一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法技术

本发明专利技术提供了一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法，属于干细胞技术领域。本发明专利技术所提供的方法首先配置含有Dermaseptin

【技术实现步骤摘要】
一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法


[0001]本专利技术属于干细胞
，尤其涉及一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法。

技术介绍

[0002]骨损伤是常见的一种健康问题，过去骨损伤主要的治疗方式是自体骨移植和异体骨移植。但是自体骨移植会对供股部位造成一定程度的损伤，并且容易出现并发症，而异体移植则可能导致潜在感染，受体体内排斥反应和术后疼痛等缺点。因此，目前，临床上开始使用骨组织工程的方式来体外构建新生替代股，从而有效的修改和重建损伤骨。骨髓间充质干细胞是骨组织工程常用的细胞，但是骨髓间充质干细胞存在数量少的缺点。
[0003]人脐带间充质干细胞是从新生儿的脐带组织中提取出的多能干细胞，来源更加广泛，而且其免疫原性低，可以减少免疫排斥反应，适合将其作为新的组织工程细胞，因此通过有效的方法来提高脐带间充质干细胞的增殖将有助于脐带间充质干细胞在组织工程中的更好应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种可以有效提供脐带间充质干细胞增殖的方法，从而在组织工程中更好的发挥脐带间充质干细胞的作用。
[0005]为了实现上述的目的，本专利技术提供了如下的技术方案：一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法，所述方法包括如下步骤：（1）配置含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的DMEM/F12培养基；（2）将脐带间充质干细胞接种于细胞培养皿中，加入含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的脐带间充质干细胞培养基；（3）将细胞培养皿置于细胞培养箱中，设置培养条件为37℃，5% CO2进行培养。
[0006]优选地，所述含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的DMEM/F12培养基中Dermaseptin
‑
TA1多肽的浓度大于100μg/ml。
[0007]优选地，所述Dermaseptin
‑
TA1多肽的氨基酸序列为：ALWKDVLKKIGTVALHAGKAALGAVADTISQ。
[0008]Dermaseptin
‑
TA1多肽在制备脐带间充质干细胞增殖促进药物上的用途，所述Dermaseptin
‑
TA1多肽促进脐带间充质干细胞的增殖，并且促进脐带间充质干细胞增殖相关蛋白Cyclin
‑
D1和CDK1的蛋白表达。
[0009]优选地，所述药物由Dermaseptin
‑
TA1多肽和药学上可接受的载体组成，所述药学上可接受的载体为载剂，稀释剂，赋性剂。
[0010]优选地，所述药物中所述Dermaseptin
‑
TA1多肽的浓度大于100μg/ml。
[0011]Dermaseptin
‑
TA1多肽在制备脐带间充质干细胞衰老抑制药物上的用途，所述Dermaseptin
‑
TA1多肽抑制脐带间充质干细胞的衰老。并且抑制脐带间充质干细胞衰老相关蛋白P16和P21的蛋白表达。
[0012]优选地，所述药物由Dermaseptin
‑
TA1多肽和药学上可接受的载体组成。
[0013]优选地，所述药物中所述Dermaseptin
‑
TA1多肽的浓度大于100μg/ml。
[0014]本专利技术的有益效果是：在本专利技术中，本专利技术发现了使用高于100μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽处理脐带间充质干细胞的时候，可以有效的提高脐带间充质干细胞的增殖能力，并促进脐带间充质干细胞中细胞增殖相关蛋白的表达；同时，其可以降低脐带间充质干细胞的衰老，并降低脐带间充质干细胞中细胞衰老相关蛋白的影响，因此我们根据上述结果去设计了提高脐带间充质干细胞增殖的方法。
附图说明
[0015]图1不同浓度Dermaseptin
‑
TA1多肽对于脐带间充质干细胞增殖的调控的结果；图2 Dermaseptin
‑
TA1多肽调控脐带间充质干细胞的细胞周期蛋白表达的结果；图3 Dermaseptin
‑
TA1多肽调控脐带间充质干细胞衰老的结果；图4 Dermaseptin
‑
TA1多肽调控脐带间充质干细胞的衰老相关蛋白的结果；图5 Dermaseptin
‑
TA1多肽调控脐带间充质干细胞成骨相关蛋白RUNX2和成脂相关蛋白C/EBPα的结果。
具体实施方式
[0016]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0017]实施例1检测不同浓度Dermaseptin
‑
TA1多肽对于脐带间充质干细胞增殖的调控（1）使用DMEM/F12培养基配置含有0μg/ml，25μg/ml，50μg/ml，100μg/ml和200μg/ml的Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；（2）将本公司培养的P3代人脐带间充质干细胞接种于96孔板中，每孔5000个细胞，100μl培养基；（3）培养过夜后，去除培养基，按照如下分组处理细胞：A组：添加含有0μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；B组：添加含有25μg/ml Der maseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；C组：添加含有50μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；D组：添加含有100μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；E组：添加含有200μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基；（4）添加完成后，将细胞置于细胞培养箱中培养72h，培养结束后，每孔加入10μl CCK
‑
8试剂，孵育4h后，使用酶标仪检测各组细胞的450nm吸光度。
[0018]实施例2检测Dermaseptin
‑
TA1多肽是否可以调控脐带间充质干细胞的细胞周期蛋白（1）将P3代脐带间充质干细胞接种于6孔板中，待细胞密度达到80
‑
90%时，对照组培养基更换为含有0μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基，实验组培养基更换为含有200μg/ml Dermaseptin
‑
TA1多肽的细胞培养基每组设置有3个重复，添加完成后将细胞置于细胞培养箱中进行培养；
（2）培养48h后，离心收集细胞，使用PBS清洗细胞后，加入100μl蛋白裂解液，超声破碎细胞2min；（3）置于离心机中，4℃，12000rpm离心10min，吸取上清，即得到总细胞裂解液；（4）使用BCA定量法测定蛋白浓度，加入适量的蛋白loading buffer，沸水浴煮样10min使蛋白变性，得到蛋白样品；（5）按照3.3ml去离子水，4.0ml 30本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高脐带间充质干细胞增殖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）配置含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的DMEM/F12培养基，添加10%FBS血清；（2）将脐带间充质干细胞接种于细胞培养皿中，加入含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的脐带间充质干细胞培养基；（3）将细胞培养皿置于细胞培养箱中，设置培养条件为37℃，5% CO2进行培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有Dermaseptin
‑
TA1多肽的DMEM/F12培养基中Dermaseptin
‑
TA1多肽的浓度大于100μg/ml。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Dermaseptin
‑
TA1多肽的氨基酸序列为：ALWKDVLKKIGTVALHAGKAALGAVADTISQ。4.Dermaseptin
‑
TA1多肽在制备脐带间充质干细胞增殖促进药物上的用途，其特征在于，所述Dermaseptin
‑
TA1多肽促进脐带间...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈义，刘嫣然，孙明辉，滕藤，
申请(专利权)人：山东卡森细胞治疗工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：