α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及亲本α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】α
‑
淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
[0001]序列表的引用
[0002]本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
[0003]专利技术背景


[0004]本专利技术涉及α
‑
淀粉酶变体、编码所述变体的多核苷酸、产生所述变体的方法以及使用所述变体的方法。

技术介绍

[0005]α
‑
淀粉酶(α
‑
1,4
‑
葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1)是通过切割内部α
‑
1,4
‑
糖苷键来水解淀粉、糖原和其他相关多糖的一组酶。多年来它一直用于例如洗衣，其中熟知的是α
‑
淀粉酶在去除含淀粉或基于淀粉的污渍中具有有益的效果。然而，在其他商业应用中，所述酶已经变得重要，如在淀粉加工的初始阶段(液化)中、在纺织品退浆中、在酒精生产中和作为洗涤剂组合物中的清洁剂。
[0006]近年来，希望改良各种淀粉酶的特性。特别地，当提及家庭护理业时，主要关注降低洗衣温度以便降低能量消耗的目的。因此，已经为寻求改良的α
‑
淀粉酶变体做了很多努力。
[0007]无论如何，仍然需要具有改变的特性，并在各种工业应用中提供改良的性能的α
‑
淀粉酶变体。因此，本专利技术提供了与其亲本相比具有改良特性的这种进一步改良的α
‑
淀粉酶变体。
[0008]本专利技术的目的是提供具有α
‑
淀粉酶活性的多肽(α
‑
淀粉酶)，该多肽具有改良的洗涤性能，尤其是用于自动洗涤机和/或餐具洗涤机。

技术实现思路

[0009]本专利技术涉及亲本α
‑
淀粉酶的α
‑
淀粉酶变体，所述变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰：H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476和V481，使用SEQ ID NO:1进行编号，并且其中所述变体具有α
‑
淀粉酶活性，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、在至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至
少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体与所述亲本α
‑
淀粉酶相比具有改良的洗涤性能，并且其中所述亲本α
‑
淀粉酶具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0010]本专利技术还涉及编码所述变体的多核苷酸；包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及产生所述变体的方法。
[0011]本专利技术还涉及改良亲本α
‑
淀粉酶洗涤性能的方法。
具体实施方式
[0012]定义
[0013]根据此详细描述，以下定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“所述(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
[0014]本文提及“约”值或参数包括针对该值或参数本身的方面。例如，提及“约X”的描述包括方面“X”。
[0015]除非另外定义或由上下文明确指示，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0016]术语“α
‑
淀粉酶”与术语“具有α
‑
淀粉酶活性的多肽”是同义的。“α
‑
淀粉酶活性”是指α
‑
1,4
‑
葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性，其构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4
‑
糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。因此，如本文使用的术语“α
‑
淀粉酶”是指具有α
‑
淀粉酶活性的酶(酶类：EC3.2.1.1)，其水解大的、经α键连接的多糖(如淀粉和糖原)的α键，产生葡萄糖和麦芽糖。术语“α
‑
淀粉酶”和“淀粉酶”可以可互换地使用并且构成本文相同的含义和目的。出于本专利技术的目的，根据下文小标题方法中所述的程序测定α
‑
淀粉酶活性。在一方面，本专利技术的α
‑
淀粉酶具有SEQ ID NO:1
‑
17的一种或多种多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的α
‑
淀粉酶活性。
[0017]如本文使用的术语“氨基酸”是指标准二十种遗传编码的氨基酸及其相应的处于“d”型(与天然“l”型进行对比)的立体异构体、ω
‑
氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α
‑
双取代的氨基酸、N
‑
烷基氨基酸等)和化学衍生化的氨基酸。可以通过与功能性侧基团反应来实现一个或多个氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如，其中游离氨基基团已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苯氧基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲酰基基团的那些分子。游离羧基基团可被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基基团可被衍生化以形成O
‑
酰基或O
‑
烷基衍生物。作为化学衍生物还包括那些含有二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如：4
‑
羟脯氨酸可以取代脯氨酸；5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种亲本α
‑
淀粉酶多肽的α
‑
淀粉酶变体，所述变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰：1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476和481，使用SEQ ID NO:1进行编号，并且其中各修饰独立地为取代、插入或缺失，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
17的多肽具有至少59％，例如至少60％，例如至少65％，例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α
‑
淀粉酶活性。2.根据权利要求1所述的α
‑
淀粉酶变体，其中所述一个或多个位置处的修饰对应于以下：H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476和V481，使用SEQ ID NO:1进行编号，并且其中各修饰独立地为取代、插入或缺失，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
17的多肽具有至少59％，例如至少60％，例如至少65％，例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α
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淀粉酶活性，并且其中在与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的具有α
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淀粉酶活性的所述亲本多肽相比时，关于洗涤性能的测量，所述变体的改良因子(IF)为>1.0。3.根据权利要求1
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2所述的α
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淀粉酶变体，其中所述变体在对应于位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置处包含缺失，使用SEQ ID NO:1进行编号。4.根据前述权利要求中任一项所述的α
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淀粉酶变体，其中所述变体包含一个或多个以下修饰：H1*；H2*，G7A；I9M；Q11H；N16E；N16H；N16Y；N19D；N25K；N25M；N25T；A37V；W43Y；W48Y；N54Q；N54S；V56I；V56T；Y58F；G59A；A60S；A60T；L63F；T81A；E84Q；E86L；R90H；R90N；R90Q；Q98N；V104A；G109A；A111T；F113A；F113G；F113N；F113Q；F113T；F113Y；R116C；R116D；R116F；R116H；R116K；R116N；R116S；R116Y；Q118N；Q118T；Q125G；Q125S；R127A；R127F；R127H；R127L；R127N；R127T；E130D；E130F；E130I；E130K；E130L；E130N；E130S；E130T；E130V；S132A；S132D；S132F；S132L；S132M；S132P；S132T；G133D；T134C；T134E；T134N；T134P；T134R；T134S；T134W；T134Y；T134A；Y135H；Q136D；Q136E；Q136G；Q136N；Q136R；Q136S；A139T；G142H；N144H；G149A；R158C；R158H；R158K；R158Q；R158S；Y160D；Y160F；T160H；Y160N；D163H；W167*；Q169*；Q169E；Q169F；S170*；S170A；R171*；R171H；R171K；
R171L；R171Y；Q172*；Q172K；Q172N；Q172S；L173*；L173K；A174*；A174N；A174S；N175*；N175S；R176*；R176A；Y178F；R181*；R181A；R181C；R181E；R181G；R181H；R181K；R181N；R181Q；G182*；G182T；A186D；A186E；A186H；A186K；A186N；A186T；W187M；N195D；N195F；N195H；N195Q；N195Y；M202L；Y203L；A204V；V206L；D209N；H210K；H210N；E212D；T227K；T227N；L235I；V238A；M246I；M246L；M246T；M246V；Q256H；Q256N；K259G；K259H；V264A；V246I；V264T；A265G；E266V；Y267F；Y267H；Y267L；K269M；K269Q；K269R；N270G；N270P；L272I；G273V；A274K；A274S；L275A；L275I；L275V；E276N；W284R；W284Y；M286L；V291A；V291I；V291T；L293I；L293V；Y295F；Y298E；Y298N；Q299N；Q299Y；N302A；N302H；N302K；N302Q；S303G；S304G；S304Q；N306H；N306K；N306Q；N306R；N306Y；R310N；R310S；R310Q；N311K；N311R；N314Q；G315N；L317V；Q319H；R320K；R320Q；R320S；S323T；H323K；F328L；G337D；G337E；A339S；Q345N；Q345R；L357F；Q365A；Q365C；Q365E；Q365H；Q365K；Q365M；Q365S；P377K；P377T；D375H；D375N；D375Y；Q386L；K391A；Q395K；R400S；D406H；W408H；V410I；S431F；G435C；W439R；W439T；R444T；Q445S；R458K；N465G；Q466S；W469N；W469Y；F473I；F473P；F473S；G476K；和V481A，使用SEQ ID NO:1进行编号。5.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中所述变体选自下组，该组由以下组成：A60T、Y135H、Q169E、W48Y、A174*、M246L、R90Q、Y203L+V206L、Q169F+S170A、S132D+G133D、N195F+Q365C、N195F+Q365S、N195F+Q365M、R127L+Q365S、R127N+Q365S、R127L+Q365C、N195F+Q365K、I9M+N195F、R171H+Q365C、Y267F+Q365S、F328L+Q365S、R171L+Q365S、N195F+M286L、T134P+N195F、
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【专利技术属性】
技术研发人员：C安德森，S阿内赫德，LLH克里斯坦森，A法拉阿拉吉，M克林格，AG桑德斯特罗姆，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：