一种表达量提高的α-淀粉酶突变体Q441N/N442H及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，具体涉及一种表达量提高的α

【技术实现步骤摘要】
一种表达量提高的
α
‑
淀粉酶突变体Q441N/N442H及其编码基因和应用


[0001]本专利技术属于农业生物
，具体涉及一种表达量提高的α
‑
淀粉酶突变体Q441N/N442H及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]淀粉工业是最大的水解酶市场之一。淀粉作为一种可再生资源广泛存在于自然界的植物中，是生产果葡糖浆、麦芽糖、生物乙醇及酿酒等多种工业的主要原料。淀粉可分为直链淀粉和支链淀粉，淀粉酶是作用于淀粉内部并水解其α
‑
1,4糖苷键的一类工业酶。淀粉酶约占酶市场的25％左右，涵盖了许多工业过程，如制糖、纺织、洗涤剂、造纸、酿造、蒸馏、制药应用及饲料添加剂等。因此，合理开发利用α
‑
淀粉酶对淀粉酶工业至关重要。
[0003]在各种α
‑
淀粉酶中，耐热α
‑
淀粉酶因其具有高热稳定性和更长的保质期而被广泛开发用于全球淀粉工业。特别是，这些酶被广泛用于液化过程中，将淀粉转化为葡萄糖或果糖糖浆。而在淀粉加工过程中，首先要将高浓度的淀粉高温处理后糊化，糊化后的淀粉是一种粘度非常大的固体状态，此时必须迅速液化，否则粘度会急剧上升，故耐热α
‑
淀粉酶主要用于淀粉的高温喷射式液化的淀粉加工生产工艺方面。目前来源于嗜热古菌和芽孢杆菌的耐热的α
‑
淀粉酶已经能够满足工业生产需求，利用蛋白质工程的手段对α
‑
淀粉酶进行分子改良以提高其表达量是降低α/>‑
淀粉酶生产成本的有效途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种以来源于地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的α
‑
淀粉酶作为母本经点突变获得的突变体。
[0005]本专利技术的再一目的是提供编码上述突变体的基因。
[0006]本专利技术的再一目的是提供包含上述突变体基因的重组载体。
[0007]本专利技术的再一目的是提供包含上述突变体基因的重组菌株。
[0008]根据本专利技术的具体实施方式，对氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型α
‑
淀粉酶进行定点突变。
[0009]SEQ ID NO:1
[0010]VNGTLMQYFEWYTPNDGQHWKRLQNDAEHLSDIGITAVWIPPAYKAISQADVGYGAYDLYDLGEFHQKGTVRTKYGTKGELQSAIKSLHSRDINVYGDVVINHKAGADATEDVTAVEVDPADRNRVISGEHLIKAWTHFHFPGRGSTYSDFKWYWYHFDGTDWDESRKLNRIYKFQGKTWDWEVSNEFGNYDYLMYADFDYDHPDVVAEIKRWGTWYANELQLDGFRLDAVKHIKFSFLRDWVNHVREKTGKEMFTVAEYWSNDLGALENYLNKTNFNHSVFDVPLHYQFHAASTQGGGYDMRKLLNGTVVSKHPLKSVTFVDNHDTQPGQSLESTVQTWFKPLAYAFILTRESGYPQVFYGDMYGTKGDSQREIPALKHKIEPILKARKQYAYGAQHDYFDHHDIVGWTREGDSSVANSGLAALITDGPGGAKRMYVGRQNAGETWHDITGNRSEPVVINSEGWGEFHVNGGSVSIYVQRKTTVS。
[0011]根据本专利技术的具体实施方式，将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型α
‑
淀粉
酶进行441、442位点的突变，分别由谷氨酰胺、天冬酰胺突变为天冬酰胺、组氨酸，从而获得α
‑
淀粉酶突变体。
[0012]根据本专利技术的具有在大肠杆菌中高表达量的α
‑
淀粉酶突变体具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，由486个氨基酸组成。
[0013]SEQ ID NO.2：
[0014]VNGTLMQYFEWYTPNDGQHWKRLQNDAEHLSDIGITAVWIPPAYKAISQADVGYGAYDLYDLGEFHQKGTVRTKYGTKGELQSAIKSLHSRDINVYGDVVINHKAGADATEDVTAVEVDPADRNRVISGEHLIKAWTHFHFPGRGSTYSDFKWYWYHFDGTDWDESRKLNRIYKFQGKTWDWEVSNEFGNYDYLMYADFDYDHPDVVAEIKRWGTWYANELQLDGFRLDAVKHIKFSFLRDWVNHVREKTGKEMFTVAEYWSNDLGALENYLNKTNFNHSVFDVPLHYQFHAASTQGGGYDMRKLLNGTVVSKHPLKSVTFVDNHDTQPGQSLESTVQTWFKPLAYAFILTRESGYPQVFYGDMYGTKGDSQREIPALKHKIEPILKARKQYAYGAQHDYFDHHDIVGWTREGDSSVANSGLAALITDGPGGAKRMYVGRNHAGETWHDITGNRSEPVVINSEGWGEFHVNGGSVSIYVQRKTTVS。
[0015]根据本专利技术的具体实施方式，还提供了编码上述具有高表达量的α
‑
淀粉酶突变体的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，共为1458bp。
[0016]SEQ ID NO.3：
[0017]GTAAATGGCACGCTCATGCAGTATTTTGAATGGTATACTCCGAACGACGGCCAGCATTGGAAACGGTTGCAGAATGATGCGGAACATTTGTCGGATATCGGTATTACGGCCGTCTGGATTCCCCCGGCTTATAAGGCGATCAGCCAGGCTGATGTGGGCTACGGTGCGTACGACCTTTATGATTTGGGGGAGTTTCATCAAAAAGGGACAGTTCGGACAAAGTACGGCACGAAAGGAGAGCTGCAATCTGCTATCAAAAGTCTTCATTCCCGGGACATTAACGTTTACGGGGATGTCGTCATCAACCACAAAGCCGGCGCAGATGCGACCGAAGATGTAACAGCGGTTGAAGTCGATCCCGCAGACCGCAACCGCGTAATTTCGGGAGAACACCTAATTAAAGCCTGGACCCATTTTCATTTTCCGGGGCGCGGGAGCACATACAGCGATTTTAAATGGTATTGGTACCATTTTGACGGAACGGATTGGGACGAGTCCCGAAAGTTGAACCGCATCTATAAGTTTCAAGGCAAGACTTGGGATTGGGAAGTTTCGAATGAGTTCGGCAACTATGATTATTTAATGTATGCCGACTTTGATTATGATCATCCTGATGTCGTAGCAGAGATCAAGAGATGGGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达量提高的α
‑
淀粉酶突变体，其特征在于，所述α
‑
淀粉酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.一种α
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淀粉酶基因，其特征在于，编码权利要求1所述的表达量提高的α
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淀粉酶突变体。3.根据权利要求2所述的α
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淀粉酶基因，其特征在于，所述α
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淀粉酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。4.包含权利要求2所述的α
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淀粉酶基因的重组载体。5.包含权利要求2所述的α
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淀粉酶基因的重组菌株。6.一种制备高表达量的α
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆文，王兴吉，王克芬，刘文龙，张杰，
申请(专利权)人：山东隆科特酶制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：