【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肌营养不良的组合疗法
[0001]相关申请的引用
[0002]本申请要求2018年12月12日提交的美国临时专利申请号62/778,646的优先权和申请日的权益，所述临时专利申请的全部内容特此以引用的方式并入本文。
技术介绍
[0003]肌营养不良(MD)是一组导致进行性无力和肌肉质量损失的疾病。在肌营养不良中，异常基因(突变型基因)不产生形成健康肌肉所需的功能性野生型蛋白质。
[0004]肌营养不良对受影响患者的生活质量具有严重致衰弱影响。杜氏型肌营养不良(DMD)是最具破坏性的肌肉疾病之一，每5,000名新生儿中就有1人受到影响。它是最典型的肌营养不良，由编码肌营养不良蛋白相关蛋白复合物(DAPC)的成员的基因中的突变引起。这些MD由通过DAPC键结的肌纤维膜
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细胞骨架的损失相关的膜脆性引起。
[0005]具体地，DMD由DMD基因中的突变引起，导致DMD mRNA的减少以及肌营养不良蛋白或功能性肌营养不良蛋白(一种与肌营养不良蛋白相关蛋白复合物(DAPC)相关的427kDa肌纤维膜蛋白...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组病毒载体，所述重组病毒载体包含：a)编码功能性目标基因或蛋白质(GOI)如有效治疗肌营养不良的功能性目标基因或蛋白质的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含3'
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UTR编码区并且紧邻异源内含子序列的3'，所述异源内含子序列增强由所述多核苷酸编码的所述功能性蛋白质的表达；b)与所述多核苷酸可操作地连接并驱动所述多核苷酸的表达的控制元件(例如，肌肉特异性控制元件)；以及c)插入所述内含子序列或所述3'
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UTR编码区中的一个或多个编码序列；其中所述一个或多个编码序列独立地编码：RNAi序列(siRNA、shRNA、miRNA)、反义序列、基因编辑酶的引导序列、微小RNA(miRNA)和/或miRNA抑制剂。2.如权利要求1所述的重组病毒载体，其中所述重组病毒载体是重组AAV(腺相关病毒)载体。3.如权利要求1或2所述的重组病毒载体，其中：所述一个或多个编码序列插入所述3'
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UTR编码区中，或在聚腺苷酸化(polyA)信号序列(例如，AATAAA)之后。4.如权利要求1至3中任一项所述的重组病毒载体，其中在所述一个或多个编码序列存在下，所述功能性GOI的表达基本上不受影响(例如，与没有插入所述一个或多个编码序列的其他方面相同的对照构建体相比)。5.如权利要求1至4中任一项所述的重组病毒载体，其中：a)所述多核苷酸是编码功能性肌营养不良蛋白的肌营养不良蛋白微基因或小基因；和/或，b)所述控制元件是与所述肌营养不良蛋白小基因可操作地连接并驱动所述肌营养不良蛋白小基因的表达的肌肉特异性启动子。6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其中所述功能性肌营养不良蛋白是microD5，和/或所述肌肉特异性启动子是CK启动子。7.如权利要求1至6中任一项所述的重组病毒载体，其中所述一个或多个编码序列包含诱导缺陷型肌营养不良蛋白的外显子如肌营养不良蛋白的外显子45
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55或肌营养不良蛋白的外显子44、45、51和/或53中的任一个的跳跃的外显子跳跃反义序列。8.如权利要求1至7中任一项所述的重组病毒载体，其中所述微小RNA是miR
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1、miR
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133a、miR
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29c、miR
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30c和/或miR
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206。9.如权利要求8所述的重组病毒载体，其中所述微小RNA是任选地具有经修饰的侧翼主链序列的miR
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29c，所述经修饰的侧翼主链序列增强针对靶序列设计的miR
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29c的引导链的加工。10.如权利要求9所述的重组病毒载体，其中所述经修饰的侧翼主链序列来自或基于miR
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30、
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101、
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155或
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451。11.如权利要求8至10中任一项所述的重组病毒载体，其中所述微小RNA在宿主细胞中的表达与所述微小RNA在所述宿主细胞中的内源表达相比上调至少约1.5至15倍(例如，约2至10倍、约1.4至2.8倍、约2至5倍、约5至10倍、约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或约15倍)。12.如权利要求1至11中任一项所述的重组病毒载体，其...
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