一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法和应用技术方案

本发明专利技术涉及转基因技术领域，更具体地涉及一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法和应用。包括以下步骤：(1)合成针对Abhd12基因的crRNA,(2)PMSG处理C57BL/6雌性小鼠，再注射hCG，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤（1)所述的crRNA,tracrRNA与Cas9蛋白共注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，(3)提取F0代小鼠尾部DNA，PCR扩增并将产物送测序，(4)待雄性Founder小鼠到8周龄，雌性小鼠到6周龄，分别与野生型异性小鼠交配获得F1代杂合子小鼠，若有阳性小鼠出生，则表示转基因已经整合到生殖细胞。本发明专利技术利能够快速高效的将目的基因大片段敲除，并且不留下外源基因片段，可快速高效的构建Abhd12基因敲除小鼠模型。速高效的构建Abhd12基因敲除小鼠模型。速高效的构建Abhd12基因敲除小鼠模型。

A method and application of knocking out mouse abhd12 gene by crispr/cas9 system

【技术实现步骤摘要】
一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法和应用


[0001]本专利技术涉及转基因
，更具体地涉及一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法和应用。

技术介绍

[0002]Abhd12基因编码一种酶，可催化2
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花生四烯酰甘油(2
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AG)的水解，这是作用于大麻素受体CB1和CB2的主要内源性大麻素脂质递质。内源性大麻素系统参与广泛的生理过程，包括神经传递、情绪、食欲、疼痛感、成瘾行为和炎症。该基因的突变与神经退行性疾病PHARC(多发性神经病、听力损失、共济失调、色素性视网膜炎和白内障)有关，这是由内源性大麻素代谢的先天性错误引起的。与ABHD12相关的疾病包括多发性神经病、听力损失、共济失调、色素性视网膜炎以及白内障和锥体营养不良。
[0003]在人和小鼠中，Abdh12蛋白在氨基酸组成上有很高的同源性，达到93％。在氨基酸数量上是一致的，均有398个氨基酸。
[0004]通常建立基因敲除动物模型，是通过基于同源重组的敲除载体来实现的。这种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)合成针对Abhd12基因的 crRNA,其中crRNA1序列如SEQ ID N0.1所示； crRNA2序列如SEQ ID N0.2所示。2.根据权利要求1所述的一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法，其特征在于，还包括以下步骤：2)PMSG处理C57BL/6雌性小鼠，再注射hCG，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤1)所述的crRNA, tracrRNA与Cas9蛋白共注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即为F0小鼠。3.根据权利要求2所述的一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法，其特征在于，还包括以下步骤：3)提取F0代小鼠尾部DNA，PCR扩增并将产物送测序，鉴定是否为嵌合体。4.根据权利要求3所述的一种利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Abhd12基因的方法，其特征在于，还包括以下步骤：4)待雄性Founder小鼠到6
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10周龄，雌性小鼠到4
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8周龄，分别与野生型异性小鼠交配获得F1代杂合子小鼠，小鼠...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟星，
申请(专利权)人：赛业苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：