一种膀胱癌检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种膀胱癌检测试剂盒及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术提供了一种膀胱癌检测试剂盒，所述试剂盒包括检测circZFR的检测试剂。本发明专利技术先通过环状RNA表达谱分析发现环状RNA cZFR为在膀胱癌干细胞中表达量升高最显著的环状RNA，并且和患者预后显著相关，然后通路离心检测膀胱癌病人尿液外泌体相比正常人尿液外泌体中环状RNA cZFR表达显著升高。可见，本发明专利技术确定环状RNA cZFR作为膀胱癌复发的临床诊断与治疗靶标的潜在应用价值，为预防膀胱癌复发提供新的理论依据。为预防膀胱癌复发提供新的理论依据。为预防膀胱癌复发提供新的理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种膀胱癌检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及一种膀胱癌检测试剂盒及其应用，属于分子生物学


技术介绍

[0002]膀胱癌(Bladder Cancer，BC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，是世界范围内严重危及生命健康的恶性肿瘤之一。膀胱镜检查和细胞学检查是目前膀胱癌诊断的主要技术，但前者是有创检查且费用高，后者的敏感性低。经尿道膀胱肿瘤切除术(TUR
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BT)可同时做到膀胱癌的诊断、治疗，并明确病理分期，是治疗膀胱癌的首选术式，但患者TUR
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BT术后复发率极高，有10～70％的患者会在1年内复发，术后5年内有24～84％的病人复发，其中部分病例伴有肿瘤恶性程度增加或浸润能力增强，严重影响患者的生存期。因此，如何降低膀胱癌患者术后复发风险、延长其生存期，一直是临床关注的重点。
[0003]已有研究表明膀胱癌组织中存在肿瘤干细胞亚群在肿瘤复发中发挥重要作用，肿瘤干细胞(Cancer Stem Cell,CSC)又称为肿瘤起始细胞(Tumor Initiative Cell，TIC)，是肿瘤中的一少部分细胞，这类细胞具有自我更新和分化为肿瘤全部亚群的能力。因此，通过对膀胱癌干细胞干性调节机制的研究，正确认识膀胱癌干性维持的条件，对于监测膀胱癌复发，以及时采取针对性的干预措施预防膀胱癌复发，提高膀胱癌患者生存率至关重要。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一种膀胱癌检测试剂盒，所述试剂盒包括检测circZFR的检测试剂。<br/>[0005]在本专利技术的一种实施方式中，所述circZFR的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
[0006]在本专利技术的一种实施方式中，所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特异性引物对；所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ ID NO.2的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID NO.3的下游引物组成。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒的检测对象为尿液外泌体。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒用于膀胱癌的诊断和复发监控。
[0009]本专利技术还提供了检测circZFR的检测试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的应用。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述circZFR的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特异性引物对；所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ ID NO.2的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID NO.3的下游引物组成。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒的检测对象为尿液外泌体。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒用于膀胱癌的诊断和复发监控。
[0014]本专利技术还提供了一种在膀胱癌病人尿液中检测膀胱癌相关标志物的方法，包括如下步骤：
[0015]步骤一：从膀胱癌病人尿液中提取尿液外泌体；
[0016]步骤二：提取尿液外泌体的RNA；
[0017]步骤三：将外泌体RNA逆转录成cDNA；
[0018]步骤四：通过PCR检测cDNA中膀胱癌相关标志物的表达量；
[0019]所述肿瘤相关标志物为circZFR。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述circZFR的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特异性引物对；所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ ID NO.2的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID NO.3的下游引物组成。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述方法用于膀胱癌的诊断和复发监控。
[0023]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0024]本专利技术提供了一种膀胱癌检测试剂盒，所述试剂盒包括检测circZFR的检测试剂。本专利技术先通过环状RNA表达谱分析发现环状RNA cZFR为在膀胱癌干细胞中表达量升高最显著的环状RNA，并且和患者预后显著相关，然后通过通路离心检测膀胱癌病人尿液外泌体相比正常人尿液外泌体中环状RNA cZFR表达显著升高。可见，本专利技术确定环状RNA cZFR作为膀胱癌复发的临床诊断与治疗靶标的潜在应用价值，为预防膀胱癌复发提供新的理论依据。
附图说明
[0025]图1：差异circRNA的散点图。图中，X和Y轴分别代表非干细胞和干细胞，绿线为倍数变化线，在顶部绿线上方和底部绿线下方的circRNA指比较的两个样品之间的circRNA的变化超过2倍差异circRNA。
[0026]图2：差异circRNA的火山图。图中，log2(fold change)为横坐标，T检验显著性检验P值的负对数
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log10(pvalue)为纵坐标，红色显示为差异倍数大于2倍，且p值小于0.05的circRNA，箭头所示为cZFR(锌指样RNA结合蛋白，zinc finger RNA binding protein，circZFR)。
[0027]图3：肿瘤干细胞差异circRNA聚类热图。图中显示fold change变化前10位的circRNA。
[0028]图4：cZFR在肿瘤组织中高表达与病人预后相关。图中，(A)RNA原位杂交检测cZFR在组织芯片中表达情况；(B)cZFR在肿瘤中高表达；(C)cZFR在不同分期膀胱癌病人中表达情况；(D)cZFR表达与病人预后相关。
[0029]图5：cZFR在膀胱癌患者尿液外泌体中高表达。图中，(A)膀胱癌患者尿液来源外泌体电镜图片(scale bar，200nm)；(B)NAT分析尿液外泌体粒径范围；(C)免疫印迹检测外泌体及尿液上清中marker：CD63，CD81；
[0030](D)qPCR检测两例膀胱癌及正常人尿液外泌体cZFR表达。
具体实施方式
[0031]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的产品，均落在本专利技术的
保护范围之内。
[0032]下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
[0033]实验例1
[0034](一)实验材料及方法
[0035]1.实验材料
[0036]1.1主要仪器及生产公司
[0037]NanoFCM仪器：福流生物Flow NanoAnalyzer；Attune NxT流式细胞仪：中国赛默飞世尔科技公司；4℃和
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种膀胱癌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测circZFR的检测试剂。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述circZFR的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特异性引物对；所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ ID NO.2的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID NO.3的下游引物组成。4.如权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测对象为尿液外泌体。5.检测circZFR的检测试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述circZFR的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特异性引物对；所述靶向circZF...

【专利技术属性】
技术研发人员：解佳佳，陶涛，吴松，
申请(专利权)人：深圳市众循精准医学研究院，
类型：发明
国别省市：