本发明专利技术公开了PLD1作为评估肿瘤患者对于化疗药物敏感性的分子标志物的用途。本发明专利技术发现胰腺导管腺癌中PLD1表达水平与对吉西他滨的敏感程度相关，PLD1在胰腺癌肿瘤细胞核中的表达与肿瘤的分化程度、T分期相关，并且癌导管细胞核中高表达PLD1的患者，其总生存期短，表明胰腺癌癌导管细胞中高表达PLD1者与术后复发转移相关，是预估胰腺癌患者预后，肿瘤的复发转移以及肿瘤分化程度的生物标记物。因此，本发明专利技术可指导胰腺导管腺癌的临床治疗以及逆转吉西他滨耐药。通过在胰腺癌患者的组织标本中寻找与病人预后相关的PLD1生物标记物，更能直接地客观且及时准确地评价患者对预吉西他滨的耐药程度，经济快捷更利于实际操作。经济快捷更利于实际操作。经济快捷更利于实际操作。
Use of PLD1 as a molecular marker to evaluate the sensitivity of tumor patients to chemotherapy drugs
【技术实现步骤摘要】
PLD1作为评估肿瘤患者对于化疗药物敏感性的分子标志物的用途
[0001]本专利技术涉及预估肿瘤对于化疗药物治疗敏感性的分子标志物，尤其涉及用于预估胰腺癌对于吉西他滨治疗敏感性的分子标志物，本专利技术进一步涉及用于胰腺癌疗效预测或预后的检测试剂盒，属于胰腺癌对于化疗药物治疗敏感性的分子标志物领域。
技术介绍
[0002]胰腺癌是一种高度恶性的消化道肿瘤，在全世界癌症死因中排名第四，仅次于结直肠癌，其五年生存率仅为10％。近年来也由于人们吸烟饮酒。生活及饮食的不规律发病率逐年增高，且死亡率也高达8％。由于胰腺癌早期发病隐匿，无明显的症状，故超过80％的患者就诊时已为晚期，失去根治性手术机会。因此不论胰腺癌的新辅助治疗、术后辅助治疗以及姑息治疗中，以化疗为核心的药物治疗都发挥着不可或缺的作用。
[0003]胰腺癌被认为是免疫治疗的“黑洞”，现有的免疫检查点抑制剂药物对胰腺癌的治疗并未取得太多成功。且由于胰腺癌组织周围缺乏血液供应，存在着明显的缺氧微环境等原因导致胰腺癌耐药频发。目前未有有效的预估吉西他滨耐药程度的评价手段。
[0004]进入21世纪以来，随着分子生物学技术的发展，各种基因或蛋白都被列为影响各种化疗药物代谢与发挥作用的因素。其中吉西他滨现有的与其敏感性相关的因素有核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)以及胞嘧啶核苷脱氨酶(CDA),多种研究证实其多态性会影响吉西他滨的药代动力学，但仍未应用到临床。而临床上评价化疗药物的方法还有临床受益反应CBR(Clinical Benefit Response)的评估,是指化疗后与肿瘤相关的症状：例如疼痛，体力状况等，但是由于受到主观因素影响太显著，并且在研究中发现CBR没有包括与疾病和治疗相关的全部症状且未能反映与预后相关的一些重要因素故而未能在临床上广泛应用。除此之外应用较多的即为影像学方法根据化疗前后肿瘤的大小，血供，病灶密度等因素的改变程度来评估肿瘤的化疗疗效，其主要方法有CT,MRI,放射性核素扫描和血管造影等常与上文中提到的CBR一同作为实体瘤化疗疗效的评价手段。
[0005]传统的影像学评价手段具有灵敏性，但是特异性较差。由于必须在给药以后评估，故不能及时且准确地反应化疗疗效，特别在微转移的概念提出以后，使得利用影像学评价用药敏感性指导临床用药大大受限。虽然PETCT比一般的形态学检查能够提够更丰富的信息，比如糖代谢，细胞增殖和血流灌注。但是其由于价格昂贵不易在临床上推广。
[0006]吉西他滨(Gemcitabine)作为胰腺癌一线化疗方案的基石用药。目前在临床中使用的胰腺癌化疗方案也都是与吉西他滨相配伍。虽然一定程度改善了目前胰腺癌的临床治疗效果，但在治疗过程中也常面临吉西他滨的原发性或获得性耐药。这种耐药的发生很大程度上限制了其在临床中的广泛应用及其作用效果。因此，寻找关键的耐药分子标志物并制定逆转吉西他滨耐药的治疗策略从而实现胰腺癌患者的精准治疗是目前改善胰腺癌预后的主要措施。
[0007]磷脂酶D1(PLD1)是磷脂酶D家族中的一员,其蛋白结构包括PH结构域、PX结构域和
磷脂酰肌醇4,5
‑
磷酸二酯反应结构域，后者与其细胞膜信号活性相关。既往研究认为PLD1的作用主要在于催化细胞膜上的磷脂酰胆碱分解，生成产物磷脂酸(PA)、胆碱和水，而代谢产物PA是绝大多数报道PLD1发挥生物学功能的主要形式，包括激活mTOR通路引起细胞自噬、调控Hippo通路、调控MAPK和PI3K/AKT通路和引起细胞膜分裂、融合和负向弯曲。研究报道PLD1可通过PA激活AKT通路提高细胞存活、控制细胞极化、激活RAS通路促进细胞增殖和通过调控MMP2和MMP9增强细胞的迁移能力促进转移。
[0008]迄今为止，未见有磷脂酶D1在胰腺癌患者中的表达高低与其对化疗药物的敏感度或疗效或预后相关联的任何报道。
技术实现思路
[0009]本专利技术的一方面是提供PLD1作为分子标志物在制备预估胰腺癌对于吉西他滨治疗敏感性的试剂中的用途。
[0010]本专利技术的另一方面是提供PLD1作为分子标志物在制备预估胰腺癌疗效或预后的检测试剂中的用途。
[0011]本专利技术的在一方面是提供PLD1作为分子标志物在制备检测或评估肿瘤的分化程度或T分期的检测试剂中的用途。
[0012]本专利技术首次发现胰腺导管腺癌中PLD1表达水平与对吉西他滨的敏感程度相关，即，PLD1在胰腺导管腺癌中的表达程度与胰腺癌患者的无复发生存期、对化疗药物响应程度等耐药指标密切相关，PLD1高表达者对吉西他滨耐药程度更高，因此，本专利技术可指导胰腺导管腺癌的临床治疗以及逆转吉西他滨耐药。
[0013]具体的，本专利技术通过试验发现，PLD1在胰腺癌肿瘤细胞核中高表达时，胰腺癌患者对吉西他滨的敏感性差，促使肿瘤组织对于吉西他滨的耐药发生，因此，本专利技术确定PLD1能够作为分子标志物诊断或预估胰腺癌对于吉西他滨治疗的敏感性，即如果PLD1在胰腺癌肿瘤细胞核中高表达时，表明胰腺癌患者对于吉西他滨治疗敏感性较差，存在耐药性。
[0014]本专利技术根据临床病理参数与PLD1评分进行单和多因素分析发现PLD1在胰腺癌导管细胞中的表达量与肿瘤的分化程度、T分期相关，与患者的全生存期OS(Overall Surviva)呈负相关，因此，可以将PLD1作为分子标志物来预估胰腺癌疗效或预后，即，如果PLD1在患者的胰腺癌导管细胞的表达量较高，则胰腺癌患者的生存期较短，疗效或预后较差。
[0015]本专利技术的再一方面是提供一种检测胰腺癌导管细胞核中PLD1表达量的检测试剂盒，其中，该检测试剂盒中包含检测PLD1表达的试剂，所述用于检测PLD1表达的试剂可以为PLD1的抗体或其片段，譬如为PLD1单克隆抗体或为PLD1多克隆抗体，最优选为PLD1单克隆抗体。
[0016]本领域技术人员可以按照常规方法(参见《抗体制备与使用实验指南》，科学出版社，2010年)制备PLD1单克隆抗体体，譬如可以采用外源表达的PLD1蛋白或化学合成的PLD1蛋白多肽作为抗原免疫动物试验制备的抗体。
[0017]作为本专利技术一种优选的实施方案，所述的检测胰腺癌导管细胞核中PLD1表达量的检测试剂盒可以是免疫组化试剂盒，包含一抗，酶标二抗，抗体稀释液，显色液和磷酸盐缓冲液。其中，所述的一抗是PLD1单克隆抗体。
[0018]作为本专利技术一种优选的具体实施方案，优选的，本专利技术免疫组化试剂盒中所述的二抗可以是酶标羊抗鼠/兔Ig G聚合物；所述显色液可以是DAB显色液。
[0019]将待测组织切片进行预处理后，应用所述的免疫组化试剂盒进行免疫组化分析，通过染色结果判断PLD1的表达情况。
[0020]其中，所述待测组织切片的预处理包括脱蜡和水化。
[0021]优选地，所述免疫组化分析包括：
[0022](a)、将脱蜡水化后的待测组织切片浸入EDTA抗原修复缓冲液中进行组织抗原修复；
[0023](b)、灭活内源性过氧化物酶活性；
[0024]本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.PLD1在制备评估肿瘤患者对吉西他滨的敏感程度的试剂中的用途。2.PLD1在制备诊断或评估肿瘤患者疗效或预后的试剂中的用途。3.PLD1在制备检测或评估肿瘤的分化程度的试剂中的用途。4.PLD1在制备检测或评估肿瘤的T分期的试剂中的用途。5.根据权利要求1
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4任何一项所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤是胰腺癌。6.一种评估肿瘤患者对吉西他滨的敏感程度的免疫组化试剂盒，包含一抗，酶标二抗，抗体稀释液，显色液和磷酸盐缓冲液，其特征在于，所述的一抗是PLD1单克隆抗体。7.一种诊断或评估肿瘤患者疗效或预后...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝继辉，王宏伟，富丹琪，
申请(专利权)人：天津市肿瘤医院天津医科大学肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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