一种高效生产视黄酸的基因工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高效生产视黄酸的基因工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程领域。本发明专利技术以产视黄醛的酵母工程菌株为出发菌，利用基因整合技术或者导入重组表达质粒的方式，使得来源于酿酒酵母的醛脱氢酶编码基因在工程菌株内成功表达，参与到视黄酸的合成，实现以安全、高效的酵母为细胞工厂高效率地生产视黄酸。进一步通过增加拷贝数，并敲除甲羟戊酸途径转录抑制因子编码基因提高视黄酸的产量。利用本发明专利技术构建的工程菌株在摇瓶单相和两相发酵培养后合成视黄酸的产量，优于现有技术报道，具有良好的应用前景。本发明专利技术还提供了一种实现视黄酸胞外分泌的方法，在发酵过程中添加十二烷或橄榄油，使得合成的视黄酸分泌到胞外。胞外。胞外。

【技术实现步骤摘要】
一种高效生产视黄酸的基因工程菌及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程、代谢工程和微生物领域，特别涉及一种能实现视黄酸高产的基因工程菌的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]视黄酸(又称维甲酸retinoic acid，RA)是动物体内微生物A的代谢中间产物，β
‑
胡萝卜素在肠道被肠粘膜β
‑
胡萝卜素加氧酶氧化生成2个分子的视黄醇(也被广泛称为维生素A)，视黄醇被吸收入体内后被氧化成视黄醛，再进一步被氧化成视黄酸。
[0003]类视黄醇是视黄醇及其衍生物的集合，它以活性代谢物视黄酸(RA)的形式参与各种生理功能，如细胞生长、分化、器官生成、生殖和免疫反应。视黄酸作为核视黄酸受体的配体，在包括皮肤发育在内的许多发育过程中调节靶基因的转录活性，因此视黄酸常用于痤疮和其他皮肤病的临床治疗。
[0004]目前用于制备类视黄醇的化学合成方法具有一些不理想的特性，比如高能耗、复杂的纯化步骤和/或产生副产物。利用微生物进行异源合成是一种经济且环保的方式，目前已在大肠杆菌和酿酒酵母中实现了视黄本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效生产视黄酸的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以产视黄醛的酵母工程菌株为出发菌，其染色体上整合了醛脱氢酶编码基因；或者，所述基因工程菌以产视黄醛的酵母工程菌株为出发菌，宿主菌内含有包含了醛脱氢酶编码基因的重组表达质粒；所述醛脱氢酶编码基因来源于酿酒酵母。2.如权利要求1所述的高效生产视黄酸的基因工程菌，其特征在于，所述醛脱氢酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1或2所述的高效生产视黄酸的基因工程菌，其特征在于，所述醛脱氢酶编码基因的拷贝数为1～4个。4.如权利要求1或2所述的高效生产视黄酸的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的甲羟戊酸途径转录抑制因子基因被敲除。5.如权利要求1所述的高效生产视黄酸的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括：以产视黄醛的酵母工程菌株为出发菌，通过整合质粒将若干个拷贝的醛脱氢酶编码基因整合到工程菌株染色体上，获得高效生产视黄酸的基因工程菌；或者，以产视黄醛的酵母工程菌株为宿主菌，导入包含了醛脱氢酶编码基因的重组表达质粒。6.如权利要求5所述的高效生产视黄酸的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的醛脱氢酶编码基因克隆到pUMRI
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DPP1的P
GAL7
后面的多克隆位点，获得重组质粒pUMRI
‑
DPP1
‑
HFD1；(2)将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的醛脱氢酶编码基因克隆到pUMRI
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DPP1
‑
HFD1的P
GAL2
后面的多克隆位点，获得重组质粒pUMRI
‑
DPP1
‑
HFD1
‑
HFD1；(3)将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的醛脱氢酶编码基因克隆到pUMRI
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶丽丹，于洪巍，胡琼越，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：