一种基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法技术

本发明专利技术提出了一种基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法，该方法包括如下步骤：用地下新鞘氨醇菌的短链脱氢酶SR03构建得到表达CBR54的第一基因工程菌，将表达CBR54的第一基因工程菌分离纯化培养后得到表达短链羰基还原酶的第二基因工程菌，将第二基因工程菌冷冻干燥得到CBR54粗酶粉，以CBR54粗酶粉、GDH酶粉和NADH辅酶为催化剂，以环丙基羰基甲基

【技术实现步骤摘要】
一种基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法


[0001]本专利技术涉及生物化学
，具体而言，涉及一种基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法。

技术介绍

[0002]钙泊三醇改善局部皮肤角质增生和角化异常的作用，大多是用于寻常型银屑病或者由于各种银屑病处于稳定期状态导致的皮肤损害，对银屑病的局部皮损增生和炎症具有明显的改善作用，所以在临床上应用比较广。手性中间体2
‑
[(S)
‑2‑
羟基
‑2‑
环丙基)
‑1‑
乙硫基]‑
苯并噻唑(Ⅰ)是制备钙泊三醇的关键中间体，其手性纯度对合成制备钙泊三醇的纯度具有重要影响，原有方法采用金属化学催化，需要昂贵的金属试剂、反应条件较为苛刻，且产物光学纯度低，后处理困难。
[0003]来源于地下新鞘氨醇菌(Novosphingobium subterraneum)其表达的短链脱氢酶SR03(SDR03)是一种NADH/NADPH依赖的氧化还原酶，能将醛酮可逆性还原为手性醇，在催化不对称还原时具有高度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法，其特征在于，包括如下步骤：用地下新鞘氨醇菌的短链脱氢酶SR03构建得到表达CBR54的第一基因工程菌，将所述表达CBR54的第一基因工程菌分离纯化培养后得到表达短链羰基还原酶的第二基因工程菌，将所述第二基因工程菌冷冻干燥得到CBR54粗酶粉，以所述CBR54粗酶粉、GDH酶粉和NADH辅酶为催化剂，以所述环丙基羰基甲基
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苯并噻唑
‑2‑
硫醚为底物，加入缓冲液催化反应8
‑
24h，得到2
‑
[(S)
‑2‑
羟基
‑2‑
环丙基)
‑1‑
乙硫基]
‑
苯并噻唑，即得到所述钙泊三醇关键手性中间体。2.根据权利要求1所述的基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法，其特征在于，所述构建包括如下步骤：将所述地下新鞘氨醇菌的短链脱氢酶SR03进行密码子优化后克隆到载体上，得到重组质粒，将所述重组质粒转化到大肠杆菌表达宿主内，即得到所述表达CBR54的第一基因工程菌。3.根据权利要求2所述的基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法，其特征在于，所述载体为pET28a，所述大肠杆菌表达宿主为Bl21。4.根据权利要求1所述的基于短链羰基还原酶制备钙泊三醇关键手性中间体的方法，其特征在于，所述分离纯化培养包括如下步骤：将所述第一基因工程菌的单菌落接种于LB培养基内后加入异丙基
‑
β
‑
D
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硫代半乳糖吡喃糖苷0.25
‑
1mM于15
‑
30℃培养10
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娟，程国庆，刘雨晴，陆群，
申请(专利权)人：西南交通大学，
类型：发明
国别省市：