增强超氧化物歧化酶基因的表达提高谷氨酰胺转氨酶产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种增强超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase.Ni)基因SMDS_2075的转录水平的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101及其制备与发酵方法，基于基因组学，通过在茂原链霉菌C2中，利用人工强启动子kasOp*过量表达内源Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075，得到高产谷氨酰胺转氨酶的突变株TGS101，可明显提高谷氨酰胺转氨酶产量。本发明专利技术所得的工程菌株TGS101的谷氨酰胺转氨酶发酵终产量在实验室摇瓶水平下较对照菌株提高31.30％，同时使发酵成本大幅降低。使发酵成本大幅降低。使发酵成本大幅降低。

【技术实现步骤摘要】
dismutase. Ni基因SMDS_2075的转录水平而获得的。
[0009]进一步的，该类菌株由茂原链霉菌C2过量表达来源于茂原链霉菌C2的Superoxidedismutase.Ni基因SMDS_2075后获得。
[0010]进一步的，该类菌株通过在茂原链霉菌C2中利用人工强启动子kasOp*过量表达内源的 Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075后获得。
[0011]所述菌株的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075过量表达。
[0012]“过量表达”指在受体菌茂原链霉菌C2染色体上插入一个拷贝的来源于茂原链霉菌C2 的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075，增强Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075 的转录水平。
[0013]所述菌株含有人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的Superoxidedismutase.Ni基因SMDS_2075的表达盒。
[0014]所述表达盒含有人工强启动子kasO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101，其特征在于，所述菌株通过增强Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的转录水平而获得的。2.如权利要求1所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101，其特征在于，所述菌株通过在茂原链霉菌C2中利用人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075后获得；所述茂原链霉菌C2的分类名为茂原链霉菌Streptomyces mobaraensis C2，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M 2020194，保藏日期为2020年6月10日。3.如权利要求1所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101，其特征在于，所述菌株的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075过量表达；所述Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的序列如SEQ ID NO.1所示。4.如权利要求1所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101，其特征在于，所述菌株含有人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的表达盒。5.如权利要求4所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101，其特征在于，所述表达盒含有人工强启动子kasOp*、Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075、转录终止序列。6.一种增强Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的转录水平以提高谷氨酰胺转氨酶发酵水平的方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：步骤一：设计并构建用于过量表达Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的整合型质粒载体pTDS101；所述Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075的序列如SEQ ID No.1所示；步骤二：利用整合型质粒载体pTDS101，在受体菌茂原链霉菌C2染色体上插入一个拷贝的来源于如权利要求2中所述的茂原链霉菌C2的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075，并通过抗性和PCR验证筛选得到基因过量表达的重组突变株TGS101；步骤三：将培养的Superoxide dismutase.Ni基因SMDS_2075过量表达的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS101的孢子接种于种子培养基中，25
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35℃、180
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220rpm的条件下培养20
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24h，以8
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15％的接种量转接至发酵培养基中，25
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35℃、180
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220rpm的条件下发酵28
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32h，收集发酵液并进行酶活检测。7.如权利要求6所述的的方法，其特征在于，步骤一中，所述整合型质粒载体pTDS101的构建方法为：通过PCR扩增得到396bp的Superoxide dismut...

【专利技术属性】
技术研发人员：步国建，武立清，白林泉，
申请(专利权)人：江苏东汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：