一种无外源氨基酸作用下高产L-甲硫氨酸的重组大肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种无外源氨基酸作用下高产L

【技术实现步骤摘要】
一种无外源氨基酸作用下高产L
‑
甲硫氨酸的重组大肠杆菌及其应用
(一)

[0001]本专利技术涉及一种高产L
‑
甲硫氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法，以及在微生物发酵制备L
‑
甲硫氨酸中的应用。
(二)
技术介绍

[0002]L
‑
甲硫氨酸(L
‑
methionine)，又名L
‑
蛋氨酸，是人体八种必需氨基酸中唯一的含硫氨基酸，在生物体代谢中起着关键作用。含硫氨基酸最早于1847年被Fleitmann在实验室中所发现，之后Osborne在高纯度蛋白质中确定了2种含硫氨基酸，并将其中的一种归为半胱氨酸。1922年，Mueller从蛋白中分离获得了另一种含硫氨基酸，随后在1928年Barger和Coyne确定了该含硫氨基酸的化学式并正式命名为L
‑
甲硫氨酸。L
‑
甲硫氨酸因其独特的结构和性质被广泛应用于食品、饲料和医药等领域。
[0003]甲硫氨酸的生产方法主要分为化学合成法，生物酶催化法以及微生物发酵法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无外源氨基酸作用下高产L
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甲硫氨酸的重组大肠杆菌，其特征在于所述重组大肠杆菌以E.coli W3110 M2/pAm为出发菌株，在基因组上对lysA基因进行原位回补，并将lysA基因的启动子替换为PfliA启动子，再在pAm的质粒上过表达gltA基因和malY基因获得的；所述出发菌株E.coli W3110 M2/pAm基因型为E.coli W3110 ΔmetJ ΔmetI ΔlysA Trc
‑
metH Trc
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metF Trc
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cysE Trc
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serB Trc
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serC/pA*Ham，质粒pA*Ham为用trc99A质粒的trc强启动子增强metA
fbr
、yjeH、serA
fbr
基因。2.如权利要求1所述重组大肠杆菌，其特征在于所述PfliA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述lysA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，gltA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，malY基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.如权利要求1所述重组大肠杆菌，其特征在于所述重组大肠杆菌按如下步骤构建：(1)以E.coli W3110 M2/pAm为出发菌株，应用CRISPR
‑
Cas9基因编辑技术将该工程菌基因组中lysA基因进行原位回补，得到工程菌E.coli W3110 M2
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lysA
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ATG/pAm；(2)应用CRISPR
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Cas9基因编辑技术将工程菌E.coli W3110 M2
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lysA
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ATG/pAm基因组中lysA基因的启动子替换为PfliA启动子，得到工程菌E.coli W3110 M2
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PfliA
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lysA/pAm；(3)以菌株E.coli W3110 M2
‑
PfliA
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lysA/pAm为底盘菌株，在质粒上过表达大肠杆菌的gltA基因，将质粒转化到E.coli W3110 M2...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛坤，傅强，柳志强，周海岩，张博，汤晓玲，徐建妙，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：