一种同时检测DNA与RNA的寡核苷酸芯片及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种同时检测DNA与RNA的寡核苷酸芯片及其使用方法，其特点是利用固定在基片上的带有oligo

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测DNA与RNA的寡核苷酸芯片及其使用方法


[0001]本专利技术涉及生物芯片领域，特别涉及一种同时检测DNA与RNA的寡核苷酸芯片及其使用方法。

技术介绍

[0002]生物芯片技术已经广泛应用于临床疾病诊断、健康管理、药物研究开发、动植物检疫、食品检测、环境监测、科学研究、法医学检测等众多领域，有广阔的应用前景，市场需求量非常大。基因芯片是生物芯片中的一类，是通过在芯片的基片上定植一系列的序列已知探针而制备，可用于特定标记核酸的杂交检测，能通过识别检测与信息处理来报告检测对象中核酸信息。
[0003]在当前的基因芯片检测中，基因芯片主要是通过探针与标记目标序列的杂交完成，仅仅是通过碱基互补配对完成验证选择，缺少更多的检查机制，容易造成假阳性或假阴性。同时，由于杂交信息是通过碱基互补配对结合在探针上，结合能力弱，强化洗涤会造成假阴性；洗涤不足容易造成假阳性。
[0004]信号通路中相关基因的表达是生命科学与医学研究的重要内容，生命的生老病死都是信号通路的作用结果，了解信号通路中相关基因的表达水平对于了解生命规律、对于构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测DNA与RNA的寡核苷酸芯片及其使用方法，其特征在于，包括以下步骤：S1对于选定基因及其转录形成的mRNA，分别设计相应的扩增引物，其中，RT
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PCR扩增引物包括：RNA检测探针以及基于两个相邻外显子设计的游离引物，RNA检测探针是基于成熟mRNA的polyA及其相邻序列设计，能够与成熟mRNA的3'末端的polyA及其相邻序列互补配对；基于两个相邻外显子设计的游离引物能够与RNA检测探针配合完成RT
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PCR扩增，从成熟mRNA中相邻两个外显子序列中选取，由于不包括两个外显子之间的内含子，基于两个相邻外显子设计的游离引物优先与cDNA第一条链结合，并受到内含子影响不结合基因组DNA；RNA检测探针通过连接臂固定在基片上；PCR扩增引物包括：DNA检测探针及DNA检测探针匹配游离引物，均依据基因的内含子序列设计，DNA检测探针通过连接臂固定在基片上；S2将RNA检测探针与DNA检测探针按规划固定在基片上，保证探针序列都通过连接臂与基片连接，连接臂仅增加探针的空间自由度并不参与识别与结合；S3提取待测样品中的核酸，充分去除蛋白质，尤其是充分去除核酸酶，使用核酸酶抑制剂要注意不能干扰聚合酶活性；S4在基因芯片上组装RT
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PCR反应体系，其中反应底物中有一种标记dNTP，RT
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PCR反应中聚合酶将标记dNTP整合到新合成的RNA检测探针延伸链中；同时，在基因芯片上组装PCR反应体系，PCR反应中聚合酶将标记dNTP整合到新合成的DNA检测探针延伸链中；S5通过清洗去除RT
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PCR反应组分、PCR反应组分及所有未与基片连接的核酸链，与新合成的RNA检测探针延伸链配对的非固定在基片上的核酸链通过变性后洗脱的方法去除，与新合成的DNA检测探针延伸链配对的非固定在基片上的核酸链也通过变性后洗脱的方法去除，在基因芯片上仅保留连接在基片上未反应的探针以及完成延伸反应的探针，标记dNTP通过整合在探针延伸链上而保存在基片上，且分别位于新合成的RNA检测探针延伸链和新合成的DNA检测探针延伸链中；S6利用click反应完成对标记dNTP的最终可识别标...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宁，
申请(专利权)人：北京华牛世纪生物技术研究院，
类型：发明
国别省市：