一种酰化的长效GLP-1衍生物制造技术

本发明专利技术涉及一种酰化长效GLP

【技术实现步骤摘要】
type 2(non
‑
insulin
‑
dependent)diabetic patients([J].Diabetologia,Nauck M.，1993,36))。而Lancet等的研究表明GLP
‑
1通过多种途径产生降低体重的作用，包括抑制胃肠道蠕动和胃液分泌，抑制食欲及摄食，延缓胃内容物排空等。此外，GLP
‑
1还可作用于中枢神经系统(特别是下丘脑)抑制食欲，减少进食量，从而使人体产生饱胀感和食欲下降，减少卡路里的摄入量，进而达到减轻体重的目的(Effect of 6
‑
week course of glucagon
‑
like peptide 1on glycaemic control,insulin sensitivity,andβ
‑
cell function in type 2 diabetes:a parallel
‑
group study.([J].Lancet,Zander,Mette,Madsbad,et al.，2002))。
[0008]由于GLP
‑
1在体内迅速被二肽基肽酶4(DPP
‑
4)降解，极大的限制了其作用时间，使其难以直接作为药物使用。因此，目前以GLP
‑
1为主改善血糖控制的方法主要以外源性模拟GLP
‑
1作用及延长内源性GLP
‑
1活性的GLP
‑
1衍生物为主。
[0009]目前，已上市的GLP
‑
1衍生物主要有艾塞那肽、利拉鲁肽、度拉糖肽、利司那肽、艾塞那肽微球制剂、阿必鲁肽、聚乙二醇洛塞那肽和索马鲁肽(又名司美格鲁肽)。其中，索马鲁肽为GLP
‑
1衍生物药物中的代表。
[0010]索马鲁肽(Semaglutide)是由诺和诺德公司研发的长效GLP
‑
1衍生物，该药物只需要进行每周一次的皮下注射给药，目前已在多国获批上市。而且，诺和诺德通过制剂技术，开发了索马鲁肽的口服制剂。从结构上看，索马鲁肽是将GLP
‑
1(7
‑
37)链上第26位Lys接上AEEA、谷氨酸和十八烷脂肪二酸侧链，并将其中第8位氨基酸采用非天然氨基酸氨基异丁酸(Aib)取代原Ala所得。与利拉鲁肽相比，索马鲁肽的脂肪链更长，疏水性增加，但是索马鲁肽经过短链的AEEA修饰，亲水性大大增强。AEEA修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP
‑
4酶水解位点，还能降低肾排泄，延长生物半衰期，达到长循环的效果。索马鲁肽在多个临床试验研究已经证明联合不同的口服降糖药可以有效控制血糖，并能够使患者减轻体重、减少收缩压及改善胰岛β细胞功能。
[0011]由于糖尿病和肥胖患者人数众多，市场巨大，对相关GLP
‑
1衍生物的市场需求仍非常巨大。而本实验室经过长期研究，开发了一系列具备优于索马鲁肽的降糖和减重潜力的GLP
‑
1衍生物。因此，本专利技术的目的是提供一种具有优异的减重和降糖能力的GPL
‑
1衍生物。

技术实现思路

[0012]为了解决上述技术问题或者至少部分地解决上述技术问题，本专利技术提供了一种GLP
‑
1(7
‑
37)多肽类似物及其长效衍生物。本专利技术提供的长效GPL
‑
1(7
‑
37)衍生物具有优异的减重和降糖能力，其减重效果、降糖效果显著优于索马鲁肽，具备更为优异和广阔的临床和市场应用前景。
[0013]本专利技术中术语GLP
‑
1(7
‑
37)类似物是指对人天然GLP
‑
1(7
‑
37)氨基酸进行修饰获得的多肽，所述修饰包括去除和/或取代(置换)和/或添加(延长)一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸可以是天然存在的氨基酸，也可以是人工合成的氨基酸。本专利技术用一种简单的命名来描述所述类似物：例如[Val8]GLP
‑
1(7
‑
37)是指其中在位置8上天然存在的组氨酸已经由缬氨Val取代的GLP
‑
1(7
‑
37)类似物。
[0014]本专利技术中，有关肽(例如GLP
‑
1或胰岛素)的术语“衍生物”表示经化学修饰(如共价修饰等)的肽或其类似物。典型的修饰是酰胺、糖类、烷基、酰基、酯等。GLP
‑
1(7
‑
37)衍生物
的实例是N
ε26
‑
((4S)
‑4‑
(十六烷酰基氨基)
‑
羧基
‑
丁酰基)[Arg34，Lys26]GLP
‑1‑
(7
‑
37)。
[0015]本专利技术中，术语“脂肪族二酸”包括直链或支链脂族二羧酸。脂肪族二酸的非限定实例为琥珀酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、十二烷二酸、十四烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸和二十烷二酸。
[0016]本专利技术中，术语“药学上可接受的盐”是指保留母体的生物活性的多肽或蛋白的盐。
[0017]术语“载体”是指可以将编码蛋白质或多肽的核苷酸片段可操作地插入其中以引起所述蛋白质或多肽表达的媒介物。载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，以使其在宿主细胞内表达携带的遗传元件。载体的实例包括质粒、人工染色体、噬菌体、病毒颗粒等。载体可以含有多种用于控制表达的元件，包含启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件和报告基因。载体还可以包括有助于其进入细胞的材料，包括但不限于病毒颗粒、脂质体或蛋白质包膜。
[0018]本专利技术中术语“重组表达载体”是编码基因的核酸分子，其在宿主细胞中表达且含有控制所述基因的表达的必需元件。通常，表达载体包含转录启动子、目的基因和转录终止子。
[0019]本专利技术中宿主细胞是指可将包含编码目的蛋白质或多肽的核苷酸序列片段的载体引入到其中进行克隆或基因表达的细胞。适用于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞是原核生物、酵母或更高级真核生物细胞。
[0020]因此，一方面，本专利技术提供了一种GLP
‑
1(7
‑
37)类似物，所述GLP
‑
1(7
‑
37)类似物由下式所示的氨基酸序列的多肽组成：
[0021]HX8EGTFTSDVSSYLEEQAAREFIKWLVRRGG；
[0022]其中，X8选自V、I、T、L、G或S；优选的，X8选自V、I、T。
[0023]另一方面，本专利技术提供一种长效GLP
‑
1(7
‑
37)衍生物，所述衍生物包含分别与所述GLP
‑
1(7
‑
37)类似本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长效GLP
‑
1衍生物或其在药学上可接受的盐，其特征在于，所述长效GLP
‑
1衍生物中的GLP
‑
1(7
‑
37)类似物的氨基酸序列为：HX8EGTFTSDVSSYLEEQAAREFIKWLVRRGG；其中，X8选自V、I、T、L、G或S。2.根据权利要求1所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述X8选自V、I、T。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述衍生物通过氨基酸K残基上的ε氨基与脂肪酸侧链连接。4.根据权利要求3所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH2)
14
CO
‑
、HOOC(CH2)
15
CO
‑
、HOOC(CH2)
16
CO
‑
、HOOC(CH2)
17
CO
‑
、HOOC(CH2)
18
CO
‑
、HOOC(CH2)
19
CO
‑
、HOOC(CH2)
20
CO
‑
、HOOC(CH2)
21
CO
‑
或HOOC(CH2)
22
CO
‑
。5.根据权利要求4所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH2)
16
CO
‑
。6.根据权利要求4
‑
5中任一项所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述脂肪酸侧链通过接头与氨基酸K连接。7.根据权利要求6所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述接头为：其中，s和n均为1。8.根据权利要求7所述的长效GLP
‑
1衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述长效GLP
‑
1衍生物为：N
‑
ε
30
‑
[2
‑
(2
‑
[2
‑
(2
‑
[2
‑
(2
‑
[4
‑
(17
‑
羧基十七烷酰胺基)
‑
4(S)
‑
羧基丁酰基氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基][Val8Glu
22
Arg
26
Lys
30
Arg
34
Arg
35
Gly
36
]
‑
GLP
‑
1(7
‑
37)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或N
‑
ε
30
‑
[2
‑
(2
‑
[2
‑
(2
‑
[2
‑
(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹海燕，林兆生，朱志伟，贾宇琦，王含，王冠，
申请(专利权)人：吉林惠升生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：