一种精准定量调控大肠杆菌全细胞催化的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种精准定量调控大肠杆菌全细胞催化的方法及应用，属于基因工程与生物催化领域。本发明专利技术通过构建色氨酸操纵子及温敏阻遏系统，可实现大肠杆菌生长前期稳定、正常生长，稳定期促进目的蛋白的表达；该系统还通过控制发酵温度，调节结构基因的表达水平，调控D,D

【技术实现步骤摘要】
一种精准定量调控大肠杆菌全细胞催化的方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种精准定量调控大肠杆菌全细胞催化的方法及应用，属于基因工程与生物催化领域。

技术介绍

[0002]大肠杆菌表达系统是目前基因工程中最常用的重组蛋白表达系统具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点。大肠杆菌在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。是常用的重组蛋白高效生产的宿主之一，但是在大肠杆菌的异源表达中，大部分重组蛋白在信号肽的引导下分泌到周质空间，会导致中间体大量积聚，对蛋白质的生产造成阻碍。
[0003]肽聚糖是由双糖单位，四肽尾还有肽桥聚合而成得多层网状大分子结构。肽聚糖层的骨架由N
‑
乙酰葡萄糖胺和N
‑
乙酰胞壁酸通过β
‑
1,4糖苷键连接而成，糖链间由肽链交联，构成稳定的网状结构，这样构成了整个细菌表面的细胞壁。作为细胞壁的主要成分，肽聚糖的组成与细胞结构的完整性、外膜的通透性的维持、细菌的抗干燥能力和耐热性等均密切相关。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌在基因组上敲除了色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA，含有具有温度诱导和受色氨酸调控的重组质粒和表达目的蛋白的重组质粒；所述具有温度诱导和受色氨酸调控的重组质粒含有SPP型启动子、低温诱导型启动子P
R
、高温诱导型启动子P
L
、色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA、操纵区trpO、D,D
‑
羧肽酶基因dacA和温敏阻遏蛋白CI
ts
857；所述操纵区trpO具有可与由阻遏蛋白trpR和色氨酸形成的共价二聚体结合的结合位点；所述启动子P
L
上具有温敏阻遏蛋白CI
ts
857的结合位点；所述启动子P
L
调控trpEDCBA的表达；所述启动子P
R
调控温敏阻遏蛋白CI
ts
857的表达；所述SPP型启动子调控操纵区trpO的基因表达；所述操纵区trpO的下游具有dacA基因；所述启动子P
L
和启动子P
R
的转录方向相反；所述表达目的蛋白的重组质粒上含有编码目的蛋白的基因。2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，启动子P
L
的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；启动子P
R
的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；编码所述启动子SPP的核苷酸序列如SEQ ID No.7～11任一所示；操纵区trpO的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；编码所述温敏阻遏蛋白CI
ts
857的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述D,D
‑
羧肽酶基因dacA的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。3.根据权利要求1或2所述的重组大肠杆菌，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨海泉，陈献忠，官剑民，沈微，夏媛媛，曹钰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：