一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂及其制备方法和应用，涉及畜牧养殖病原体检测技术领域。该试剂的原料按体积质量百分比含量计包括：0.3

【技术实现步骤摘要】
一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及畜牧养殖病原体检测
，具体而言，涉及一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]荧光定量PCR检测技术作为综合常规PCR、荧光标记、激光照射和数码显象技术为一体的检测手段，拥有特异性强、灵敏度高、假阳性低等优势，因此广泛应用于畜牧养殖病原体检测，特别是深受非洲猪瘟困扰的养猪产业。
[0003]然而在猪群生产过程中却存在环境样本核酸提取效果差导致检出率低或假阳性的问题。具体表现在猪场环境样本成分复杂，至少含有且不局限于饲料、粪便、粉尘、泥垢、针织物、消毒剂等杂质，其对核酸提取纯化的质量存在较大抑制作用，从而影响下游荧光定量PCR检测结果的准确性，不利于猪群各类疾病的及时诊断，对养猪产业的健康发展危害巨大。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂及其制备方法和应用，其能够有效清除猪场环境样本中的杂蛋白和其他杂质，显著提升核酸提取纯度的质量，对于杂质的高效沉降分离及核酸的高纯度分离纯化发挥重要作用，从而满足荧光定量PCR实验对核酸纯度的要求，有效提升检测结果的准确性，解决杂质影响检测结果的问题，保障养猪产业的健康发展。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其原料按体积质量百分比含量计包括：0.3/>‑
0.8％的乳化剂T
‑
20、0.1
‑
0.2％的月桂醇硫酸钠、0.7
‑
1％的氯化钠、1
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2％的乙二胺四乙酸、0.5
‑
1％的缓冲液和余量的水。
[0008]在可选的实施方式中，其原料按体积质量百分比含量计包括：0.4
‑
0.6％的乳化剂T
‑
20、0.12
‑
0.17％的月桂醇硫酸钠、0.8
‑
0.9％的氯化钠、1.5
‑
1.7％的乙二胺四乙酸、0.6
‑
0.8％的缓冲液和余量的水。
[0009]在可选的实施方式中，所述缓冲液包括Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸
‑
醋酸铵缓冲液。
[0010]在可选的实施方式中，所述猪场环境样本核酸提取前处理试剂还包括pH调节剂，所述pH调节剂为HCl。
[0011]在可选的实施方式中，所述猪场环境样本核酸提取前处理试剂的pH为7.5
‑
9.0。
[0012]第二方面，本专利技术提供一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂的制备方法，其包括将如前述实施方式任一项所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂的原料混合均匀。
[0013]第三方面，本专利技术提供如前述实施方式任一项所述的猪场环境样本核酸提取前处
理试剂在制备猪场环境样本核酸提取前处理试剂、核酸分离纯化试剂或在核酸提取中作为前处理试剂中的应用。
[0014]第四方面，本专利技术提供一种猪场环境样本中核酸的提取方法，将猪场环境样本置于如前述实施方式任一项所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂中进行重悬混匀，接着进行全核酸提取。
[0015]第五方面，本专利技术提供一种猪场环境样本核酸提取检测试剂盒，其包括如前述实施方式任一项所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂或者制备如前述实施方式任一项所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂的原料。
[0016]在可选的实施方式中，所述猪场环境样本核酸提取检测试剂盒还包括病毒核酸提取试剂和PCR反应试剂。
[0017]本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本申请提供的猪场环境样本核酸提取前处理试剂通过将乳化剂T
‑
20、月桂醇硫酸钠、氯化钠和乙二胺四乙酸进行组合，同时配合缓冲液和pH调节剂，调配合适的组分用量，可以有效清除猪场环境样本中的杂蛋白和其他杂质，显著提升核酸提取纯度的质量，对于杂质的高效沉降分离及核酸的高纯度分离纯化发挥重要作用，从而满足荧光定量PCR实验对核酸纯度的要求，有效提升检测结果的准确性，解决杂质影响检测结果的问题，保障养猪产业的健康发展。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0020]图1为猪场含有粪便的环境样本经不同试剂处理后荧光定量PCR检测的Ct值；
[0021]图2为猪场含有泥垢环境样本经不同试剂处理后荧光定量PCR检测的Ct值；
[0022]图3为猪场含有饲料的环境样本经不同试剂处理后荧光定量PCR检测的Ct值。
具体实施方式
[0023]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0024]本专利技术提供一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其原料按体积质量百分比含量计包括：0.3
‑
0.8％的乳化剂T
‑
20、0.1
‑
0.2％的月桂醇硫酸钠、0.7
‑
1％的氯化钠、1
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2％的乙二胺四乙酸、0.5
‑
1％的缓冲液和余量的水。
[0025]由于猪场环境样本中成分复杂，含有各种饲料、粪便、粉尘、泥垢、针织物、消毒剂、毛发等。本申请提供的猪场环境样本核酸提取前处理试剂中，乳化剂T
‑
20能有效破坏膜蛋白的完整性，降解蛋白高级结构，有利于核酸与蛋白质的分离，从而达到提高核酸提取纯化质量的效果。
[0026]月桂醇硫酸钠是高效的阴离子表面活性去污剂，能迅速使蛋白质变性，让蛋白质充分裂解同时与核酸彻底解离，从而使核酸有效游离在试剂体系中。
[0027]氯化钠在120
‑
160mmol/L的浓度能对核酸起明显的盐析作用使之处于液体上层，同时能让固体杂质更好地沉降于底部，从而让核酸和杂质更好地分离。
[0028]乙二胺四乙酸一方面是二价金属螯合剂，其能抑制依赖二价金属的DNA酶活性，从而保护DNA完整结构防止降解，另一方面能够有助于细胞裂解、蛋白质洗脱，有利于核酸的纯化，同时乙二胺四乙酸还有一定的抗菌作用，有利于样本的保存。
[0029]缓冲液可以在水中高度溶解使各种酶(例如：DNA酶、RNA酶)和化学试剂维持惰性。缓冲液的种类有多种，包括但不限于Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸
‑
醋酸铵缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其特征在于，其原料按体积质量百分比含量计包括：0.3
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0.8％的乳化剂T
‑
20、0.1
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0.2％的月桂醇硫酸钠、0.7
‑
1％的氯化钠、1
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2％的乙二胺四乙酸、0.5
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1％的缓冲液和余量的水。2.根据权利要求1所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其特征在于，其原料按体积质量百分比含量计包括：0.4
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0.6％的乳化剂T
‑
20、0.12
‑
0.17％的月桂醇硫酸钠、0.8
‑
0.9％的氯化钠、1.5
‑
1.7％的乙二胺四乙酸、0.6
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0.8％的缓冲液和余量的水。3.根据权利要求1所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其特征在于，所述缓冲液包括Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸
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醋酸铵缓冲液。4.根据权利要求1所述的猪场环境样本核酸提取前处理试剂，其特征在于，所述猪场环境样本核酸提取前处理试剂还包括pH调节剂，所述p...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓红玉，张蓉，毛旭明，黄静，凌勇，丁能水，万文峰，施建军，吴有林，
申请(专利权)人：漳浦县赵木兰养殖有限公司金华市宏业畜牧养殖有限公司，
类型：发明
国别省市：