一种青风藤特征图谱及含量测定方法技术

本发明专利技术公开一种青风藤特征图谱及含量测定方法，该方法为：照高效液相色谱法，制备对照品溶液，制备供试品溶液，按照规定的色谱条件，测得供试品特征图谱(2

【技术实现步骤摘要】
一种青风藤特征图谱及含量测定方法


[0001]本专利技术属于原料药的检测
，尤其涉及一种青风藤药材的特征图谱及含量测定方法。

技术介绍

[0002]青风藤味苦、辛，性平，归肝脾经，被收录于2020版《中国药典》一部。青风藤具有祛风利湿、活血解毒的功能，临床上多用于治疗风湿性和类风湿性关节炎，强直性脊椎炎以及心律失常等。青风藤的主要有效成分为生物碱类成分，包括青藤碱、木兰花碱和蝙蝠葛碱等。其中的青藤碱是青风藤的指标性有效成分，具有广泛药理活性，包括镇痛、镇静、免疫抑制、降压、抗炎、抗心律失常等。

技术实现思路

[0003]本专利技术目的在于提供一种青风藤特征图谱及含量测定方法。本专利技术采用的技术方案是：青风藤特征图谱测定及含量测定
[0004]照高效液相色谱法
[0005]1)对照品溶液制备
[0006]分别取青藤碱与木兰花碱对照品适量，精密称定，加入甲醇制成每1mL含对照品 0.5g的溶液，即得。
[0007]2)供试品溶液制备
[0008]取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇20mL，密塞，超声20分钟(功率200W，频率40kHz)，滤过，并用70％乙醇 20mL冲洗滤渣，合并滤液与洗液，60℃回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至 20ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心取上清液，即得。
[0009]3)色谱条件：
[0010]仪器：Waters 2695液相色谱仪
[0011]色谱柱：XBrige C
18
(4.6
×
250mm,5μm)
[0012]柱温：25℃
[0013]流速：1.0mL/min
[0014]进样量：5μL
[0015]流动相：A(水相)：10mmoL甲酸铵用氨水调节pH至10.0；B(有机相)：乙腈
[0016][0017]供试品特征图谱(2
‑
4)中呈现4个特征峰，2、5、8和21号色谱峰为共有峰，保留时间分别为3.36、9.73、16.76和44.41(单位：min)。
[0018]使用对照品对青风藤液相色谱图中色谱峰进行指认，5号色谱峰为木兰花碱， 21号色谱峰为青藤碱；青风藤色谱指纹图谱相对保留时间RSD小于2.59％；分别以S19、S31和S65作为青风藤藤茎、根茎和根指纹图谱的参照图谱。
[0019]按干燥品计算，青藤碱含量不少于0.80％，木兰花碱含量不少于0.40％。实验例1：
[0020]1、仪器与软件：Waters 2695高效液相色谱仪，配备2998型PDA检测器(美国Waters公司)，BGZ
‑
140型电热鼓风干燥箱(上海博讯医疗生物仪器股份有限公司)，WB400US型超声清洗机(上海望标仪器有限公司)，ME55型电子天平(瑞士 Metter
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toledo)，TG16
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WS型离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)， JK
‑
200DB型JK
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200DB型数控超声波清洗器(安徽合肥金尼克机械制造有限公司)， Milli
‑
Q型超纯水系统(美国Millipore公司)。数据处理采用：本申请采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)生成青风藤的色谱指纹图谱；采用SIMCA
‑
P 14.1(Umetric公司)对指纹图谱匹配数据进行降维并进行OPLS
‑
DA分析；使用 Origin 2018(OriginLab公司)进行图形绘制。
[0021]2、试剂及材料：青藤碱(批号：110774
‑
201808)购自中国食品药品检定研究院，木兰花碱(批号：P23J11L119379)购自上海源叶生物科技有限公司。甲醇、乙醇，购自国药集团化学试剂有限公司，乙腈购自美国天地有限公司，氨水购自阿拉丁科技(中国)有限公司，甲酸铵购自上海易恩化学技术有限公司，纯净水由Milli
‑
Q型超纯水系统制备。
[0022]3.液相色谱样品制备条件考察
[0023]1)提取方法及是否复溶
[0024]现有技术中一般使用甲醇或70％乙醇提取青风藤，实验尝试使用甲醇与70％乙醇对青风藤进行提取，结果发现木兰花碱前置拖尾严重。后采用甲醇提取蒸干甲醇复溶、甲醇提取蒸干70％乙醇复溶与70％乙醇、70％乙醇提取蒸干甲醇复溶、 70％乙醇提取蒸干70％乙醇复溶。发现甲醇提取蒸干甲醇复溶与70％乙醇提取蒸干甲醇复溶木兰花碱未出现前置拖尾，色谱图如图1所示。如表1所示，70％乙醇提取蒸干甲醇复溶时木兰花碱分离度为2.15，大于1.5；甲醇提取蒸干甲醇复溶时木兰花碱分离度为1.06，小于1.5，两种提取方法结果并无其他差别。故选用70％乙醇提取蒸干甲醇复溶作为青风藤供试液的提取方法。
[0025]表1提取溶剂考察结果表
[0026][0027]2)提取溶剂百分比考察
[0028]实验对提取溶剂(乙醇)的百分比进行了考察，分别取5份青风藤粉末(过三号药典筛)，每份约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入60％、70％、80％、90％和95％乙醇20mL，密塞，超声20分钟(功率200W，频率40kHz)，滤过，并用60％、70％、80％、90％和95％乙醇20mL冲洗滤渣，合并滤液与洗液， 60℃回收至干，残渣加甲醇溶解，转移至20ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心取上清液，即得。色谱图如图2所示，峰面积如表2所示。不同百分比乙醇提取的青风藤样品HPLC色谱图并无明显区别，于是对青风藤样品HPLC色谱图的峰面积进行对比，结果表明60％和70％乙醇提取青藤碱和木兰花碱峰面积差别不大，乙醇百分比为80％及更高浓度乙醇提取的青风藤样品，青藤碱和木兰花碱峰面积随乙醇百分比增大而明显减小，因60％乙醇不易蒸干，故选用70％作为提取溶剂。
[0029]表2乙醇溶度考察结果
[0030][0031]4、色谱条件考察
[0032]1)波长选择
[0033]对样品进行全波长扫描，青藤碱及木兰花碱在200nm
‑
400nm波长范围内吸收如图3和图4所示，全波长扫描结果，考察了262nm、267nm、272nm和283nm 四个检测波长，结果表明262nm时色谱图峰形较好，综合考虑后，最终选择了测定青藤碱常用的262nm作为本专利技术的测检测波长。
[0034]2)pH选择
[0035]实验考察了9.0、9.5和10.0三个流动相pH，结果如表3所示，结果表明pH 为9.0与
10.0时色谱图均较好，但pH为9.0青藤碱与相邻的峰相距过近，当青藤碱含量高时易与邻近峰分离度下降，故选择pH为10.0。
[0036]表3流动相pH考察结果
[0037][0038]3)色谱柱柱温选择
[0039]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种青风藤药材的特征指纹图谱检测方法，其特征在于该方法为：照高效液相色谱法1)对照品溶液制备分别取青藤碱与木兰花碱对照品适量，精密称定，加入甲醇制成每1mL含对照品0.5g的溶液，即得。2)供试品溶液制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇20mL，密塞，超声20分钟(功率200W，频率40kHz)，滤过，并用70％乙醇20mL冲洗滤渣，合并滤液与洗液，60℃回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至20ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心取上清液，即得。3)色谱条件：仪器：Waters 2695液相色谱仪色谱柱：XBrige C
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250mm,5μm)柱温：25℃流速：1.0mL/min进样量：5μL流动相：A(水相)：10mmoL甲酸铵用氨水调节pH至10.0；B(有机相)：乙腈2.如权利要求1所述的一种青风藤药材的特征指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中：供试品特征图谱(2
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4)中呈现4个特征峰，2、5、8和21号色谱峰为共有峰，保留时间分别为3.36、9.73、16.76和44.41(单位：min)。3.如权利要求1所述的一种青风藤药材的特征指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中：使用对照品对...

【专利技术属性】
技术研发人员：仇萍，李文龙，王玺，任明军，董绍象，朱永波，曾维军，谷丽红，许李，姚本军，贺兴立，
申请(专利权)人：湖南正清制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：