一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用技术

本发明专利技术涉及药物应用技术领域，具体涉及一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用。使用甲状旁腺激素(1

【技术实现步骤摘要】
一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用


[0001]本专利技术涉及药物应用
，尤其是涉及一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎(OA)是最常见的疾病，也是身体残疾的主要原因。由于人口老龄化和肥胖患病率的增加，OA的患病率正在上升。关节软骨由软骨细胞和细胞外基质成分组成，由于缺乏血管系统和神经元，它们的自我再生能力有限。目前，对OA患者还没有有效的治疗方法。
[0003]外泌体因其在骨关节炎治疗中的潜在价值而引起了人们极大的兴趣。骨髓间充质干细胞通过旁分泌机制在炎症反应中发挥重要作用，特别是外泌体的作用。来自骨髓间充质干细胞的外泌体(Exo
BMSC
)含有大量的活性物质，如DNA、RNA和蛋白质。与骨髓间充质干细胞治疗相比，Exo
BMSC
治疗显示出更多的优势，包括靶向递送、良好的组织穿透性、突出的长期循环性能、更好的归巢能力、稳定的化学性质，以及大量的组织修复和再生能力。
[0004]目前，骨髓间充质干细胞的外泌体的产生效率和作用效果成为本领域亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用，采用本专利技术的提取方法获得的骨髓间充质干细胞外泌体具有更强的抗炎作用，从而实现OA软骨修复作用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]第一目的，本专利技术提供了一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法，使用甲状旁腺激素(1
‑
34)预处理骨髓间充质干细胞，收集骨髓间充质干细胞外泌体。
[0008]本专利技术提供一种通过甲状旁腺激素(1
‑
34)作用于骨髓间充质干细胞然后提取外泌体的方法，外泌体提取的效率高，并且在该方法中通过甲状旁腺激素(1
‑
34)刺激骨髓间充质干细胞，使得骨髓间充质干细胞产生更强抗炎作用的外泌体，从而实现OA软骨修复作用。
[0009]相比较Exo
BMSC
，使用甲状旁腺激素(1
‑
34)刺激骨髓间充质干细胞获得的外泌体(Exo
PTH
)具有更佳抗炎作用，实现OA软骨修复的效果更佳。
[0010]作为本专利技术所述提取方法的优选实施方式，所述甲状旁腺激素(1
‑
34)的浓度为5
‑
20nM。
[0011]采用上述浓度的甲状旁腺激素(1
‑
34)刺激骨髓间充质干细胞获得的Exo
PTH
抗炎效果更佳，有助于OA软骨的修复。
[0012]作为本专利技术所述提取方法的优选实施方式，所述甲状旁腺激素(1
‑
34)的浓度为
10nM。
[0013]当甲状旁腺激素(1
‑
34)的浓度为10nM时，刺激骨髓间充质干细胞获得的外泌体(Exo
PTH
)具有最佳的抗炎作用，最佳地实现OA软骨修复的效果。
[0014]作为本专利技术所述提取方法的优选实施方式，提取方法的具体步骤包括：
[0015](a)将骨髓间充质干细胞接种于培养基中进行培养，然后使用浓度为10nM的甲状旁腺激素(1
‑
34)预处理骨髓间充质干细胞，收集含有预处理后的骨髓间充质干细胞的培养基；
[0016](b)将上述步骤(a)收集的培养基进行第一次、第二次离心，获取上清液，然后将上清液进行第三次及第四次离心，获得骨髓间充质干细胞外泌体。
[0017]作为本专利技术所述提取方法的优选实施方式，所述培养基包括L
‑
DMEM完全培养液。
[0018]作为本专利技术所述提取方法的优选实施方式，所述第一次离心的速度为300
‑
500g，离心时间为5
‑
10min；所述第二次离心的速度为2000
‑
3000g，离心时间为5
‑
10min；所述第三次离心的速度为10000g，离心时间为30
‑
40min；所述第四次离心的速度为100000
‑
120000g，离心时间为60
‑
90min。
[0019]更优选地，所述第一次离心的速度为300g，离心时间为10min；所述第二次离心的速度为2000g，离心时间为10min；所述第三次离心的速度为10000g，离心时间为40min；所述第四次离心的速度为120000g，离心时间为70min。
[0020]本专利技术提取方法中采用第一次和第二次离心是为了去除上清液中的细胞碎片；采用第三次和第四次离心是为了去除非外泌体囊泡和任何可能的凋亡小体。
[0021]优选地，第一次离心至第四次离心均在4℃下进行。
[0022]第二目的，本专利技术提供了上述提取方法获得的骨髓间充质干细胞外泌体。
[0023]第三目的，本专利技术还提供了上述PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体在制备治疗骨关节炎修复药物中的应用。
[0024]本专利技术专利技术人经过大量研究及试验发现，Exo
PTH
可以增强IL
‑
1β诱导的OA软骨细胞的增殖、迁移和软骨基质形成。此外，Exo
PTH
在OA治疗中的潜在机制与抑制促炎因子(IL
‑
2、TNF
‑
α和IL
‑
6)的产生有关，对骨关节炎修复具有重要作用。采用本专利技术的提取方法获得Exo
PTH
在抗炎作用上好于Exo
BMSC
，进而治疗OA的效果更好。
[0025]更优选地，骨髓间充质干细胞外泌体干预由原代软骨细胞构成的OA模型，干预时间为24、48或72小时。
[0026]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述骨髓间充质干细胞外泌体的浓度为5
‑
100μg/mL，更优选地，所述骨髓间充质干细胞外泌体的浓度为10μg/mL。采用上述浓度的骨髓间充质干细胞外泌体可以更好的修复OA。
[0027]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，骨髓间充质干细胞外泌体通过注射至骨关节中。
[0028]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0029]本专利技术提供了一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法及其应用，通过甲状旁腺激素(1
‑
34)作用于骨髓间充质干细胞，使得骨髓间充质干细胞产生更强抗炎作用的外泌体(Exo
PTH
)，从而实现OA软骨修复作用；相比较Exo
BMSC
，使用甲状旁腺激素(1
‑
34)刺激骨髓间充质干细胞获得的外泌体具有更佳抗炎作用，实现OA软骨修复的效果更佳。
附图说明
[0030]图1为实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PTH刺激的骨髓间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，使用甲状旁腺激素(1
‑
34)预处理骨髓间充质干细胞，收集骨髓间充质干细胞外泌体。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述甲状旁腺激素(1
‑
34)的浓度为5
‑
20nM。3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述甲状旁腺激素(1
‑
34)的浓度为10nM。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，提取方法的具体步骤包括：(a)将骨髓间充质干细胞接种于培养基中进行培养，然后使用浓度为10nM的甲状旁腺激素(1
‑
34)预处理骨髓间充质干细胞，收集含有预处理后的骨髓间充质干细胞的培养基；(b)将上述步骤(a)收集的培养基进行第一次、第二次离心，获取上清液，然后将上清液进行第三次及第四次离心，获得骨髓间充质干细胞外泌体。5.如权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述培养基包括L
‑
DMEM...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓宇斌，邵李涛，
申请(专利权)人：中山大学附属第七医院深圳，
类型：发明
国别省市：