一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法，其特征在于：样品垫为经处理液处理，所述处理液的制备包括以下步骤：按照以下配方配制1L样品垫处理液：配制0.2mol/L Na2HPO4：称取71.6gNa2HPO4‑

【技术实现步骤摘要】
一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法


[0001]本专利技术涉及样品垫，具体地说，是涉及一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法。

技术介绍

[0002]免疫层析(immu
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nochromatography as say，ICA)是出现于20世纪80年代初期的一种新型的免疫分析方式，免疫层析法(immunochromatography)的原理是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。
[0003]免疫层析法中的检测原理有双抗原夹心法、双抗体夹心法、竞争法、间接法等，间接法中主要用于血清中抗体检测，将纯化或者重组的抗原固定于NC膜上，标记多为蛋白，此方法要求胶体金过量，一般来说样品在加入前需要稀释或者加极少量后再加稀释液，间接法原理，加样方式为膜加样法，即用移液器取1.5μl血清/血浆或2μl全血样本垂直加于样本加样处，加样时移液器枪头须轻轻碰到NC膜以便顺利加样。若使用一次性塑料加样环，其环形体须完全浸入样本，然后将环形体垂直轻触试剂加样处的膜表面以渗吸样本，加样处的NC膜表面有润湿的痕迹，方提示加样成功。
[0004]该专利技术的有益之处是：本专利技术大大减少了样本用量，实现了末梢血检测，方便患者取血。血清、血浆、全血样本均能检测，满足了不同人群及检测环境的需求。目前此加样方法已在结核分枝杆菌IgG抗体、肺炎支原体IgG抗体、肺炎衣原体IgG抗体、甲型肝炎病毒IgG抗体等产品中应用。
[0005]但是此加样方法中的问题是在NC膜处加全血样本存在扩散不均匀的现象，在样本爬升过程中导致在检测线（T）区域出现T线不均匀或是显半边的现象，影响结果判读。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术措施来达到的：一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法，其特征在于：其样品垫为经处理液处理，所述处理液的制备包括以下步骤：按照以下配方配制1L样品垫处理液：配制0.2mol/L Na2HPO4：称取71.6gNa2HPO4‑
12H2O，溶于1000ml水，配制0.2mol/L NaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4‑
2H2O，然后取19ml 0.2mol/L的 Na2HPO4，81ml 0.2mol/L的NaH2PO4配制成0.2mol/LPB，然后取100ml0.2mol/L PB，加水稀释至1000ml得0.02mol/LPB溶液，称取9g的NaCl，加入以上0.02mol/LPB溶液中，即为0.02mol/LPBS，然后依次加入0.5g抗RBC、5g表面活性剂S9、4g大分子物质PVP10、量取
0.5mL的Proclin
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300。
[0008]作为一种优选方案，使用配置好的处理液处理样品垫：每张30cm
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25cm的样品垫，用50mL所述处理液均匀涂布后置于37℃电热鼓风干燥箱中干燥12小时，干燥保存备用。
[0009]作为一种优选方案，将处理的特殊样品垫，裁切成1*10mm，用双面胶贴敷于试剂条加样孔位置下移1*10mm处，然后将样品垫置于贴敷好的双面胶之上，使得样品垫恰好位于加样位置。
[0010]作为一种优选方案，加样步骤如下：用移液器取1.5μl血清/血浆或2μl全血样本，或是用加样环取1.5μl血清/血浆或2μl全血样本；移动移液器枪头，或一次性塑料加样环，垂直加于样本加样处；操控移液器枪头或一次性塑料加样环于加样孔处即可；在下方S孔随即滴加2滴稀释液（约80
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100μl），15
‑
20分钟观察结果，20分钟后结果无效。
[0011]作为一种优选方案，所述样品垫材质为无纺布、聚酯纤维或聚酯膜。
[0012]由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术的优点是：在加样处添加的特殊处理的样品垫，代替硝酸纤维素膜承载血清、血浆、全血样本，能够使样本均匀扩散在样品垫上，无需均匀涂抹样本，即可扩散均匀，不会破坏硝酸纤维素膜，在膜加样位置处，因NC膜虽具有一定的亲水性，但加入样本后，扩散均匀性上存在不均一的问题，选择无纺布作为样品垫进行处理使用，样品垫是免疫快速测试试剂条中重要组成部分，主要有玻璃纤维、无纺布等，样品垫为了使样本均匀分布，一般使用化学试剂进行修饰，起到预过滤作用，另外一方面，由于使用玻纤处理需要进行涂抹，会存在涂抹不均匀的情况，所以，选择无纺布作为样品垫进行使用，无需涂抹，液体可均匀的扩散到无纺布中；处理液的选择上，选择分散性及渗透性较好的表面活性剂 S9（Tetronic 1307），Tetronic 1307 既具有良好的界面活性，又兼备阴、阳离子表面活性剂的优点，同时还具有良好的乳化能力、分散能力和抗静电作用等。与其他表面活性剂比较，两性表面活性剂既不易受无机电解质的影响，又无浊点现象，而且无论吸附到正电荷还是负电荷的界面上都不会形成疏水表面，这些特点使其在许多领域比非离子表面活性剂具有更广泛的应用潜力，所以，为了使样本在加样处的扩散更加均匀，将S9（Tetronic 1307）加入到无纺布处理液中；另外，处理液中还添加PVP10，其功效与表面活性剂相似，高分子量的PVP10在适当浓度下可以降低水的表面张力，能增加某些基本不溶于水而有活性物质的水溶性，具有分散作用，可使溶液中的有色物质、悬浮液、乳液分散均匀并保持稳定；另外，可吸附在许多界面上，并在一定程度上降低界面表面张力。
[0013]本专利技术采用渗透性、扩散性好的无纺布样品垫材料，来代替硝酸纤维素膜承载血清、血浆、全血样本，可均匀、有效地吸收液体，并使液体均匀在扩散在样品垫上，无需均匀涂抹样本，即可扩散均匀，不会破坏硝酸纤维素膜。
[0014]本专利技术样品垫的处理液中加入分散性及渗透性较好的表面活性剂 S9（Tetronic 1307）、可以降低表面张力、增加水溶性的大分子物质PVP10，可使样本均匀在扩散在此样品垫层上，解决了全血样本加样扩散不均匀的情况，使检测线（T）区域显色均匀。
[0015]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步说明。
附图说明
[0016]图1是本专利技术实施例1的结构示意图。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法，其特征在于：样品垫为经处理液处理，所述处理液的制备包括以下步骤：按照以下配方配制1L样品垫处理液：配制0.2mol/L Na2HPO4：称取71.6gNa2HPO4‑
12H2O，溶于1000ml水，配制0.2mol/L NaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4‑
2H2O，然后取19ml 0.2mol/L的 Na2HPO4，81ml 0.2mol/L的NaH2PO4配制成0.2mol/LPB，然后取100ml0.2mol/L PB，加水稀释至1000ml得0.02mol/LPB溶液，称取9g的NaCl，加入以上0.02mol/LPB溶液中，即为0.02mol/LPBS，然后依次加入0.5g抗RBC、5g表面活性剂S9、4g大分子物质PVP10、量取0.5mL的Proclin
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300。2.根据权利要求1所述的一种用于免疫层析法检测中的样品垫的制备方法，其特征在于：使用配置好的处理液处理样品垫：每张30...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，王晓刚，郑国华，杨致亭，杨明霞，朱衍杰，毕德坤，
申请(专利权)人：山东康华生物医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：