一种新型冠状病毒的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒的检测试剂盒及其制备方法。属于医学检验技术领域。包括检测新冠病毒的免疫层析表面增强拉曼光谱试纸条和样品提取液，试纸条具体包括均匀包被在结合垫的Wu

A detection kit for novel coronavirus and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒的检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，更具体的说是涉及一种新型冠状病毒的检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]核酸检测作为确诊方法，在患者临床诊断和疑似患者排查中发挥了重要作用。但是，受操作繁琐、耗时长、需要集中送检等限制，使得疑似患者不能及时得到诊断和分流处置，并且检测还具有假阴性缺陷。
[0003]免疫检测是通过抗体抗原之间的特异性反应原理，通过检测体内病毒蛋白(抗原)、或者体内特异性针对病毒蛋白的抗体，对感染做出检测，广泛应用于艾滋病病毒、乙型肝炎、丙型肝炎等重大传染病的检测。
[0004]新型冠状病毒检测是通过新冠病毒和新冠抗体特异性结合，实现检测功能。特点是快速出结果，操作简便，是新冠肺炎诊断特别是初筛和排查的重要检测手段。在使用现场快速检测产品，快速筛查疑似患者和密切接触人群，对于快速控制传播意义重大。
[0005]然而，虽然免疫检测成为新冠状病毒确诊筛查的辅助检测手段，但灵敏度低是其最大短板。
[0006]因此，如何提供一种新型冠状病毒的检测试剂盒，克服上述技术缺陷，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供了一种新型冠状病毒的检测试剂盒及其制备方法。比常规胶体金层析试剂检测灵敏度提高一个数量级以上，解决了免疫检测灵敏度低的瓶颈性技术难题，弥补了免疫诊断产品原有的先天性不足，适合基层医疗机构、公共卫生应急监测场所用于快速筛查诊断。
[0008]具体将表面增强拉曼光谱(SERS)与免疫分析技术进行结合，建立SERS 免疫层析检测技术，不仅具有SERS的高灵敏性和光谱可区分性，还具有免疫分析的高特异性和便捷性。利用钨包银核壳结构作为SERS基底，既具有钨纳米粒子的稳定性，又具有银纳米粒子的拉曼增强效果。在钨银核壳表面修饰拉曼信号分子DTNB和COVID
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19抗体，将表面增强拉曼光谱技术与免疫层析技术相结合，开发了一种超灵敏的COVID
‑
19表面增强拉曼光谱免疫层析检测新方法。
[0009]其中，试纸条采用双抗体夹心法来检测待测样品中是否含有新型冠状病毒。检测阳性样品时，样品中的新型冠状病毒与拉曼免疫探针 (Wu
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DTNB@Ag
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Ab1)上所连接的新型冠状病毒抗体1结合，该复合物通过层析作用在硝酸纤维素膜内部向前移动，经过检测区时与包被的新型冠状病毒抗体2结合，形成拉曼免疫探针
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新型冠状病毒抗体1
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新型冠状病毒
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新型冠状病毒抗体2复合物，因此T线将出现条带，结果为阳性；检测阴性样品时，样本中不含新冠抗原，无法形成上述免疫复合物，则T线不出现条带，结果为阴性。通过拉曼光谱仪
测定T线上的探针信号，测定新冠病毒的含量。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0011]一种新型冠状病毒的检测试剂盒，包括检测新冠病毒的免疫层析表面增强拉曼光谱试纸条和样品提取液，试纸条包括均匀包被在结合垫的 Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液、包被在硝酸纤维素膜上构成检测线的新冠N蛋白抗体2、包被在硝酸纤维素膜上构成质控线的兔抗鼠IgG；Wu
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DTNB@Ag
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Ab1 溶液的制备方法包括以下步骤：
[0012](1)用柠檬酸三钠与硝酸银反应制备纳米银颗粒溶液；
[0013](2)向步骤(1)制备的纳米银颗粒溶液中加入拉曼信号分子DTNB得 AgNPs
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DTNB溶液；
[0014](3)向步骤(2)制备的AgNPs
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DTNB溶液中加入钨原子得Wu
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DTNB @Ag溶液；
[0015](4)向步骤(3)制备的Wu
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DTNB@Ag溶液中加入新冠N蛋白抗体1 得Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液。
[0016]优选的：新冠N蛋白抗体2的包被浓度为0.5mg/mL；兔抗鼠IgG的包被浓度为1mg/mL。
[0017]优选的：试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬；在PVC背衬按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫。
[0018]本专利技术还提供了检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0019](1)制备纳米银颗粒溶液：称取硝酸银溶于超纯水中，得硝酸银溶液，加热，待硝酸银溶液煮沸时加入柠檬酸三钠溶液，继续加热后，冷却，得纳米银颗粒溶液；
[0020](2)制备纳米银颗粒表面修饰DTNB溶液：取步骤(1)制备的纳米银颗粒溶液，加入DTNB溶液，搅拌反应，离心，去除上清液，沉淀用超纯水混悬，得AgNPs
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DTNB溶液；
[0021](3)制备Wu
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DTNB@Ag：取步骤(2)制备的AgNPs
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DTNB溶液和钨原子溶液等体积混合，反应，离心，沉淀用超纯水混悬，超声分散，得 Wu
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DTNB@Ag溶液；
[0022](4)制备Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液：取步骤(3)制备的Wu
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DTNB@Ag 溶液，加入碳酸钾溶液，再向溶液中加入新冠N蛋白抗体1，反应后，加入 BSA溶液，反应，离心，沉淀用保存液混悬，得Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液；
[0023](5)结合垫的包被：将结合垫浸泡于磷酸缓冲液后，将步骤(4)制备的Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液均匀包被在结合垫上，封装备用；
[0024](6)样品垫的处理：将样品垫浸泡于磷酸盐缓冲液，封装备用；
[0025](7)硝酸纤维素膜的包被：用磷酸盐缓冲液将新冠N蛋白抗体2稀释，包被于硝酸纤维素膜作为检测线；用磷酸盐缓冲液将兔抗鼠IgG抗体稀释，包被于硝酸纤维素膜作为质控线；封装备用；
[0026](8)试纸条的组装。
[0027]优选的：步骤(1)硝酸银、超纯水、柠檬酸三钠溶液的质量体积比为0.018 g：100mL：4mL；加热的条件为：油浴锅130℃中边搅拌边加热；柠檬酸三钠质量浓度为1％；继续加热的时间为1h；冷却至20～25℃；
[0028]步骤(2)纳米银颗粒溶液、DTNB溶液、超纯水的体积比为10mL：20μL： 2mL；DTNB溶液浓度为0.01mol/L；搅拌反应的温度为130℃，时间为2h；离心为12000r/min，时间10min；
[0029]步骤(3)AgNPs
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DTNB溶液、钨原子溶液体积比为2mL：2mL；反应条件为：50℃油浴
锅，时间为1h；离心：8000r/min本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括检测新冠病毒的免疫层析表面增强拉曼光谱试纸条和样品提取液，所述试纸条包括均匀包被在结合垫的Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液、包被在硝酸纤维素膜上构成检测线的新冠N蛋白抗体2、包被在硝酸纤维素膜上构成质控线的兔抗鼠IgG；所述Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液的制备方法包括以下步骤：(1)用柠檬酸三钠与硝酸银反应制备纳米银颗粒溶液；(2)向步骤(1)制备的纳米银颗粒溶液中加入拉曼信号分子DTNB得AgNPs
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DTNB溶液；(3)向步骤(2)制备的AgNPs
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DTNB溶液中加入钨原子得Wu
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DTNB@Ag溶液；(4)向步骤(3)制备的Wu
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DTNB@Ag溶液中加入新冠N蛋白抗体1得Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液。2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述新冠N蛋白抗体2的包被浓度为0.5mg/mL；所述兔抗鼠IgG的包被浓度为1mg/mL。3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬；在所述PVC背衬按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫。4.权利要求1～3任一所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备纳米银颗粒溶液：称取硝酸银溶于超纯水中，得硝酸银溶液，加热，待硝酸银溶液煮沸时加入柠檬酸三钠溶液，继续加热后，冷却，得纳米银颗粒溶液；(2)制备纳米银颗粒表面修饰DTNB溶液：取步骤(1)制备的纳米银颗粒溶液，加入DTNB溶液，搅拌反应，离心，去除上清液，沉淀用超纯水混悬，得AgNPs
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DTNB溶液；(3)制备Wu
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DTNB@Ag：取步骤(2)制备的AgNPs
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DTNB溶液和钨原子溶液等体积混合，反应，离心，沉淀用超纯水混悬，超声分散，得Wu
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DTNB@Ag溶液；(4)制备Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液：取步骤(3)制备的Wu
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DTNB@Ag溶液，加入碳酸钾溶液，再向溶液中加入新冠N蛋白抗体1，反应后，加入BSA溶液，反应，离心，沉淀用保存液混悬，得Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液；(5)结合垫的包被：将结合垫浸泡于磷酸缓冲液后，将步骤(4)制备的Wu
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DTNB@Ag
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Ab1溶液均匀...

【专利技术属性】
技术研发人员：金涌，陈艳，邹明强，薛强，殷宏，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：