【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学与临床医学领域，涉及一种靶向igf-1r的核酸适配体序列及其在制备诊断和治疗甲状腺相关眼病的药物或者制剂中的应用。
技术介绍
1、甲状腺相关性眼病(tao)是以眼球后及眶周组织的浸润性病变为特征的器官特异自身免疫性疾病，常表现为突眼、眼睑退缩、复视等，严重者甚至会危及视力，导致失明。据调查，有30％-50％的gd患者发生明显的眼眶病变，是甲状腺疾病最常见的甲状腺外表现之一。在tao的早期治疗中，常针对恢复甲状腺功能进行用药，尽管患者的眼部症状随着药效的延续有时会相对改善，但部分患者在甲状腺功能恢复正常后眼部症状仍旧继续发展，导致治疗效果不确定性。目前有关甲状腺相关性眼病的治疗方式主要包括药物治疗、放射治疗和手术治疗。常用的一线药物治疗主要包括糖皮质激素、补硒治疗等，然而由于缺少明确的治疗靶点，传统的药物治疗通常具有较明显的副作用。
2、igf-1r是一种异四聚体蛋白，广泛表达于多种细胞表面，参与调控细胞的增殖与代谢。它属于酪氨酸激酶受体，由两个亚基组成：igf-1rα包含了配体结合域，而igf-1rβ则包含了酪氨酸磷酸化区域，主要参与信号传递。igf-1r参与一系列细胞反应的信号转导，包括凋亡的调控。igf-1r受体信号通路已被多项实验证实在自身免疫病中的发病中发挥作用，而状腺相关性眼病发病机制复杂，目前认为其主要与免疫系统的紊乱有关。研究表明，从tao患者眼眶成纤维细胞(of)表面igf-1r表达是正常人群的3倍，而tao患者血清中的可溶性igf-1r含量与正常人没有明显差异，说明眼眶局部表
3、核酸适配体，又称化学抗体，具有精准的靶向性，由单链的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸构成。核酸适配体能够通过自身折叠所形成的茎环、凸起、发夹、假结或g-四联体等构结合其靶标上的互补空间结构，实现特异性识别功能。它的靶标可以是蛋白质、多肽、核酸、氨基酸、细胞，甚至是一些金属离子等。此外，核酸适配体具有能够体外大量合成、价格便宜、稳定性好、亲和力高、便于储存、易于编辑等优点而被广泛用于检测和靶向药物合成领域中。同时，由于核酸适配体分子量小，不易发生免疫反应，且单链dna的化学稳定性好，变性与复性可逆，易于长期保存和室温运输，是理想的靶向分子。由于靶点明确，筛选得到的核酸适配体可以针对不同细胞和组织中表达的相同靶点进行识别，能够用于靶点的检测和针对靶点的治疗。目前尚无针对igf-1r的特异性核酸适配体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种亲和力高的靶向igf-1r的核酸适配体及其应用。
2、实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一种靶向igf-1r的核酸适配体，包括如seq id no.1～seq id no.3所示的核苷酸；或者在seq id no.1～seq id no.3的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变后获得的具有相同功能的核酸适配体的衍生物；
4、seq id no.1：
5、cagcaccgtcaactgaatctgcacgttaggatcctttcttcggctggttcgccacggtgatgcgatggagatgt；
6、seq id no.2：
7、cagcaccgtcaactgaataccagctgtgccaccgggagacttggaagtcgtacgggtagtgatgcgatggagatgt；
8、seq id no.3：
9、cagcaccgtcaactgaatagccacaccgccgggagagacgcgtacgggacagtttacagtgatgcgatggagatgt。
10、优选的，上述化学修饰或碱基的改变包括磷酸化、甲基化、氨基化、羧基化、巯基化或同位素化中的一种或几种。
11、优选的，上述化学标记包括生物素、亲和素、荧光基团、放射性物质、地高辛、酶、抗体、蛋白、多肽、高分子、纳米发光材料或其他任何治疗性物质中的一种或几种。
12、优选的，上述核酸适配体的核苷酸序列与seq id no.1～seq id no.16的同源性在60％以上。
13、优选的，所述核苷酸包括核糖核苷酸和肽核酸。
14、优选的，所述在seq id no.1～seq id no.3的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变后获得的具有相同功能的核酸适配体的衍生物包括：
15、seq id no.4(igf-1r-apt4-3)：
16、accgccgggagagacgcgtacggg；
17、seq id no.5(igf-1r-apt1-1)：
18、gcaccgtcaactgaatctgcacgttaggatcctttcttcggctggttcgccacggtga；
19、seq id no.6(igf-1r-apt1-2)：
20、gtcaactgaatctgcacgttaggatcctttcttcggctggttcgccac；
21、seq id no.7(igf-1r-apt1-3)：
22、tctgcacgttaggatcctttcttcggctgg；
23、seq id no.8(igf-1r-apt1-4)：
24、tgcacgttaggatcctttcttcggct。
25、本专利技术还要求保护一种用于检测igf-1r的试剂盒，包含所述靶向igf-1r的核酸适配体。
26、本专利技术还要求保护一种分子探针，包含所述靶向igf-1r的核酸适配体。
27、本专利技术还要求保护包含所述靶向igf-1r的核酸适配体在诊断试剂、分子影像探针或者靶向介质中的应用。
28、本专利技术还要求保护包含所述靶向igf-1r的核酸适配体在设计和制备检测、诊断和治疗与igf-1r相关的疾病的制剂中的应用。
29、优选的，igf-1r相关的疾病包括graves’病、甲状腺相关性眼病或甲状腺癌。
30、本专利技术使用核酸适配体文库并采用selex技术筛选核酸适配体，再利用慢病毒颗粒plvx-puro-igf-1r感染293t细胞，利用嘌呤霉素筛选具有嘌呤霉素抗性的细胞。所得到的细胞利用有限稀释法，铺板96孔板，筛选单克隆细胞。筛选到的单克隆细胞株经wb确认，具有igf-1r过表达效果，该细胞株命名为293t-igf-1r稳转细胞株。以此设置，正筛靶标和负筛靶标，当293t-igf-1r稳转株细胞融合度达到90％后去除高糖完全培养基，经历3次pcr扩增后，取一根nap-5核酸纯化柱进行孵育筛选，使用酶标仪在260nm吸光度参数下测定溶液中核酸适配体的浓，完成第一轮筛选，在每一轮筛选之后增加筛选的压力：减少核酸适配体文库的用量、减少正筛细胞用量和正筛时间，增加负筛细胞用量和负筛时间、增加孵育后洗涤次本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向IGF-1R的核酸适配体，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示的任意一个核苷酸；或者在SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变后获得的具有相同功能的核酸适配体的任意一个衍生物；
2.根据权利要求1所述靶向IGF-1R的核酸适配体，其特征在于，所述化学修饰或碱基的改变包括磷酸化、甲基化、氨基化、羧基化、巯基化或同位素化中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述靶向IGF-1R的核酸适配体，其特征在于，所述化学标记包括生物素、亲和素、荧光基团、放射性物质、地高辛、酶、抗体、蛋白、多肽、高分子、纳米发光材料或其他任何治疗性物质中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述靶向IGF-1R的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列与SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.16的同源性在60％以上。
5.根据权利要求1所述靶向IGF-1R的核酸适配体，其特征在于，所述在SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3的基础上进行化学修饰、化学标记或
6.一种用于检测IGF-1R的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1-5任一项所述靶向IGF-1R的核酸适配体。
7.一种分子探针，其特征在于，包含如权利要求1-5任一项所述靶向IGF-1R的核酸适配体。
8.如权利要求1-5任一项所述靶向IGF-1R的核酸适配体在诊断试剂、分子影像探针或者靶向介质中的应用。
9.如权利要求1-5任一项所述靶向IGF-1R的核酸适配体在设计和制备检测、诊断和治疗与IGF-1R相关的疾病的制剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，IGF-1R相关的疾病包括Graves’病、甲状腺相关性眼病或甲状腺癌。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向igf-1r的核酸适配体，其特征在于，包括如seq id no.1～seq id no.3所示的任意一个核苷酸；或者在seq id no.1～seq id no.3的基础上进行化学修饰、化学标记或碱基的改变后获得的具有相同功能的核酸适配体的任意一个衍生物；
2.根据权利要求1所述靶向igf-1r的核酸适配体，其特征在于，所述化学修饰或碱基的改变包括磷酸化、甲基化、氨基化、羧基化、巯基化或同位素化中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述靶向igf-1r的核酸适配体，其特征在于，所述化学标记包括生物素、亲和素、荧光基团、放射性物质、地高辛、酶、抗体、蛋白、多肽、高分子、纳米发光材料或其他任何治疗性物质中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述靶向igf-1r的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列与seq id no.1～seq id no.16的同源性在60％以上。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊炜，谢冰雨，曹家敏，张凤，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：
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