【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于可调节细胞定位的重组多肽
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月11日提交的美国临时专利申请号62/914,310的权益，该专利申请以引用的方式整体并入本文。
技术实现思路
[0003]提供了重组多肽，其包含感兴趣的蛋白质、蛋白质定位标签和位于所述感兴趣的蛋白质与所述蛋白质定位标签之间的蛋白酶切割位点。在某些实施方案中，重组多肽还包含蛋白酶，其中所述蛋白酶切割位点是蛋白酶的切割位点。还提供了编码所述重组多肽的核酸、包含此类核酸的细胞以及包含此类细胞的组合物(例如，药物组合物)。还提供了调节感兴趣的蛋白质的细胞定位的方法和向有需要的个体施用基于可调节细胞的疗法的方法。
附图说明
[0004]图1：小图A：根据本公开的实施方案的重组多肽的示意性图示。重组多肽包含感兴趣的蛋白质、蛋白酶切割位点(“切割位点”)和蛋白质定位标签(在图1中称为“保留信号”)。在该实例中，感兴趣的蛋白质是嵌合抗原受体(CAR)。同样在该实例中，重组多肽还包含蛋白酶，其中所述蛋白酶切割位点是掺入重组多肽中的蛋白酶的...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组多肽，其包含：感兴趣的蛋白质；蛋白质定位标签；以及位于所述感兴趣的蛋白质与所述蛋白质定位标签之间的蛋白酶切割位点。2.根据权利要求1所述的重组多肽，其从N末端到C末端包含：所述感兴趣的蛋白质；所述蛋白酶切割位点；以及所述蛋白质定位标签。3.根据权利要求1所述的重组多肽，其从N末端到C末端包含：所述蛋白质定位标签；所述蛋白酶切割位点；以及所述感兴趣的蛋白质。4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组多肽，其中所述蛋白质定位标签选自由以下组成的组：内质网(ER)定位标签、高尔基体(Golgi)定位标签、溶酶体定位标签、质膜定位标签、线粒体定位标签、过氧化物酶体定位标签、细胞溶质定位标签和核定位标签。5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组多肽，其中所述蛋白质定位标签是ER定位标签。6.根据权利要求5所述的重组多肽，其中所述ER定位标签与氨基酸序列LYKYKSRRSFIDEKKMP(SEQ ID NO:1)具有85％或更高、90％或更高或100％的氨基酸序列同一性。7.根据权利要求5所述的重组多肽，其中所述ER定位标签包含氨基酸序列KKMP(SEQ ID NO:2)。8.根据权利要求1至4中任一项所述的重组多肽，其中所述蛋白质定位标签是高尔基体定位标签。9.根据权利要求8所述的重组多肽，其中所述高尔基体定位标签包含氨基酸序列YQRL(SEQ ID NO:24)。10.根据权利要求1至4中任一项所述的重组多肽，其中所述蛋白质定位标签是溶酶体定位标签。11.根据权利要求10所述的重组多肽，其中所述溶酶体定位标签包含氨基酸序列KFERQ(SEQ ID NO:25)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的重组多肽，其中所述感兴趣的蛋白质不是工程化的。13.根据权利要求1至11中任一项所述的重组多肽，其中所述感兴趣的蛋白质是工程化的。14.根据权利要求13所述的重组多肽，其中所述工程化的感兴趣的蛋白质是工程化细胞表面受体。15.根据权利要求14所述的重组多肽，其中所述工程化细胞表面受体是嵌合抗原受体(CAR)。16.根据权利要求15所述的重组多肽，其中所述CAR包含独立地选自由以下组成的组的
第一胞内信号传导结构域和第二胞内信号传导结构域或它们的片段：CD3ζ胞内信号传导结构域、CD28胞内信号传导结构域、4
‑
1BB胞内信号传导结构域、OX
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40胞内信号传导结构域、诱导型共刺激因子(ICOS)胞内信号传导结构域、CD27胞内信号传导结构域和MyD88/CD40胞内信号传导结构域。17.根据权利要求16所述的重组多肽，其中所述第一胞内信号传导结构域或其片段是CD3ζ胞内信号传导结构域，并且所述第二胞内信号传导结构域或其片段是4
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1BB胞内信号传导结构域。18.根据权利要求16所述的重组多肽，其中所述第一胞内信号传导结构域或其片段是CD3ζ胞内信号传导结构域，并且所述第二胞内信号传导结构域或其片段是CD28胞内信号传导结构域。19.根据权利要求15至18中任一项所述的重组多肽，其中所述CAR的胞外结合结构域包含单链抗体。20.根据权利要求19所述的重组多肽，其中所述单链抗体是单链可变片段(scFv)。21.根据权利要求19或权利要求20所述的重组多肽，其中所述CAR的胞外结合结构域特异性地结合癌细胞表面上表达的抗原。22.根据权利要求21所述的重组多肽，其中所述癌细胞表面抗原选自由以下组成的组：B7
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H3(CD276)、CD19、GD2、CD22和HER2。23.根据权利要求13所述的重组多肽，其中所述工程化的感兴趣的蛋白质是T细胞受体(TCR)。24.根据权利要求23所述的重组多肽，其中所述TCR识别癌细胞表面上展示的与主要组织相容性复合物(MHC)分子复合的抗原。25.根据权利要求中任一项所述的重组多肽1至13，其中所述感兴趣的蛋白质是细胞表面分子。26.根据权利要求25所述的重组多肽，其中所述细胞表面分子是细胞表面受体。27.根据权利要求25或权利要求26所述的重组多肽，其中所述细胞表面分子选自由以下组成的组：细胞因子受体、趋化因子受体、粘附分子、整联蛋白、抑制性受体、抑制性细胞表面配体、刺激性受体、刺激性细胞表面配体、含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的受体和含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的受体。28.根据权利要求1至13中任一项所述的重组多肽，其中所述感兴趣的蛋白质是转录因子。29.根据权利要求1至13中任一项所述的重组多肽，其中所述感兴趣的蛋白质是分泌型效应分子。30.根据权利要求29所述的重组多肽，其中所述分泌型效应分子选自由以下组成的组：刺激性配体、抑制性配体、细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶。31.根据权利要求29或权利要求30所述的重组多肽，其中所述蛋白质定位标签是ER定位标签。32.根据权利要求1至31中任一项所述的重组多肽，其中所述蛋白酶切割位点是病毒蛋白酶切割位点。33.根据权利要求所述的重组多肽32，其中所述病毒蛋白酶切割位点是针对衍生自丙
型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)的病毒蛋白酶。34.根据权利要求所述的重组多肽33，其中所述病毒蛋白酶切割位点是针对还包含衍生自HCV非结构蛋白4A(NS4A)的辅因子多肽的病毒蛋白酶。35.根据权利要求中任一项所述的重组多肽32至34，其中所述病毒蛋白酶切割位点选自由以下组成的组：NS4A/4B连接处切割位点、NS3/NS4A连接处切割位点、NS4A/NS4B连接处切割位点、NS4B/NS5A连接处切割位点、NS5A/NS5B连接处切割位点以及它们可被所述病毒蛋白酶切割的变体。36.根据权利要求1至35中任一项所述的重组多肽，其还包含报告子结构域。37.根据权利要求36所述的重组多肽，其中所述报告子结构域包含荧光蛋白。38.根据权利要求37所述的重组多肽，其中所述荧光蛋白是绿色荧光蛋白。39.根据权利要求36所述的重组多肽，其中所述报告子结构域包含生物发光蛋白。40.根据权利要求39所述的重组多肽，其中所述生物发光蛋白是荧光素酶。41.根据权利要求40所述的重组多肽，其中所述荧光素酶是纳米荧光素酶。42.根据权利要求36至41中任一项所述的重组多肽，其中所述报告子结构域位于所述感兴趣的蛋白质与所述蛋白酶切割位点之间。43.根据权利要求1至42中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽还包含蛋白酶，并且其中所述蛋白酶切割位点是所述蛋白酶的切割位点。44.根据权利要求43所述的重组多肽，其中所述蛋白酶切割位点位于所述感兴趣的蛋白质与所述蛋白酶之间。45.根据权利要求43或权利要求44所述的重组多肽，其从N末端到C末端包含：所述感兴趣的蛋白质；所述蛋白酶切割位点；所述蛋白酶；以及所述蛋白质定位标签。46.根据权利要求43或权利要求44所述的重组多肽，其从N末端到C末端包含：所述蛋白质定位标签；所述蛋白酶；所述蛋白酶切割位点；以及所述感兴趣的蛋白质。47.一种核酸，其编码权利要求1至46中任一项所述的重组多肽。48.一种表达载体，其包含权利要求47所述的核酸。49.一种细胞，其包含权利要求47所述的核酸或权利要求48所述的表达载体。50.根据权利要求49所述的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。51.根据权利要求50所述的细胞，其中所述细胞是人类细胞。52.根据权利要求49至51中任一项所述的细胞，其中所述细胞是免疫细胞。53.根据权利要求52所述的细胞，其中所述免疫细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。54.根据权利要求53所述的细胞，其中所述免疫细胞是T细胞。
55.根据权利要求所述的细胞54，其中所述T细胞选自由以下组成的组：原初T细胞(T
N
)、细胞毒性T细胞(T
CTL
)、记忆T细胞(T
MEM
)、T记忆干细胞(T
SCM
)、中央记忆T细胞(T
CM
)、效应记忆T细胞(T
EM
)、组织驻留记忆T细胞(T...
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