一种检测信号通路相关基因RNA表达的基因芯片及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种检测信号通路相关基因RNA表达的基因芯片及其使用方法，其特点是将待测mRNA序列信号转移到探针的延伸链中进行标定与检测，提高了检出信号的信噪比，同时利用核酸聚合酶增强对序列配对准确性的校验。本发明专利技术适用于信号通路中各基因的表达状况的分析检测，尤其是多条信号通路之间的相互作用。尤其是多条信号通路之间的相互作用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测信号通路相关基因RNA表达的基因芯片及其使用方法


[0001]本专利技术涉及生物芯片领域，特别涉及一种检测信号通路相关基因RNA表达的基因芯片及其使用方法。

技术介绍

[0002]生物芯片技术已经广泛应用于临床疾病诊断、健康管理、药物研究开发、动植物检疫、食品检测、环境监测、科学研究、法医学检测等众多领域，有广阔的应用前景，市场需求量非常大。基因芯片是生物芯片中的一类，是通过在芯片的基片上定植一系列的序列已知探针而制备，可用于特定标记核酸的杂交检测，能通过识别检测与信息处理来报告检测对象中核酸信息。
[0003]在当前的基因芯片检测中，基因芯片主要是通过探针与标记目标序列的杂交完成，仅仅是通过碱基互补配对完成验证选择，缺少更多的检查机制，容易造成假阳性或假阴性。由于杂交信息是通过碱基互补配对结合在探针上，结合能力弱，强化洗涤会造成假阴性；洗涤不足容易造成假阳性。
[0004]信号通路中相关基因的表达是生命科学与医学研究的重要内容，生命的生老病死都是信号通路的作用结果，了解信号通路中相关基因的表达水平对于了解生命规律、对于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测信号通路相关基因RNA表达的基因芯片及其使用方法，其特征在于，包括以下步骤：S1将特定信号通路中的所有相关基因按其表达的成熟mRNA序列选取与优化探针；S2将探针固定在基片上，保证探针序列都通过连接臂与基片连接，连接臂仅增加探针的空间自由度并不参与识别与结合；S3将纯化的总RNA加入到基因芯片中，并在基因芯片上组装RT
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PCR反应体系，每个RT
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PCR反应中的一对引物均由基因芯片上固定的探针与oligo
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dT组成，反应底物中有一种底物为标记dNTP；S4在RT
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PCR过程中，oligo
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dT是过量的，所有成熟mRNA都可利用oligo
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dT为引物合成互补链（cDNA第一链），当基因芯片上的探针与cDNA第一链配对结合时，聚合酶以基因芯片上的探针为引物合成cDNA第二链，此过程即为3'
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RACE（快速扩增cDNA末端技术），固定在基因芯片的基片上的探针延伸过程也是标记dNTP进入探针延伸链的过程；利用探针与oligo
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dT配合，可以完成靶标mRNA的3'末端扩增；如果cDNA第一链不能与基因芯片上的所有探针配对，则该cDNA第一链无法完成3'
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RACE（快速扩增cDNA末端技术），不能通过聚合酶作用下的探针延伸反应进行探针的标记dNTP标记；S5通过清洗去除所有RT
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PCR反应组分及所有未与基片连接的核酸链，与延伸的探针链配对的非固定在基片上的核酸链也通过变性后洗脱的方法去除，基因芯片上只保留未反应的探针及完成延伸反应的探针，且标...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宁，
申请(专利权)人：北京华牛世纪生物技术研究院，
类型：发明
国别省市：