一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用。通过靶向NRF2的ETGE基序开发出一种ETGE多肽，使其作为强有效的NRF2特异性激活剂，将该ETGE多肽应用在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中，为预防和治疗包括但不限于肝脏的多种器官缺血再灌注损伤提供了新的治疗策略。损伤提供了新的治疗策略。损伤提供了新的治疗策略。

Application of an ETGE polypeptide in the preparation of drugs for the treatment of multiple organ ischemia-reperfusion injury

【技术实现步骤摘要】
一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用

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[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用。

技术介绍
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[0002]肝脏缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤常发生于肝脏移植、肝脏切除手术、休克等，是造成手术失败甚至是患者死亡的重要原因。再灌注时期产生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS)，导致细胞膜结构中的脂质和蛋白质被氧化，最终导致细胞膜和线粒体膜通透性发生改变，进而引发细胞凋亡和坏死。因此，再灌注时期的氧化应激与抗氧化系统失衡是引发肝脏I/R损伤的重要原因。而目前临床上除了基础的抗炎保肝药，并没有针对I/R损伤的预防或治疗用药。
[0003]NRF2(nuclear factor erythroid 2like 2)是细胞内非常重要的转录因子，在维持细胞内氧化还原稳态上发挥着重要的调控作用。NRF2能调控200多个基因的表达，发挥重要的抗氧化作用。许多研究表明NRF2能在心、肝、肺、肾、脑等多种脏器I/R中减轻氧化应激引起的损伤。在静息状态下，细胞质中的NRF2通过其蛋白序列上的ETGE基序与KEAP1
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Clu3 E3泛素连接酶复合体结合，随后NRF2被泛素化并降解，无法发挥抗氧化的功能。因此强有效的NRF2特异性激活剂，可以预防和治疗包括但不限于肝脏的多种器官缺血再灌注损伤。
[0004]此外，氧化应激反应通过激活一系列信号通路参与细胞凋亡、炎症反应或细胞功能的改变等，参与机体多种疾病病理性改变，如癌症、衰老、心脏病、关节炎、糖尿病、阿兹海默症、帕金森病及多种口腔疾病等。因此寻找强有效的NRF2特异性激活剂，是预防和治疗氧化应激引起的多种疾病的重要策略。

技术实现思路
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[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对上述背景，本专利技术提出一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用，通过靶向NRF2的ETGE基序开发出ETGE多肽，可用于预防或治疗包括但不限于肝脏的多种器官的缺血再灌注损伤，此外也可用于预防和治疗氧化应激引起的多种疾病。
[0007](二)技术方案
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用，所述ETGE多肽氨基酸序列为FITC
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C6
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Ala
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Ala
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Pro
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Glu
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Pro
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Glu
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Thr
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Gly
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Glu，所述药物用于预防或治疗包括但不限于肝脏的多器官缺血再灌注损伤。
[0010]进一步地，所述ETGE多肽的合成方法如下：
[0011]S1，合成树脂，根据合成多肽的摩尔数称取树脂放入反应器中，加入3
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5倍体积的N,N
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二甲基甲酰胺，浸胀30分钟；
[0012]S2，脱保护及洗涤，将树脂中的Fmoc保护基脱去，使其露出活泼的NH2基，并洗涤；
[0013]S3，脱保护后进行茚三铜检测反应，树脂显示出的颜色和连接时有明显区别，则说明脱保护反应进行完全；
[0014]S4，连接，下一个氨基酸的羧基被活化剂所活化，活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键；
[0015]S5，连接后的NT检测，检测连接完全后的树脂颜色，判断是否连接完全；
[0016]S6，重复步骤S1
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S5，直到一条肽链完成；
[0017]S7，将多肽从树脂上洗脱下来，其保护基团被脱保护剂洗脱和脱保护。
[0018]S8，应用反相HPLC色谱法，根据不同多肽分子的疏水性差异将其分离，纯化序列为FITC
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C6
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Ala
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Ala
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Pro
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Glu
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Pro
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Glu
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Thr
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Gly
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Glu的ETGE多肽及序列为FITC
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C6
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Pro
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Glu
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Ala
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Pro
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Ala
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Thr
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Glu
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Glu
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Gly的Scramble多肽，即乱序重排多肽，使纯度超过95％。
[0019]进一步地，所述ETGE多肽作为激活剂激活NRF2抗氧化通路，减轻氧化应激及其引起器官缺血再灌注损伤。
[0020]进一步地，所述药物由所述ETGE多肽和药学上可接受的药用辅料制成药学上可接受的剂型。
[0021]进一步地，所述药用辅料包括稀释剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂、表面活性剂、吸收促进剂和润滑剂中的一种或几种。
[0022]进一步地，所述剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂或注射剂。
[0023]进一步地，所述ETGE多肽还可用于制备治疗由氧化应激水平升高引起的癌症、衰老、心脏病、关节炎、糖尿病、阿兹海默症、帕金森病及多种口腔疾病的药物。
[0024](三)有益效果
[0025]本专利技术产生的有益效果是：通过靶向NRF2的ETGE基序开发出一种ETGE多肽，使其作为强有效的NRF2特异性激活剂，将该ETGE多肽应用在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中，为预防和治疗包括但不限于肝脏的多种器官缺血再灌注损伤提供了新的治疗策略，另外，该ETGE多肽还可用于预防和治疗氧化应激水平升高引起的癌症、衰老、心脏病、关节炎糖尿病等疾病以及神经退化性疾病如阿兹海默症、帕金森病及多种口腔疾病，应用范围广。
附图说明：
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0027]图1为多肽HPLC纯化结果图，图A为Scramble多肽，图B为ETGE多肽；
[0028]图2为多肽质谱鉴定结果图，图A为Scramble多肽，图B为ETGE多肽；
[0029]图3为抗氧化效果检测图，图A为western blot实验检测NRF2及其下游抗氧化蛋白水平结果图，图B为流式检测活性氧ROS结果图；
[0030]图4为竞争性IP实验检测与KEAP1
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HA相互作用的NRF2
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Myc的蛋白量结果图；
[0031]图5为NRF2
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Myc的泛素化水平检测结果图；
[0032]图6为流式细胞术检测LO2肝细胞凋亡情况检测结果图，其中图A为ETGE多肽对缺氧复氧诱导LO2肝本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述ETGE多肽的氨基酸序列为FITC
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C6
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Ala
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Ala
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Pro
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Glu
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Pro
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Glu
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Thr
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Gly
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Glu，所述药物用于预防或治疗包括但不限于肝脏的多器官缺血再灌注损伤。2.根据权利要求1所述的ETGE多肽，其特征在于，所述ETGE多肽用于制备治疗由氧化应激水平升高引起的癌症、衰老、心脏病、关节炎、糖尿病、阿兹海默症、帕金森病及口腔疾病的药物。3.根据权利要求1所述的一种ETGE多肽在制备治疗多器官缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述ETGE多肽的合成方法如下：S1，合成树脂，根据合成多肽的摩尔数称取树脂放入反应器中，加入3
‑
5倍体积的N,N
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二甲基甲酰胺，浸胀30分钟；S2，脱保护及洗涤，将树脂中的Fmoc保护基脱去，使其露出活泼的NH2基，并洗涤；S3，脱保护后进行茚三铜检测反应，树脂显示出的颜色和连接时有明显区别，则说明脱保护反应进行完全；S4，连接，下一个氨基酸的羧基被活化剂所活化，活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键；S5，连接后的NT检测，检测连接完全后的树脂颜色，判断是否连接完全；S6，重复步骤S1
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S5，直到一条肽链完成；S7，将多肽从树脂上洗脱下来，其保护基团被脱保护剂洗脱和脱保护；S8，应用反...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琪，张进祥，王慧，李静蕾，陈子涵，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：