检测非造血系统肿瘤的试剂组合物及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种检测非造血系统肿瘤的试剂组合物及其应用。所述试剂组合物包括3组抗体，第一组抗体包括抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体；第二组抗体包括抗HLA

Reagent composition for detecting non hematopoietic system tumors and its application

【技术实现步骤摘要】
检测非造血系统肿瘤的试剂组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及一种非造血系统肿瘤的试剂组合物及其应用，其中所述检测包括筛查、诊断和/或随访检测，属于生物医药


技术介绍

[0002]恶性肿瘤一直是影响人类健康的重大疾患。肿瘤的早筛查、早诊断、早治疗可以大大提高完全缓解率和生存率。淋巴造血系统肿瘤的诊断与随访经过多年发展，都相对成熟，尤其是近年来靶向治疗的兴起，取得了巨大成就。而对于非造血系统肿瘤来说，例如恶性上皮来源的肿瘤（如肺癌、乳腺癌、胆囊癌、结肠癌、前列腺癌、食道癌、输卵管癌、头颈部癌、肝母细胞瘤、胰母细胞瘤、胰腺癌等）、胚胎性肿瘤（神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、原始神经外胚叶瘤（PNET）等）、软组织肿瘤和骨外肉瘤（尤文肉瘤、横纹肌肉瘤）、骨肿瘤和软骨肿瘤（骨肉瘤、软组织肉瘤）、恶性肾脏肿瘤（肾母细胞瘤、肾上腺癌、肾透明细胞癌）、恶性黑色素瘤等，长期以来，诊断主要靠影像学和肿物穿刺或者手术切除做病理，但是影像学不够灵敏，而手术是有创技术，有些肿物不便取材，有时候需要更多技术辅助明确诊断，此外手术切除以后，无法再取材随访，因此急需一种高度灵敏的相对无创的技术帮助筛查和/或诊断与随访非造血系统肿瘤。
[0003]流式细胞术是使用抗原抗体结合，激光激发荧光的技术检测细胞表面和胞浆内免疫学标志，来高灵敏度、高特异性识别细胞的技术，在淋巴造血系统肿瘤的诊断和随访中起到举足轻重的作用。而流式细胞术在非造血系统肿瘤的诊断中的应用，仅有少量报道，主要原因是非造血系统肿瘤种类繁多，受到取材和技术限制，且现有技术中对非造血系统肿瘤标志物了解不够深刻，很难形成相对固定的、覆盖率广泛的、规范化的检测方案，因此长期以来没有得到广泛应用。
[0004]为解决该问题，科研人员已做过研究性的探索，包括欧洲流式联盟（euroflow）从2012年开始不断推出的方案，并于2021年发表了儿童非造血系统肿瘤检测方案的文章，但是euroflow方案依然存有如下缺陷：1、主要是针对与造血系统肿瘤鉴别的思路，排除不够全面，对于CD56
‑
转移癌容易漏诊；2、该方案缺乏高覆盖率的标志物，虽然其中采用的标志物GD2、EpCAM、numyogenin/nuMyoD1相对特异，但是实际上，GD2只覆盖神经母细胞瘤和部分黑色素瘤，EpCAM只见于上皮来源肿瘤，而且并不是一个高覆盖率的标志，numyogenin/nuMyoD1仅能覆盖横纹肌肉瘤；3、该方案可能因为针对儿童肿瘤，而对于与造血系统的鉴别不足：非造血系统肿瘤的诊断，其中重要的是与CD45
‑
/CD56
+
的和CD45
‑
/CD56
‑
的淋巴造血系统肿瘤鉴别，而该方案中使用CD271、CD9、CD90、CD99等标志，在淋巴造血系统中表达率也很高，在非造血系统中反而覆盖率不高，因此鉴别力不足；而与造血系统肿瘤的鉴别，使用胞浆CD3、胞膜CD3、CD4、CD8、CD19，只能覆盖B细胞肿瘤、T细胞肿瘤和原始浆样树突状细胞肿瘤，不能覆盖浆细胞肿瘤、NK肿瘤、急性巨核细胞白血病、急性红白血病，因此无法全面排除CD45
‑
/CD56
+
的和CD45
‑
/CD56
‑
的淋巴造血系统肿瘤。
[0005]经查，现有技术中未发现适用于包括成人和儿童在内的所有人群的，覆盖率高、特
异性好、相关固定规范的能应用于流式细胞术筛查/诊断和随访非造血系统肿瘤的技术方案。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的在于提供一种试剂组合物，适用于在有或者没有任何临床信息的情况下，通过高度灵敏、特异性、通用的流式细胞术检测非造血系统肿瘤。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供所述的试剂组合物在检测非造血系统肿瘤中的应用。
[0008]本专利技术中，所述检测包括筛查、诊断和/或随访检测。
[0009]本专利技术中所述的“非造血系统肿瘤”，是世界卫生组织发布的相对应于淋巴造血系统肿瘤以外的，绝大对数类型的实体瘤，包括：恶性上皮来源的肿瘤（如肺癌、乳腺癌、胆囊癌、结肠癌、前列腺癌、食道癌、输卵管癌、头颈部癌、肝母细胞瘤、胰母细胞瘤、胰腺癌等）、胚胎性肿瘤（神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、原始神经外胚叶瘤（PNET）等）、软组织肿瘤和骨外肉瘤（尤文肉瘤、横纹肌肉瘤）、骨肿瘤和软骨肿瘤（骨肉瘤、软组织肉瘤）、恶性肾脏肿瘤（肾母细胞瘤、肾上腺癌、肾透明细胞癌）、恶性黑色素瘤等。
[0010]一方面，本专利技术提供了一种能用于流式细胞术检测非造血系统肿瘤的试剂组合物，该试剂组合物包括第一组抗体、第二组抗体、第三组抗体，其中：第一组抗体包括：抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体；第一组抗体用于加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的第一流式管中；第二组抗体包括：抗HLA
‑
ABC抗体、抗CD38抗体、抗CD19抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD7抗体和抗CD45抗体；第二组抗体用于加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的第二流式管中；第三组抗体包括：抗胞浆cytokeratin（CK）抗体；第三组抗体用于加入到已加入第二组抗体且进行破膜处理后的第二流式管中。
[0011]本专利技术的试剂组合物，可应用于流式细胞术筛查和/或诊断与随访非造血系统肿瘤，包括：恶性上皮来源的肿瘤（如肺癌、乳腺癌、胆囊癌、结肠癌、前列腺癌、食道癌、输卵管癌、头颈部癌、肝母细胞瘤、胰母细胞瘤、胰腺癌等）、胚胎性肿瘤（神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、原始神经外胚叶瘤（PNET）等）、软组织肿瘤和骨外肉瘤（尤文肉瘤、横纹肌肉瘤）、骨肿瘤和软骨肿瘤（骨肉瘤、软组织肉瘤）、恶性肾脏肿瘤（肾母细胞瘤、肾上腺癌、肾透明细胞癌）、恶性黑色素瘤等。既实现了高度灵敏和特异性诊断，也能够治疗后随访，形成规范化方案，可以提高效率和准确性，并为将来实现自动化、人工智能化提供方便。
[0012]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的抗体组合物中，各抗体均为单克隆抗体。其中抗胞浆cytokeratin（CK）抗体为包括CK8单克隆抗体、CK18单克隆抗体、CK19单克隆抗体的复合物。
[0013]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的抗体组合物中，各抗体均为荧光素标记的抗体。优选地，第一组抗体中，抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体的荧光素标记顺序为FITC、PE、PerCP
‑
Cy5.5、PE
‑
Cy7、APC、APC
‑
Cy7、BV421、V500。第二组抗体中，抗HLA
‑
ABC抗体、抗CD38抗体、抗CD19抗体、抗
CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD7抗体和抗CD45本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能用于流式细胞术检测非造血系统肿瘤的试剂组合物，其特征在于，该试剂组合物包括第一组抗体、第二组抗体、第三组抗体，其中：第一组抗体包括：抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体；第一组抗体用于加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的第一流式管中；第二组抗体包括：抗HLA
‑
ABC抗体、抗CD38抗体、抗CD19抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD7抗体和抗CD45抗体；第二组抗体用于加入到待测样本呈单个细胞悬液状态的第二流式管中；第三组抗体包括：抗胞浆cytokeratin抗体；第三组抗体用于加入到已加入第二组抗体且进行破膜处理后的第二流式管中。2.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，各抗体均为单克隆抗体，其中抗胞浆cytokeratin抗体为包括CK8单克隆抗体、CK18单克隆抗体、CK19单克隆抗体的复合物。3.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，各抗体均为荧光素标记的抗体；第一组抗体中，抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体的荧光素标记顺序为FITC、PE、PerCP
‑
Cy5.5、PE
‑
Cy7、APC、APC
‑
Cy7、BV421、V500；第二组抗体中，抗HLA
‑
ABC抗体、抗CD38抗体、抗CD19抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD7抗体和抗CD45抗体的荧光素标记顺序为PE、PerCP
‑
Cy5.5、PE
‑
Cy7、APC、APC
‑
Cy7、BV421和V500；第三组抗体中，抗胞浆cytokeratin抗体的荧光素标记为FITC。4.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于：第一组抗体为抗CD9抗体、抗GD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD81和抗CD45抗体按照5：5：5：3：2：3：3：3的体积比混合的混合物；第二组抗体为抗HLA
‑
ABC抗体、抗CD38抗体、抗CD19抗体、抗CD56抗体、抗CD36抗体、抗CD7抗体和抗CD45抗体按照5：5：3：2：3：3：3的体积比混合的混合物。5.一种试剂盒，该试剂盒包括多个容器，其特征在于，各容器分别容置权利要求1
‑
4任一项所述的试剂组合物的各组抗体。6.权利要求1
‑
4任一项所述的试剂组合物在制备用于检测非造血系统肿瘤的流式细胞上机样本中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述非造血系统肿瘤包括：恶性上皮来源的肿瘤、胚胎性肿瘤、软组织肿瘤、骨外肉瘤、骨肿瘤、软骨肿瘤、恶性肾脏肿瘤、恶性黑色素瘤中的一种或多种。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述制备用于检测非造血系统肿瘤的流式细胞上机样本的过程包括步骤：（1）将待测样本分别加入到甲管和乙管两个流式管中，使呈单个细胞悬液状态，并保证细胞量1
×
106/管
‑1×
107/管；（2）向步骤（1）处理得到的甲管中加入权利要求1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：王卉，陈曼，王爱先，宫美维，吴雪英，甄军毅，杜晴，郭亚，
申请(专利权)人：河北燕达陆道培医院有限公司，
类型：发明
国别省市：