形成制得所述包含GdOF的多肽杂化物为30～80℃，200～800rpm下混合5～30min。
[0011]进一步地，本专利技术提供的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法中，以质量比计，所述多肽与所述NH2‑
PEG
‑
SH的配比为1:1；具体地，所述NH2‑
PEG
‑
SH的分子量为2K。
[0012]具体地，本专利技术提供的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法包括：
[0013]每0.1～4mg所述Bcl9肽添加到2.25mL含有2mg所述NH2‑
PEG
‑
SH的水溶液中；待所述Bcl9肽完全溶解后，加入2.25mL50mMpH6.5～8.0的HEPES溶液和500μL 10mM的HAuCl4水溶液，30～80℃，200～800rpm下混合5～30min，制得所述多肽
‑
金聚合物纳米壳；每2.25mL 50mM pH6.5～8.0所述HEPES水溶液与2.25mL0.2～1mg/mL所述GdOF溶液和500μL 10mM HAuCl4水溶液混合；搅拌5～30分钟后与所述多肽
‑
金聚合物纳米壳在30～80℃、200～800rpm下混合5～30分钟，制得所述包含GdOF的多肽杂化物；所述GdOF溶液为所述GdOF分散在20％乙腈和80％标准PBS中。
[0014]具体地，本专利技术提供的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法包括：将0.1～4mg Bcl9肽添加到含有2.25mLNH2‑
PEG
‑
SH(2mg，MW：2K)水溶液中；待肽完全溶解后，加入2.25mL 50mM pH6.5～8.0的HEPES(4
‑
(2
‑
hydroxyerhyl)piperazine
‑1‑
erhanesulfonic acid)溶液和500μL 10mM HAuCl4水溶液，30～80℃，200～800rpm下混合5～30min，制得多肽
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金聚合物纳米壳；将2.25mL 50mM pH6.5～8.0HEPES水溶液与2.25mL GdOF溶液(0.2～1mg GdOF分散在20％乙腈和80％标准PBS中)和500μL 10mM HAuCl4水溶液混合；搅拌5～30分钟后与多肽
‑
金聚合物纳米壳在30～80℃、200～800rpm下混合5～30分钟，制得包含GdOF的多肽杂化物，干燥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，包括：将多肽加入到NH2‑
PEG
‑
SH的乙醇溶液中，待所述多肽完全溶解后加入HEPES和HAuCl4加热搅拌制得多肽
‑
金聚合物纳米壳；将HEPES、GdOF和HAuCl4混合搅拌，与所述多肽
‑
金聚合物纳米壳加热搅拌形成制得所述包含GdOF的多肽杂化物。2.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，所述多肽包括Bcl9肽。3.根据权利要求2所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，每0.1～4mg所述Bcl9肽配合0.45～2.25mg所述GdOF制得所述包含GdOF的多肽杂化物。4.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，所述加热搅拌制得多肽
‑
金聚合物纳米壳为30～80℃，200～800rpm下混合5～30min；所述加热搅拌形成制得所述包含GdOF的多肽杂化物为30～80℃，200～800rpm下混合5～30min。5.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，以质量比计，所述多肽与所述NH2‑
PEG
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SH的配比为1:1。6.根据权利要求5所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法，其特征在于，所述NH2‑
PEG
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【专利技术属性】
技术研发人员：闫瑾，尤伟名，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：