一种甘草类外泌体及其在制备黑色素瘤治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供甘草类外泌体及其在制备黑色素瘤治疗药物中的应用，所述甘草类外泌体的制备方法包括以下步骤：将甘草清洗、切碎，制成匀浆并过滤，梯度离心分离，重悬，滤膜过膜挤压，即得。所述甘草类外泌体富含Gma‑miR6300、sly‑miR9479‑39、nta‑miR6164a、bra‑miR408‑5p、peu‑miR2916等miRNA，所述甘草来源的外泌体可抑制黑色素瘤细胞增殖并促进其凋亡，进一步以甘草类外泌体为载体包裹STING信号激动剂并偶联抗PDL1抗体，显示甘草类外泌体可协同DMXAA和/或PDL1抗体促进DC细胞成熟并增强T细胞对肿瘤的杀伤效应，有效改善生存情况延缓黑色素肿瘤进展。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药，更具体地，涉及一种甘草类外泌体及其在制备黑色素瘤治疗药物中的应用。

技术介绍

1、黑色素瘤通常是指恶性黑色素瘤，是最致命的皮肤癌，源于皮肤、黏膜、葡萄膜、直肠等部位的黑色素细胞恶性转化与增殖，由于黑色素细胞广泛分布，无论解剖位置或器官和组织的类型如何，黑色素瘤都无处不在，具有高侵袭性、易转移、预后差等特点。恶性黑色素瘤的全身治疗始于细胞毒性化疗。1976年，第一个细胞毒性化疗药物达卡巴嗪(dtic)在美国被批准用于治疗转移性恶性黑色素瘤。一方面达卡巴嗪存在着较大副作用如骨髓抑制，恶心呕吐，肝毒性等，另一方面控制疾病的反应率低于7.5％，现已很少单独使用。

2、免疫检查点抑制剂的发现彻底改变了转移性和局部黑色素瘤的治疗方案。pd-1与肿瘤细胞和抗原呈递细胞上的配体pd-l1以及活化单核细胞和树突状细胞上的pd-l2相互作用，抑制t细胞活性，从而调节免疫耐受。生理学上，pd-1/pd-l1通路需要作为调节检查点，以减缓炎症程度。多种肿瘤，尤其是黑色素瘤，过度表达pd-l1以产生免疫抑制性肿瘤免疫微环境。用抗体阻断pd-1或p本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种甘草类外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘草清洗、切碎，制成匀浆并过滤，梯度离心分离，重悬，0.20～0.25μm滤膜过膜挤压，即得；所述梯度离心为依次按照3500～4500rpm离心18～22min，9500～15000rpm离心35～45min，35000～45000g离心55～65min，取其上清液100000～200000g离心80～100min，弃上清液。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制成匀浆为甘草与水以质量比1:8～12混匀进行破碎。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述梯度离心为依次按照4000rp...

【技术特征摘要】

1.一种甘草类外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘草清洗、切碎，制成匀浆并过滤，梯度离心分离，重悬，0.20～0.25μm滤膜过膜挤压，即得；所述梯度离心为依次按照3500～4500rpm离心18～22min，9500～15000rpm离心35～45min，35000～45000g离心55～65min，取其上清液100000～200000g离心80～100min，弃上清液。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制成匀浆为甘草与水以质量比1:8～12混匀进行破碎。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述梯度离心为依次按照4000rpm～4500rpm离心20～22min，10000～15000rpm离心40～45min，40000～45000g离心60～65min，取其上清液150000～200000g离心90～100...

【专利技术属性】
技术研发人员：周本杰，徐占雪，乡世健，杨欣蕊，陈红波，程芳，
申请(专利权)人：中山大学附属第七医院深圳，
类型：发明
国别省市：