具有改变特性的α-淀粉酶变异体制造技术

本发明专利技术涉及具有改变特性的α

【技术实现步骤摘要】
具有改变特性的
α
‑
淀粉酶变异体
[0001]本申请是申请日为2005年07月05日，申请号为“201610851835.7”、名称为“具有改变特性的α
‑
淀粉酶变异体”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶的变异体(突变体)，该变异体具有α
‑
淀粉酶活性且相对于所述亲本α
‑
淀粉酶表现出至少一种下列特性改变：底物特异性，底物结合，底物裂解方式，热稳定性，pH活性谱(profile)，pH稳定性谱，氧化稳定性，Ca
2+
依赖性，pI减少和增加以及改进的洗涤效果，比活，在例如，高温和/或低/高pH条件下，特别是在低钙浓度下的稳定性，和在洗涤剂(detergent)存在下的稳定性，例如在洗涤剂中的贮存稳定性。本专利技术的变异体适合于淀粉转化，乙醇生产，衣物洗涤，盘子洗涤，硬表面清洁，纺织品脱浆(desizing)，和/或甜味剂生产。

技术介绍

[0003]α
‑
淀粉酶(α
‑
1,4
‑
葡聚糖
‑4‑
葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)由一组酶构成，它催化淀粉和其它直链和支链1,4
‑
糖苷键寡糖和多糖的水解。
[0004]本专利技术的目的是提供特别适用于洗涤剂用途的改进α
‑
淀粉酶。
[0005]本专利技术的概述
[0006]本专利技术的目的是提供Termamyl
‑
样淀粉酶，与相应的亲本α
‑
淀粉酶，即，未突变的α
‑
淀粉酶相比该变异体具有α
‑
淀粉酶活性且相对于所述亲本α
‑
淀粉酶表现出至少一种上述特性改变。
[0007]具体地，本专利技术涉及如下各项：
[0008]1.亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶的变异体，其包含在选自如下组中的一个或多个位置改变：
[0009]26,30,33,82,37,106,118,128,133,149,150,160,178,182,186,193,203,214,231,256,257,258,269,270,272,283,295,296,298,299,303,304,305,311,314,315,318,319,339,345,361,378,383,419,421,437,441,444,445,446,447,450,461,471,482,484,
[0010]其中
[0011](a)改变是独立地
[0012](i)在占据该位置的氨基酸下游插入氨基酸，
[0013](ii)缺失占据该位置的氨基酸，或
[0014](iii)用不同的氨基酸取代占据该位置的氨基酸，
[0015](b)该变异体具有α
‑
淀粉酶活性，和
[0016](c)各位置相应于具有亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶的氨基酸序列的亲本α
‑
淀粉酶的氨基酸序列位置，该亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶具有SEQ ID NO:12所示的AA560的氨基酸序列。
[0017]2.项1的变异体，其中该突变是：
[0018]R26S,D30N,N33D,R82H,K37T,N106D,K118Q,N128Y,G133E,A,G149A,N,N150H,Q,Y160F,Y178F,G182T,G186A,T193S,N,D,E,Q,Y203L,V214I,T,D231N,G256K,T257I,G258D,K269S,Q,N270F,Y,D,L272I,V,A,N283D,Y295F,N,D,Q,E,N296K,Q,E,Y298F,H,N299F,Y,Q,T,S303Q,K,Y304F,R,K,G305D,Q311N,Q,K,R,T,S,Y,F,N314D,S,T,Q,G315N,S,T,V318L,Q319E,K,S,T,A339S,T,E345N,R,Q361E,G378K,K383R,T419N,H421Y,N437H,F441L,R444E,Y,N445Q,K446R,A447Y,V450T,T461P,N471E,W482Y,N484Q。
[0019]3.项1
‑
2的变异体，其中该变异体在一个或多个甲硫氨酸残基上具有额外的突变。
[0020]4.项3的变异体，其中该甲硫氨酸残基是：
[0021]M9,M10,M116,M202,M208,M261,M309,M323,M382,M410,M430,和M440。
[0022]5.项4的变异体，其中该突变是：
[0023]M9L,I,M10L,M105L,I,F,M116N,D,L,I,F,W,R,K,M202I,L,V,T,M208F,Y,L,I,M261L,I,M309L,I,M323L,I,S,T,A,Q,E,N,D,M382L,I,Y,F,K,M410L,I,V,M430L,I,和M440L,I,F,Y。
[0024]6.项1
‑
5的变异体，其中该变异体具有一个或多个下列突变：
[0025]M9L+M202I,
[0026]M9L+M202I+M323T,
[0027]M9L+M202I+323T+M382Y,
[0028]M9L+M202I+Y295F+A339S,
[0029]M9L+M202I+Y295F,
[0030]M9L+M202I+A339S,
[0031]M9L+M202I+Y295F+A339S,
[0032]M9L+M202I+Y295F+A339S+E345R,
[0033]M9L+G149A+M202I+Y295F+A339S+E345R,
[0034]M9L+M202L,
[0035]M9L+M202L+M323T,
[0036]M9L+M202L+M232T+M382Y,
[0037]M9L+M202L+Y295F+A339S,
[0038]M9L+M202L+Y295F,
[0039]M9L+M202L+A339S,
[0040]M9L+M202L+Y295F+A339S,
[0041]M9L+M202L+Y295F+A339S,E345R,
[0042]M9L+G149A+M202L+Y295F+A339S+E345R,
[0043]M9L+M202T,
[0044]M9L+M202T+M323T,
[0045]M9L+M202T+M323T+M382Y,
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶的变异体，其包含在选自如下组中的一个或多个位置改变：26,30,33,82,37,106,118,128,133,149,150,160,178,182,186,193,203,214,231,256,257,258,269,270,272,283,295,296,298,299,303,304,305,311,314,315,318,319,339,345,361,378,383,419,421,437,441,444,445,446,447,450,461,471,482,484,其中(a)改变是独立地(i)在占据该位置的氨基酸下游插入氨基酸，(ii)缺失占据该位置的氨基酸，或(iii)用不同的氨基酸取代占据该位置的氨基酸，(b)该变异体具有α
‑
淀粉酶活性，和(c)各位置相应于具有亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶的氨基酸序列的亲本α
‑
淀粉酶的氨基酸序列位置，该亲本Termamyl
‑
样α
‑
淀粉酶具有SEQ ID NO:12所示的AA560的氨基酸序列。2.权利要求1的变异体，其中该突变是：R26S,D30N,N33D,R82H,K37T,N106D,K118Q,N128Y,G133E,A,G149A,N,N150H,Q,Y160F,Y178F,G182T,G186A,T193S,N,D,E,Q,Y203L,V214I,T,D231N,G256K,T257I,G258D,K269S,Q,N270F,Y,D,L272I,V,A,N283D,Y295F,N,D,Q,E,N296K,Q,E,Y298F,H,N299F,Y,Q,T,S303Q,K,Y304F,R,K,G305D,Q311N,Q,K,R,T,S,Y,F,N314D,S,T,Q,G315N,S,T,V318L,Q319E,K,S,T,A339S,T,E345N,R,Q361E,G378K,K383R,T419N,H421Y,N437H,F441L,R444E,Y,N445Q,K446R,A447Y,V450T,T461P,N471E,W482Y,N484Q。3.权利要求1
‑
2的变异体，其中该变异体在一个或多个甲硫氨酸残基上具有额外的突变。4.权利要求3的变异体，其中该甲硫氨酸残基是：M9,M10,M116,M202,M208,M261,M309,M323,M382,M410,M430,和M440。5.权利要求4的变异体，其中该突变是：M9L,I,M10L,M105L,I,F,M116N,D,L,I,F,W,R,K,M202I,L,V,T,M208F,Y,L,I,M261L,I,M309L,I,M323L,I,S,T,A,Q,E,N,D,M382L,I,Y,F,K,M410L,I,V,M430L,I,和M440L,I,F,Y。6.权利要求1
‑
5的变异体，其中该变异体具有一个或多个下列突变：M9L+M202I,M9L+M202I+M323T,M9L+M202I+323T+M382Y,M9L+M202I+Y295F+A339S,M9L+M202I+Y295F,M9L+M202I+A339S,M9L+M202I+Y295F+A339S,M9L+M202I+Y295F+A339S+E345R,M9L+G149A+M202I+Y295F+A339S+E345R,M9L+M202L,
M9L+M202L+M323T,M9L+M202L+M232T+M382Y,M9L+M202L+Y295F+A339S,M9L+M202L+Y295F,M9L+M202L+A339S,M9L+M202L+Y295F+A339S,M9L+M202L+Y295F+A339S,E345R,M9L+G149A+M202L+Y295F+A339S+E345R,M9L+M202T,M9L+M202T+M323T,M9L+M202T+M323T+M382Y,M9L+M202T+Y295F+A339S,M9L+M202T+Y295F,M9L+M202T+A339S,M9L+M202T+Y295F+A339S,M9L+M202T+Y295F+A339S+E345R,M9L+G149A+M202T+Y295F+A339S+E345R,M9L+G149A+M202I+V214T+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R,M9L+G149A+M202L+V214I+Y295F+M323T+A339S+E345R+M382Y,M9L+G149A+G182T+G186A+M202I+V214I+Y295F+N299Y+M323T+A339S,M9L+G149A+G182T+G186A+M202L+T257I+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R,M9L+G149A+M202L+V214T+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R,M9L+G149A+M202I+V214I+Y295F+M323T+A339S+E345R+M382Y,M9L+G149A+G182T+G186A+M202L+V214I+Y295F+N299Y+M323T+A339S,M9L+G149A+G182T+G186A+M202I+T257I+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R,M9L+G149A+M202I+V214T+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R+N471E,M9L+G149A+M202L+V214I+Y295F+M323T+A339S+E345R+M382Y+N471E,M9L+G149A+G182T+G186A+M202I+V214I+Y295F+N299Y+M323T+A339S+N471E,M9L+G149A+G182T+G186A+M202L+T257I+Y295F+N299Y+M323T+A339S+E345R+N471E,M202L+M105F+M208F,G133E+M202L+Q361E,G133E+M202L+R444E,M202L+Y295F,M202L+A339S,M202L+M323T,M202L+M323T+M309L,M202L+M323T+M430I,M202L+V214T+R444Y,M202L+N283D+Q361E,
M202L+M382Y+K383R,M202L+K446R+N484Q,M202I+Y295F,M202I+A339S,M202I+M105F+M208F,G133E+M202I+Q361E,G133E+M202I+R444E,M202I+M202I+M323T,M202I+M202I+M323T+M309L,M202I+M323T+M430I,M202I+V214T+R444Y,M202I+N283D+Q361E,M202I+M382Y+K383R,M202I+K446R+N484Q,M202V+M105F+M208F,G133E+M202V+Q361E,G133E+M202V+R444E,M202V+M323T,M202V+M323T+M309L,M202V+M323T+M430I,M202V+M323T+M9L,M202V+V214T+R444Y,M202V+N283D+Q361E,M202V+M382Y+K383R,M202V+K446R+N484Q,M202T+M105F+M208F,G133E+M202T+Q361E,G133E+M202T+R444E,M202T+Y295F,M202T+A339S,M202T+M323T,M202T+M323T+M309L,M202T+M323T+M430I,M2...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡斯滕安德森，亨里克奥斯特达尔，彼得斯卡格林德，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：