一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法技术

一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法，涉及生物技术。具体步骤：通过序列比对在荷包红鲤基因组中鉴定目的基因，设计sgRNA靶点序列及验证引物，靶点验证后通过体外转录合成靶基因sgRNA并进行纯化；将sgRNA与Cas9蛋白等体积混合后，对人工授精后的荷包红鲤胚胎进行显微注射，进行靶基因的敲除，胚胎孵化后2个月进行剪尾提取DNA，经一代测序验证得到F0代突变杂合子。为实现荷包红鲤的快速性状改良和遗传选育提供了新途径，有利于进一步开发荷包红鲤的经济价值，增加养殖收益。增加养殖收益。

A method of crispr/cas9 gene editing in red carp

【技术实现步骤摘要】
一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法


[0001]本专利技术涉及生物技术，具体是涉及一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法。

技术介绍

[0002]鲤鱼作为世界范围内广泛养殖的淡水鱼之一，不仅具有极高的食用价值，其观赏价值也得到人们的普遍认可。荷包红鲤，Cyprinus carpio var.wuyuanensis，是鲤鱼的一个变种，产于中国江西省绥源县，色泽鲜红、头小尾短、背高体宽、腹部肥大、形似荷包，肉质鲜嫩，风味极佳，具有较高的经济价值；同时荷包红鲤具有良好的杂交亲和性，能与多种鲤鲫鱼进行杂交，产生的后代具有明显的杂种优势，对我国水产养殖产业具有重要促进作用。本实验室多年来通过基因组手段展开鲤鱼发育生物学和演化机制的研究，测序、组装并注释了荷包红鲤基因组，为荷包红鲤的性状遗传解析、基因功能研究以及遗传育种的进一步开展提供了数据基础。
[0003]相对于传统的鱼类育种技术，如杂交育种，CRASPR/Cas9基因编辑技术培育新品种的目的性更强、耗时较短、成本较低，能够实现靶基因的精准编辑，较快获得目标性状的纯合突变体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法，其特征在于其具体步骤为：先比对鉴定荷包红鲤adh8a基因，并设计靶基因敲除靶点，然后通过体外转录的方法合成相应的sgRNA，以显微注射的方式，注射适量Cas9、sgRNA和酚红的混合体系在1细胞期荷包红鲤受精卵的动物极。2.如权利要求1所述一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法，其特征在于所述鉴定荷包红鲤adh8a基因的方法为：以参考物种的ADH8a蛋白序列通过blastp比对荷包红鲤基因组蛋白序列，鉴定得到对应的核酸序列。3.如权利要求1所述一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法，其特征在于所述设计靶基因敲除靶点的方法为：利用sgRNACas9软件设计靶点，CasOT软件进行靶位点唯一性的验证后得到靶点序列。4.如权利要求1所述一种荷包红鲤CRISPR/Cas9基因编辑方法，其特征在于所述合成相应的sgRNA的方法为：利用带有靶点序列特异性F引物和具有sgRNA_scaffold序列的通用长引物R，先合成sgRNA的转录模板，然后在T7 RNA转录酶的作用下体外转录合成sgRNA，最后纯化得到用于敲除的sgRNA；所述利用带有靶点序列特异性F引物：5
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GAATTAATACGACTCACTATAGGCCACATGAGTCTCTTCCATGGTTTAAGAGCTAT...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐鹏，颜梦珍，李碧君，陈琳，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：