漆酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及漆酶突变体及编码基因和应用。所述漆酶突变体是通过原始漆酶进行W141C、T198P、R341S、I389T、S476R突变获得的，具有序列表SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。突变后的漆酶最适反应pH为4.5，在pH3.0‑9.0的条件下处理24h后，相对酶活力仍然保持在90％以上，最适反应温度为85℃，在40‑80℃条件下保温15h，仍能保留95％以上的酶活。本发明专利技术提供的漆酶突变体，通过表达质粒pPICZαA在毕赤酵母X33中进行表达，在60m<supgt;3</supgt;发酵罐中的平均发酵酶活力为106673U/L，能进一步降低漆酶的生产成本，促进漆酶在降解真菌毒素方面的广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于生物工程，具体涉及漆酶突变体及编码基因和应用。

技术介绍

0、
技术介绍
：

1、漆酶是一种含四个铜离子的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶，以单体糖蛋白的形式存在。

2、目前已有大量的细菌漆酶基因被克隆出来，如大肠杆菌的cueo、枯草芽孢杆菌的cota、谷氨酸棒状杆菌的cgl1、丁香假单胞菌的copa等。同来源于真核生物的漆酶相比，细菌漆酶具有基因克隆方便、热稳定性好、酶活ph值广泛、无糖基化修饰等优点。

3、漆酶因品种不同最适ph值不同、适宜温度不同，也因底物不同而异，但都在酸性ph范围内，不适用于碱性ph范围内使用。漆酶活性部分的氨基酸含有酸性基团和碱性基团，在不同ph值时因解离状态不同，ph对酶活性影响主要有三种情况:酸或碱使酶的空间结构改变，引起酶的活性丧失；酸或碱影响酶的活性部分的解离状态，使得底物不能被分解；酸或碱破坏了底物的解离状态，使底物与酶无法结合。

4、国内对漆酶的应用研究，主要集中在纸浆漂白、染料废水脱色、提升食品品质、降解饲料中的黄曲霉毒素等方面。其工业应用，一般都是在高温及酸碱本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种漆酶突变体，其特征在于，所述漆酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述漆酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

4.包含权利要求2所述编码基因的重组载体或重组菌株。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，采用的表达质粒为pPICZαA。

6.如权利要求4所述的重组菌株，其特征在于，采用的宿主菌为毕赤酵母X33。

7.权利要求4所述重组载体或重组菌株在生产权利要求1所述漆酶突变体中的应用。

<...

【技术特征摘要】

1.一种漆酶突变体，其特征在于，所述漆酶突变体氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.权利要求1所述漆酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq idno.4所示。

4.包含权利要求2所述编码基因的重组载体或重组菌株。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，采用的表达质粒为ppicz...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辉，佟新伟，张法玲，王兴吉，郭庆文，曹世源，
申请(专利权)人：山东隆科特酶制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：