生物素部分缀合的多肽和包括其的用于口服施用的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种生物素部分缀合的多肽和包括其的用于口服施用的药物组合物，其中根据本发明专利技术的该多肽具有优异的体内口服生物利用度。度。度。

Biotin partially conjugated polypeptide and pharmaceutical composition for oral administration including the same

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】disease)等神经退行性疾病有治疗效果(《临床研究杂志(The Journal of clinical investigation)》122:1339
‑
1353；)。2005年，合成艾塞那肽
‑
4已获得美国食品和药物管理局的商业批准，商标为Byetta
TM
，并且已用于治疗II型糖尿病。
[0007]然而，在口服施用如艾塞那肽
‑
4等肽药物的情况下，存在肽药物因消化酶而被降解并且不能渗透到肠膜内的问题，并且因此，已经进行了如皮下施用等肠胃外施用。
[0008]因此，需要一种保护肽免受酶降解并最终通过载体渗透到肠膜中以改善肠吸收的技术。作为相关的现有技术，韩国专利注册号10
‑
0864584公开了一种生物素在艾塞那肽
‑
4的赖氨酸残基中被修饰的艾塞那肽
‑
4衍生物可以口服施用，并且改善了肠内的生物利用度。然而，在这种情况下，存在生物素与艾塞那肽
‑
4的各种赖氨酸位置缀合以形成各种异构体的问题，由此降低反应速率和产率，并且生物素与作为艾塞那肽
‑
4的活性位点的N端的赖氨酸位置缀合以降低艾塞那肽
‑
4的活性。
[0009]因此，本专利技术人致力于开发可以口服施用而不降低具有肽的艾塞那肽
‑
4的活性的肽药物，并且因此，已证实生物素部分与半胱氨酸选择性缀合的多肽通过使用半胱氨酸被插入到艾塞那肽
‑
4的非活性位点的多肽制备，以产生均匀的材料而不形成异构体，由此提高反应速率和产率。另外，本专利技术人已证实，生物素部分缀合的多肽表现出优异的口服生物利用度而不会降低艾塞那肽
‑
4的活性，从而提高了葡萄糖控制能力。因此，本专利技术人发现，根据本专利技术的生物素部分缀合的多肽可以用作可以口服施用的药物组合物，并且然后完成了本专利技术。

技术实现思路

[0010]技术问题
[0011]本专利技术的目的是提供一种生物素部分缀合的多肽，该多肽具有优异的体内口服生物利用度而不降低多肽的活性，以及一种包括其的用于口服施用的药物组合物。
[0012]问题的解决方案
[0013]本专利技术的一方面提供了一种生物素部分缀合的多肽，
[0014]其中该多肽是SEQ ID NO:1中的第9位与第39位之间的一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基插入或取代的多肽，并且
[0015]由下述通式A表示的生物素部分与上述多肽的半胱氨酸残基缀合。
[0016][通式A][0017][0018]其中
[0019]X是能够与该多肽缀合的官能团，
[0020]Y是间隔子，
[0021]Z是结合单元，
[0022]B可由以下化学式A
‑
1表示，
[0023][化学式A
‑
1][0024][0025]T是末端基团，
[0026]m是1到10的整数，
[0027]n是0或1到10的整数，并且
[0028]p是整数0或1。
[0029]本专利技术的另一方面提供了一种用于口服施用的药物组合物，该药物组合物包括该生物素部分缀合的多肽。
[0030]本专利技术的又另一方面提供了一种用于预防或治疗肥胖症、糖尿病、脂肪性肝病或神经退行性疾病的药物组合物，该药物组合物包括该生物素部分缀合的多肽。
[0031]本专利技术的仍另一方面提供了一种用于制备生物素部分缀合的多肽的方法，该方法包括：
[0032]1)获得由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的多肽中的氨基酸9到39中的至少一个氨基酸被半胱氨酸取代或插入的多肽；
[0033]2)通过使在步骤1)中获得的该多肽与由以下通式A表示的生物素部分在有机溶剂中反应来获得该生物素部分与半胱氨酸缀合的多肽；以及
[0034]3)分离和纯化步骤2)中的该生物素部分缀合的多肽；
[0035][通式A][0036][0037]其中
[0038]X是能够与该多肽缀合的官能团，
[0039]Y是间隔子，
[0040]Z是结合单元，
[0041]B可由以下化学式A
‑
1表示，
[0042][化学式A
‑
1][0043][0044]T是末端基团，
[0045]m是1到10的整数，
[0046]n是0或1到10的整数，并且
[0047]p是整数0或1。
[0048]专利技术的有利效果
[0049]根据本专利技术的实施例，通过制备在作为艾塞那肽
‑
4的非活性位点的C端处插入的具有半胱氨酸的多肽以及根据本专利技术的使用生物素部分的生物素部分与半胱氨酸选择性结合的多肽，可以产生均匀的材料而不形成异构体，并且提高反应速率和产率。另外，在不影响生物活性的情况下，可以选择性地将生物素部分与半胱氨酸结合，从而不抑制多肽的生物活性。
[0050]根据本专利技术的实施例的生物素部分缀合的多肽可以具有优异的口服生物利用度。
[0051]根据本专利技术的实施例的生物素部分缀合的多肽可以保护多肽免受酶降解，并最终通过体内受体渗透肠膜以提高肠内的生物利用度。
[0052]根据本专利技术的实施例的生物素部分缀合的多肽可以通过与生物素结合，通过钠依赖性多种维生素转运蛋白的主动转运而被吸收，该生物素是一种水溶性维生素B7。
[0053]根据本专利技术的实施例的生物素部分缀合的多肽可以用作用于口服施用的组合物，并且具体地，可以用作用于预防或治疗糖尿病、肥胖症、脂肪性肝病或神经退行性疾病的用于口服施用的组合物。
附图说明
[0054]图1是根据本专利技术的实施例的实例3的纯化色谱图；
[0055]图2是根据本专利技术的实施例的实例1到3的HPLC色谱图；
[0056]图3是根据本专利技术的实施例的实例1到3的MALDI
‑
TOF质谱；
[0057]图4是展示根据本专利技术的实施例的在内切蛋白酶Lys
‑
C处理后鉴定实例2和3的生物素部分缀合的位点的切割的示意图；
[0058]图5是根据本专利技术的实施例的与SEQ ID NO:2相比的使用实例2和3的内切蛋白酶Lys
‑
C进行酶消化之后的HPLC色谱图；
[0059]图6是根据本专利技术的实施例的使用实例2和3的内切蛋白酶Lys
‑
C进行酶消化之后产生的每个片段的MALDI
‑
TOF质谱；
[0060]图7是示出根据本专利技术的实施例的与SEQ ID NO:2相比的实例1到3的生物活性的图表；
[0061]图8是示出根据本专利技术的实施例的与SEQ ID NO:2相比的实例3和比较实例1的生物活性的图表；
[0062]图9是示出根据本专利技术的实施例的实例1到3的在大鼠进行口服施用之后血液浓度随时间推移的图表；并且
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生物素部分缀合的多肽，其中所述多肽是SEQ ID NO:1中的第9位与第39位之间的一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基插入或取代的多肽，并且由下述通式A表示的生物素部分与上述多肽的半胱氨酸残基缀合；[通式A]其中X是能够与所述多肽缀合的官能团，Y是间隔子，Z是结合单元，B可由以下化学式A
‑
1表示，[化学式A
‑
1]T是末端基团，m是1到10的整数，n是0或1到10的整数，并且p是整数0或1。2.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述多肽是由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的多肽中的氨基酸9到39中的至少一个氨基酸被半胱氨酸取代的多肽或半胱氨酸被插入到所述氨基酸39的多肽。3.根据权利要求2所述的生物素部分缀合的多肽，其中半胱氨酸被插入到所述氨基酸39的所述多肽是由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的多肽。4.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述官能团包含马来酰亚胺、胺、琥珀酰亚胺、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、醛或羧基。5.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述间隔子是直接键合的或经取代或未经取代的亚烷基，其中所述亚烷基包含
‑
O
‑
、
‑
C(＝O)NR
‑
、
‑
C(＝O)O
‑
或
‑
C(＝O)
‑
、
‑
NR
‑
和
‑
NOR
‑
中的至少一个，并且R是氢以及经取代或未经取代的烷基或芳基。6.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述结合单元包含氨基酸、多肽、亚烷基胺或聚酰胺基胺结构。7.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述生物素部分由以下通式1A
表示：[通式1A]其中Lys是赖氨酸，T是氢或NH2，q是1到5的整数，r是0、1到3的整数，并且B、n、m和p如以上通式A中所定义。8.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述生物素部分由以下通式2A表示：[通式2A]其中Lys是赖氨酸，T是氢或NH2，R3是氢或
‑
SO3‑
,q是0或1到4的整数，并且B、n、m和p如以上通式A中所定义。9.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述生物素部分由以下通式3A表示：[通式3A]其中R1不存在或是NH，
R3是氢或
‑
SO3‑
，并且B和m如以上通式A中所定义。10.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述生物素部分和所述多肽通过硫醇
‑
醚键或酰胺键缀合。11.根据权利要求1所述的生物素部分缀合的多肽，其中所述生物素部分由以下式...

【专利技术属性】
技术研发人员：OC，
申请(专利权)人：Damp，amp，D制药技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：