α-淀粉酶变体制造技术

本发明专利技术涉及α

【技术实现步骤摘要】
α
‑
淀粉酶变体
[0001]本申请是申请日2015年6月12日、申请号201580029878.0、专利技术名称“α
‑
淀粉酶变体”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]对序列表的引用
[0003]本申请包括计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。


[0004]本专利技术涉及α
‑
淀粉酶变体、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及使用这些变体的方法。

技术介绍

[0005]α
‑
淀粉酶(α
‑
1,4
‑
葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组酶，这些酶催化淀粉以及其他直链和支链1,4
‑
糖苷寡糖和多糖的水解。
[0006]α
‑
淀粉酶是用于洗涤剂组合物中的关键酶并且对于衣物洗涤或餐具洗涤期间去除淀粉污溃，其用途已经变得日益重要。
[0007]一些洗涤剂，特别是餐具洗涤洗涤剂，包含漂白系统、漂白活化剂、和漂白催化剂，而这些成分由于分子的氧化而均在极大的程度上破坏α
‑
淀粉酶的稳定性。因此，重要的是找到这样的α
‑
淀粉酶变体，它们在包含不同漂白剂的洗涤剂中都具有稳定性，具有高洗涤性能、污溃去除作用和/或活性。
[0008]本领域已知通过将位置197(使用来自地衣芽孢杆菌的淀粉酶来编号)的甲硫氨酸用例如亮氨酸来取代,从而针对漂白剂和漂白剂引起的氧化作用,将α
‑
淀粉酶稳定化。例如,这已经在WO 199418314中被披露。然而，这些现有技术中的氧化作用稳定的α
‑
淀粉酶具有缺点，就是α
‑
淀粉酶活性被减小。
[0009]因此，本专利技术的目的是提供α
‑
淀粉酶变体，所述变体在洗涤剂、特别是在餐具洗涤剂和其他包含漂白剂或漂白系统的洗涤剂中显示高水平的稳定性并且同时相比具有现有技术方案中的M197L取代的亲本α
‑
淀粉酶，具有改进的α
‑
淀粉酶活性。另外的目的是提供具有高性能，特别是高洗涤性能、特别是高餐具洗涤性能的α
‑
淀粉酶变体。
[0010]本专利技术提供了相比其亲本具有改进的稳定性并且相比其具有M197L的亲本(在本专利技术的亲本淀粉酶中对应于M202L)具有改进的活性的α
‑
淀粉酶变体。

技术实现思路

[0011]本专利技术涉及分离的α
‑
淀粉酶变体，该α
‑
淀粉酶变体包括a)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置的缺失，和b)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置Y198、Y200、L201、Y203和A204的一个或多个位置的取代，以及c)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置M202的位置的用任一其他氨基酸对甲硫氨酸的取代，其中该变体与SEQ ID NO:1或2的成熟多肽具有至少80％，例如至少90％，但是小于100％序列一致性，并且其中该变体具有α
‑
淀粉酶活性。
[0012]本专利技术还涉及包含这些变体的洗涤剂组合物，编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及产生这些变体的方法。
[0013]本专利技术还涉及这些变体在清洁过程中的用途。
[0014]本专利技术还涉及通过将以下项引入亲本α
‑
淀粉酶来改进α
‑
淀粉酶活性的方法:a)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置的缺失，和b)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置Y198、Y200、L201、Y203和A204的一个或多个位置的取代，以及c)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置M202的位置的用任一其他氨基酸对甲硫氨酸的取代，其中所得变体与SEQ ID NO:1或2的成熟多肽具有至少80％，例如至少90％，但是小于100％序列一致性。
[0015]定义
[0016]α
‑
淀粉酶：如在此使用的术语“α
‑
淀粉酶”是指能够催化淀粉降解的酶。通常，α
‑
淀粉酶(E.C.3.2.1.1，α
‑
D
‑
(1
‑
>4)
‑
葡聚糖葡聚糖水解酶)是裂解随机顺序的淀粉分子内的α
‑
D(1
‑
>4)O
‑
糖苷键的内作用酶。
[0017]如在此使用的术语“淀粉”是指由植物的复杂多糖糖类构成、由直链淀粉和支链淀粉组成且分子式为(C6H
10
O5)
X
(其中X是任何数字)的任何材料。具体而言，该术语是指基于植物的材料，例如大米、大麦、小麦、玉米、黑麦、马铃薯、等。
[0018]α
‑
淀粉酶活性：术语“α
‑
淀粉酶活性”意指α
‑
1,4
‑
葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性，这些酶构成一组催化淀粉和其他直链和支链1,4
‑
糖苷低聚糖和多糖水解的酶。出于本专利技术的目的，根据方法中所述的程序测定α
‑
淀粉酶活性。在一方面，本专利技术的变体具有SEQ ID NO:1或2的成熟多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的α
‑
淀粉酶活性。
[0019]SEQ ID NO:1：
[0020][0021]SEQ ID NO:2：
[0022][0023]等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
[0024]cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。
[0025]编码序列：术语“编码序列”意指直接指明变体的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定，该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种α
‑
淀粉酶变体，包括：a)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置R181、G182、D183和G184的两个或更多个位置的缺失，以及b)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置Y198、Y200、L201、Y203和A204的一个或多个位置的取代，以及c)在对应于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置M202的位置的甲硫氨酸的取代，其中该变体与SEQ ID NO:1或2的成熟多肽具有至少80％，例如至少90％，但是小于100％序列一致性，并且其中该变体具有α
‑
淀粉酶活性。2.如权利要求1所述的变体，其中取代b)选自Y198FLHQ、Y200FLSCWPHQRIMTNKVADEG、L201FSYCWPHQRIMTNKVADEG、Y203FLSCWPHQRIMTNKVADEG、A204IMTSRVG中的一个或多个。3.如权利要求1或2所述的变体，其中取代c)是M202FLSYCWPHQRITNKVADEG中的任一个。4.如前述权利要求中任一项所述的变体，其中取代b)和/或c)选自Y200H、Y200Q、M202L、Y203N、Y203L、A204S、Y200H+M202L、Y200Q+M202L、M202L+Y203N、M202L+Y203L、M202L+A204S、Y200H+M202L+Y203N、Y200H+M202L+Y203L、Y200H+M202L+A204S、Y200Q+M202L+Y203N、Y200Q+M202L+Y203L、Y200Q+M202L+A204S、Y200H+M202L+Y203N+A204S、Y200H+M202L+Y203L+A204S、Y200Q+M202L+Y203N+A204S、Y200Q+M202L+Y203L+A204S中的一个或多个。5.如前述权利要求中任一项所述的变体，该变体包括选自以下列表的改变，该列表由以下各项组成：R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L、R181
*
+G182
*
+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L、R181
*
+D183
*
+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L、G182
*
+G184
*
+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L、D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L、D183
*
+G184
*
+M202L+Y203N、D183
*
+G184
*
+M202L+Y203L、D183
*
+G184
*
+M202L+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N、D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203L、D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、
D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、D183
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、N195F+M202L+R181
*
+G182
*
、N195F+M202L+R181
*
+D183
*
、N195F+M202L+R181
*
+G184
*
、N195F+M202L+G182
*
+D183
*
、N195F+M202L+D183
*
+G184
*
、N195Y+M202L+R181
*
+G182
*
、N195Y+M202L+R181
*
+D183
*
、N195Y+M202L+R181
*
+G184
*
、N195Y+M202L+G182
*
+D183
*
、N195Y+M202L+D183
*
+G184
*
、R181
*
+G182
*
+N195F+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+N195F+Y200Q+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+N195F+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+N195F+Y200H+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+N195F+Y200Q+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+N195F+M202L+Y203L、G182
*
+D183
*
+N195F+Y200H+M202L+Y203N、G182
*
+D183
*
+N195F+Y200Q+M202L+A204S、G182
*
+D183
*
+N195F+M202L+Y203L、R181
*
+D184
*
+N195F+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+D184
*
+N195F+Y200Q+M202L+A204S、和R181
*
+D184
*
+N195F+M202L+Y203L。6.如前述权利要求中任一项所述的变体，其中这些改变由选自以下列表的改变组成，该列表由以下各项组成：R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L、R181
*
+G182
*
+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203N、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203L、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+G182
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L、R181
*
+D183
*
+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203N、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203L、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A204S、R181
*
+D183
*
+Y200Q+M202L+Y203L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L、G182
*
+G184
*
+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203L、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203N+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200H+M202L+Y203L+A204S、G182
*
+G184
*
+Y200Q+M202L+Y203N+A...

【专利技术属性】
技术研发人员：C安德森，SE拉森，A法拉赫阿拉吉，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：