转录调控蛋白突变株及应用制造技术

本发明专利技术公开了转录调控蛋白突变株及应用，属于生物技术领域，其技术方案要点是：转录调控蛋白突变株包括C154

【技术实现步骤摘要】
转录调控蛋白突变株及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及转录调控蛋白突变株及应用。

技术介绍

[0002]合成生物学是一门新型的交叉学科，以工程化的理念，对生物系统进行重设 计、改造和优化的过程。基因线路的设计和合成是合成生物学非常重要和核心的 一部分内容，在基因线路的设计和合成过程中基因元件就像是每一块积木，选择 不同的基因元件以特定的方式组合，导入活细胞后可以行驶特定的生物功能。因 此，丰富基因元件的组成以及探索每一个元件对基因线路的影响对合成生物学的 发展非常重要。
[0003]启动子是基因线路设计中使用到的非常重要的一种基因元件，而转录因子则 像“开关”决定着启动子下游基因的表达。常用的用于原核生物基因表达的启动 子大都是诱导型，例如T7启动子需要IPTG诱导，PBAD启动子需要阿拉伯糖诱 导。诱导型启动子的优点是可以让蛋白更好的在体内表达，但是同时增加了蛋白 表达的成本；并且，目前还具有更多的蛋白表达和基因线路设计的需求亟待满足； 此外，转录调控强度对基因线路表达的影响目前也仍不清楚。r/>[0004]为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.转录调控蛋白突变株，其特征是：所述转录调控蛋白突变株包括C154
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Muts调控蛋白和AraC
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Muts调控蛋白，所述C154
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Muts调控蛋白不需要阿拉伯糖诱导能够直接启动PBAD启动子下游基因表达；且所述C154
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Muts调控蛋白和AraC
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Muts调控蛋白的制备方法如下：S1、以AraC调控蛋白Ⅰ为模板通过分子克隆获得N端153个氨基酸缺失的片段，并将所述片段进行表达，获得C154蛋白；S2、验证所述C154蛋白可以在没有阿拉伯糖诱导的情况下启动PBAD启动子下游基因的表达；S3、以C154蛋白为起始模板进行蛋白定向演化，通过构建的筛选体系筛选出PBAD启动子的转录调控蛋白突变株，即为C154
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Muts调控蛋白；S4、所述C154
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Muts调控蛋白经测序后确定突变位点，通过融合PCR的方法将突变位点引入AraC蛋白Ⅱ中从而获得AraC
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Muts调控蛋白。2.根据权利要求1所述的转录调控蛋白突变株，其特征是：步骤S3所述的筛选体系由1个表达质粒和1个报告质粒组成，所述表达质粒为pHY
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01质粒，所述报告质粒为Reporter Plasmid质粒；所述pHY
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01质粒和Reporter plasmid质粒的构建方法分别如下：1)pHY
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01质粒的构建：以pBAD
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Myc
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HisA质粒为模板、以c154
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F
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NcoI和araC
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R
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BamHI为引物扩增出C154基因片段利用NcoI和BamHI酶切位点插入到pACYC
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duet质粒中，从而得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：华艳，李明，
申请(专利权)人：安徽省立医院中国科学技术大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：