本发明专利技术提供了一种构建醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱的方法，其包括：制得醋五灵脂供试品溶液，并以原儿茶酸作为对照品，制得对照品溶液；对所述醋五灵脂供试品溶液和所述对照品溶液进行高效液相色谱检测；其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：在260 nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱。本发明专利技术还提供了根据上述方法构建的特征图谱及其用途。本发明专利技术通过高效液相色谱有效构建了特征图谱，为更全面、更准确地鉴定醋五灵脂或其提取物、实现其中各成分的分析与含量检测提供了高效的保障，其准确度好、精密度高、专属性强且稳定性好。专属性强且稳定性好。专属性强且稳定性好。
【技术实现步骤摘要】
醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱及其构建方法和用途
[0001]本专利技术属于中药分析和检测
具体地，本专利技术涉及醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱及其构建方法和用途。
技术介绍
[0002]五灵脂为鼯鼠科动物复齿鼯鼠Trogopterus xanthipes Milne
‑
Edwards的干燥粪便。始载于宋《开宝本草》：“五灵脂出北地，寒号虫粪也”，性温，味咸、甘，归肝经。
[0003]五灵脂作为临床上常用的粪便类中药，其活血化瘀，通经止痛疗效显著，有妇科要药之称。然而由于其来源的特殊性，化学成分的复杂性，研究相对较薄弱，文献收载数目较少。查阅文献，五灵脂主要成分有酚酸类、黄酮类、三萜类和核苷类等，临床主要用于治疗痛经、血瘀经闭、胃溃疡、蛇虫咬伤等疾病，现代药理实验表明五灵脂还具有抗炎、清除自由基、抗动脉粥样硬化、治疗慢性心力衰竭等作用。
[0004]醋五灵脂是五灵脂经醋制加工而来的炮制加工品，研究文献资料较少，现有的质量标准《中国药典》1997年版和1990年版仅记载其来源和性状，《北京市中药饮片炮制规范》2008年版收载其功能与主治为：活血，散瘀，止痛。用于胸胁、脘腹疼痛，痛经，经闭，产后血瘀疼痛，跌扑损伤，蛇虫咬伤。李娅琦等对五灵脂的抗凝血活性进行探究，选择五灵脂凝血酶时间测定实验进行抗凝血谱效关系研究，结果表明，包括原儿茶酸在内的13个色谱峰(其余未识别)，与凝血酶时间测定实验药效的关联度较大。除此之外，还有文献报道五灵脂中含有穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮，有抑制血栓形成及抗病毒作用，由于穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮极性较小，不易溶于水，经实验室预实验测定，其在配方颗粒中含量较小，为10ppm级，无质控意义，原儿茶酸具有抑制血小板聚集及抑菌的活性，是五灵脂中主要活性成分之一，故选择原儿茶酸作为含量测定指标成分。
技术实现思路
[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种醋五灵脂高效液相特征图谱、其构建方法。该方法以原儿茶酸为特征成分，通过高效液相色谱有效地构建了特征图谱，为更全面、更准确地实现醋五灵脂中各成分的分析与含量检测提供了高效的保障。
[0006]本专利技术的上述第一目的是通过以下技术方案实现的：
[0007]一方面，本专利技术提供了一种构建醋五灵脂高效液相特征图谱的方法，其包括：
[0008](a)制得醋五灵脂供试品溶液，并以原儿茶酸作为对照品，制得对照品溶液；
[0009](b)对所述醋五灵脂供试品溶液和所述对照品溶液进行高效液相色谱检测；
[0010]其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
[0011]在260nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱。
[0012]优选地，在步骤(a)中，制得醋五灵脂供试品溶液的方法包括：使醋五灵脂供试品
溶解于甲醇水溶液中并定量，经超声提取、过滤后制得。
[0013]优选地，所述醋五灵脂供试品溶液的浓度为10mg/mL～50mg/mL。在本专利技术中，所述醋五灵脂供试品溶液的浓度可以选择例如10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值。
[0014]所述醋五灵脂供试品可以为醋五灵脂或醋五灵脂配方颗粒。
[0015]优选地，所述对照品供试品溶液的浓度为5μg/mL～500mg/mL。
[0016]优选地，所述超声提取在390W～520W的功率和30kHz～50kHz的频率下进行20min～40min。在本专利技术中，所述超声提取例如可以在390W、400W、410W、420W、430W、440W、450W、470W、490W、500W、510W、或520W的功率下，并在30kHz、35kHz、40kHz、45kHz、或50kHz的频率下进行20min、25min、30min、35min、或40min。
[0017]优选地，所述甲醇水溶液的体积浓度为0％～100％。在本专利技术中，所述甲醇水溶液的体积浓度可以选择例如0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、100％以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值。在本专利技术中，当所述甲醇水溶液的体积浓度选择“0％”时，表示在这种情况下将醋五灵脂供试品溶解于水中，以制得醋五灵脂供试品溶液。
[0018]优选地，作为流动相B，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.08％～0.15％，更优选为0.1％。
[0019]优选地，以所述流动相A和所述流动相B的体积分数计，所述梯度洗脱的程序包括：
[0020]0min～9min，以8％流动相A
‑
92％流动相B洗脱；
[0021]9min～11min，以8％～13％流动相A
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92％～87％流动相B洗脱；
[0022]11min～20min，以13％～15％流动相A
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87％～85％流动相B洗脱；
[0023]20min～25min，以15％～19％流动相A
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85％～81％流动相B洗脱；
[0024]25min～35min，以19％～23％流动相A
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81％～77％流动相B洗脱；
[0025]35min～45min，以23％～35％流动相A
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77％～65％流动相B洗脱。
[0026]其中，在0min～9min的洗脱时段内，所述流动相A的体积分数可以选择0％、2％、4％、6％、8％、10％、13％、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值；所述流动相B的体积分数则可以根据流动相A的体积分数对应地选择。
[0027]在9min～11min的洗脱时段内，所述流动相A的体积分数可以选择8％、10％、12％、15％、以及以上点值中任意两个组成的范围内的任意点值；所述流动相B的体积分数则可以根据流动相A的体积分数对应地选择。
[0028]优选地，所述流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min，更优选为1.0mL/min。
[0029]优选地，所述色谱柱的柱温为25℃～35℃，更优选地为30℃。
[0030]优选地，所述醋五灵脂供试品溶液和所述对照品溶液的进样量为8μL～12μL，更优选地为10μL。
[0031]在本专利技术的构建醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱的方法中，高效液相色谱的系统适用性实验应当使得满足：按原儿茶酸峰计算，理论板数不低于3000。
[0032]另一方面，本专利技术提供了根据上述构建醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱的方法获得的醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱。
[0033]优选地，所述高效液相特征图谱包含5个特征峰，相对于特征峰本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种构建醋五灵脂或其提取物的高效液相特征图谱的方法，其包括：（a）制得醋五灵脂供试品溶液，并以原儿茶酸作为对照品，制得对照品溶液；（b）对所述醋五灵脂供试品溶液和所述对照品溶液进行高效液相色谱检测；其中，所述高效液相色谱检测的条件包括：在260 nm的波长下，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱的方式洗脱。2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（a）中，制得所述醋五灵脂供试品溶液的方法包括：使醋五灵脂供试品溶解于甲醇水溶液中并定量，经超声提取、过滤后获得；优选地，所述醋五灵脂供试品溶液的浓度为10 mg/mL~50 mg/mL；更优选地为20 mg/mL；优选地，所述原儿茶酸对照品溶液的浓度为5 μg/mL~500 μg/mL；更优选地为40 μg/mL。3.优选地，所述超声提取在390 W~520 W的功率和30 kHz~50 kHz的频率下进行20 min~40 min；更优选地为30 min。4.优选地，所述甲醇水溶液的体积浓度为0%~100%；更优选地为100%。5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.08%~0.15%，优选地为0.1%。6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，以所述流动相A和所述流动相B的体积分数计，所述梯度洗脱的程序包括：0 min~9 min，以8%流动相A
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92%流动相B洗脱；9 min~11 min，以8%~13%流动相A
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92%~87%流动相B洗脱；11 min~20 min，以13%~15%流动相A
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87%~85%流动相B洗脱；20 min~25 min，以15%~19%流动相A
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85%~81%流动相B洗脱；25 min~35 min，以19%~23%流动相A
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【专利技术属性】
技术研发人员：王彦帅，丁浩强，刘岱琳，张静泽，张志强，周永康，高扬，
申请(专利权)人：北京康仁堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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